Dakiki Thawing人B淋巴细胞系

"Dakiki Thawing人B淋巴细胞系
细胞背景资料：B淋巴细胞；EBV转染
细胞形态：淋巴母细胞样
Dakiki Thawing人B淋巴细胞系
细胞生长：悬浮
细胞培养方面注意的几点：无菌意识要强：实验进行前，超净台以紫外灯照射３０分钟灭菌，以７０%ethanol擦拭无菌操作抬面，并开启超净工作台风扇运转数分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以７０%ethanol擦拭无菌操作抬面。无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如支架、吸管等公用物品可以暂时放置，其它个人实验用品用完应立即拿出。实验用品以７０%乙醇擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在中央无菌区域，一般勿在边缘区域操作。小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约４５°角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。选择正确的培养基：不同的细胞可能培养基不同，甚至不同的文献可能对相同的细胞培养基成分也是可能不同的。如我当时培养神经干细胞，有文献就选用neurobase培养基，而我的实验目的主要是做抗氧化和氧化方面的，而这种培养基中含有抗氧化剂成分，此时，我就不得不选择另外一种不含抗氧化剂的培养基。瓶装血清一定要逐步解冻:４℃冰箱全溶后再分装，在溶解过程中须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与成分均一，减少沉淀的发生。勿直接由–２０℃直接至３７℃解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。热灭活是指５６℃，３０分钟加热已完全解冻之血清。水浴锅升到５６℃后，将血清放入，待温度升高到５６℃后计时，一般５分钟左右规则摇晃均匀一次。此热处理之目的是使血清中之补体成份去活化。除非必须，一般不要作此热处理，因为会造成沉淀物之显著增多，且会影响血清之品质。注意更换新血清(包括不同批次)对细胞的影响。
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支)
细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。
冻存和复苏的原则：慢冻快融》当细胞冷到零度以下，可以产生以下变化：细胞器脱水，细胞中可溶性物质浓度升高，并在细胞内形成冰晶。如果缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水，细胞内不致产生大的冰晶；相反，结晶就大，大结晶会造成细胞膜、纲胞器的损伤和破裂。复苏过程应快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重结晶。慢冻程序》1.标准程序：采用细胞冻存器》当温度在-25℃以上时，1~2℃/min；当温度达-25℃以下时，5~10℃/min；当温度达-100℃时，可迅速放入液氮中。2.简易程序：将冷冻管（管口要朝上）放入纱布袋内，纱布袋系以线绳，通过线绳将纱布袋固定于液氮罐罐口，按每分钟温度下降1~2℃的速度，在40min内降至液氮表面过夜，次晨投人液氮中。3.传统程序：冷冻管置于4℃10分钟→-20℃30分钟→-80℃16~18小时（或隔夜）→液氮槽长期储存。细胞冻存方法：1.预先配制冻存液》（1）8%DMSO+细胞生长液（92%血清）2.取对数生长期细胞，经胰酶消化后，加入适量冻存液，用吸管吹打制成细胞悬液（1×10(6)~5×10(6)细胞/ml）。3.加入1ml细胞于冻存管中，密封后标记冷冻细胞名称和冷冻日期。液氮长期保存。保存细胞的复苏方法：1.快速解冻》冻存细胞从液氮中取出后，立即放入37℃水浴中，轻轻摇动冷冻管，使其在1分钟内全部融化（不要超过3分钟）。2.解冻后的细胞可直接接种到含完全生长培养液的细胞培养瓶中直接进行培养，24小时后再用新鲜完全培养液替换旧培养液，以去除DMSO。3.如果细胞对冷冻保护剂特别敏感解冻后的细胞应先通过离心去除冷冻保护剂，然后再接种到含完全生长培养液的培养瓶中。
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
Dakiki Thawing人B淋巴细胞系
细胞生长特性：悬浮
细胞冻存基本方法：１．细胞：选对数生长期细胞，收集细胞２４小时前换液一次。２．计数：按常规方法把细胞制成细胞悬液，计数，令细胞密度达５×１０(６)/ml，离心去上清，吸入离心管中。３．冻存液：先用培养液９分＋DMSO １分（或甘油）配成１０％的DMSO冻存液，按上法一滴滴加入离心管中，然后用吸管轻轻吹打令细胞重悬。４．分装：分装入无菌安剖中，每安剖加１.５毫升细胞悬液。５．封口：用塑料安剖时拧紧瓶口即可；如用火焰封闭安剖口后，仔细检查，定要封严，必要时可浸入蓝色液中观察，为安全起见，把安剖缝入纱布小袋中，以防液氮浸入后，融解时因受热发生爆炸伤人；纱袋一端系以线绳，末端扎有小牌，注明：细胞名称，冻存日期，以便日后查找。细胞株(系)的使用，为医学研究和测试工作带来了极大的方便。但细胞的传代是有限制的，长期连续传代的细胞，不仅消耗大量的人力和物力，而且细胞的生长与形态等会有一定退变或转化，因而细胞失去原有的遗传特性，有时还会由于细胞污染而造成传代中断，种子丢失。因此，在实际工作中常需冻存一定数量的细胞，以备替换使用。细胞冷冻与复苏是细胞培养 室的常规工作和通用技术。
细胞形态特性：详见细胞说明书
HCEC细胞系相关产品：HARAB细胞、VSC4.1细胞、B104 [Rat neuroblastoma]细胞
ADR-RES细胞系相关产品：SG231细胞、B-16细胞、Hs600T细胞
UK Pan-1细胞系相关产品：HPMEC细胞、DAN-G细胞、RBE4细胞
102PT细胞系相关产品：KMH2细胞、COLO 16细胞、C2C12细胞
EOC20细胞系相关产品：COV-434细胞、AgC11x3A细胞、Madin-Darby Canine Kidney细胞
LLC-PK-1细胞系相关产品：KHYG细胞、INS-1细胞、HEK293EBNA细胞
NCI-H2135细胞系相关产品：DV90细胞、TGBC11T细胞、ISHI细胞
NCI-H1944细胞系相关产品：RBL2H3细胞、RA细胞、NCI-H596细胞
NE1细胞系相关产品：LS 180细胞、OV-2008细胞、MEC-1细胞
L132细胞系相关产品：SW 579细胞、UCLA SO M14细胞、SK-LMS-1细胞
EPC细胞系相关产品：M059J细胞、SPCA1细胞、HCC1419细胞
KU 19-19细胞系相关产品：Bovine Turbinate细胞、NCIH2141细胞、Caco-2BBe细胞
CEMC7细胞系相关产品：HPDLF细胞、Jijoye细胞、H.Ep. #2细胞
MC-3T3-E1细胞系相关产品：NUGC-4细胞、Mo 59J细胞、NCI-SNU-182细胞
WiDrTC细胞系相关产品：SNU-251细胞、SNU387细胞、OCI-LY-7细胞
CCD841CoTr细胞系相关产品：A-72细胞、LC2/Ad细胞、SGC-7901细胞
NCIH740细胞系相关产品：95C细胞、NCI-H3255细胞、CCC-HHM-2细胞
brain-derived Endothelial cells.3细胞系相关产品：NH-6细胞、RPMI 7951细胞、OCI-Ly 3细胞
H-28细胞系相关产品：NCIH2126细胞、NCI-H2228细胞、UACC-812细胞
NCI-H1819细胞系相关产品：NCIH2110细胞、KYSE 510细胞、CNE1细胞
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CCD841CoTr细胞系相关产品：A-72细胞、MFM223细胞、U-343细胞
RBVEC细胞系相关产品：OCI AML2细胞、HDLM2细胞、HBZY 1细胞
NCI660细胞系相关产品：87 MG细胞、NCI-H23细胞、MV 4;11细胞
CAL51细胞系相关产品：MDA-MB231细胞、HEK/293细胞、HSC细胞
NTC200细胞系相关产品：SUPB15细胞、SK-ES细胞、P815细胞
Dakiki Thawing人B淋巴细胞系
HMC细胞系相关产品：CEM-CCRF (CAMR)细胞、624 MEL细胞、GM2132细胞
SW 839细胞系相关产品：EL 4细胞、TT细胞、FU-97细胞
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Roswell Park Memorial Institute 1788细胞系相关产品：EM3细胞、SGC7901/DDP细胞、C3H10T1/2细胞
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H3255_DA细胞系相关产品：HCS2/8细胞、KPL-4细胞、OCI Ly3细胞
hRPTC细胞系相关产品：PANC0504细胞、Medical Research Council cell strain-9细胞、KCL-22细胞
LK2细胞系相关产品：H3396细胞、PaTu 8988 S细胞、PC-3M 2B4细胞
SU4细胞系相关产品：NW38细胞、MCA-38细胞、CAL-39细胞
CF-1 MEF细胞系相关产品：Centre Antoine Lacassagne-62细胞、RM1细胞、NCI-H-82细胞
H-128细胞系相关产品：NCI-H125细胞、UO-31细胞、H-9细胞
Dakiki Thawing人B淋巴细胞系
LS174细胞系相关产品：HIBEC细胞、33604细胞、H1838细胞
B16F0细胞系相关产品：HEK-293-FT细胞、NCI H2106细胞、MLA144细胞
PFSK-1细胞系相关产品：GT38细胞、Tu-212细胞、Roswell Park Memorial Institute 8402细胞
OVCA433细胞系相关产品：EC-9706细胞、JCA-1细胞、NCI-H2029细胞
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H4-II-E细胞系相关产品：Hmy.2 CIR细胞、PANC 203细胞、624细胞
HCC-94细胞系相关产品：RPE D407细胞、8226/S细胞、H2081细胞
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