EM-3 Thawing人髓系白血病细胞系

"EM-3 Thawing人髓系白血病细胞系
细胞背景资料：髓系白血病；女性
细胞形态：淋巴母细胞样
EM-3 Thawing人髓系白血病细胞系
细胞生长：悬浮
细胞传代注意事项：①传代培养时注意无菌操作并防止细胞间的交叉污染。所有操作尽量靠近酒精灯火焰。每次只进行一种细胞的操作。每种细胞使用一套器材；②每天观察细胞形态，掌握好细胞是否健康的标准：健康细胞的形态饱满，折光性好，生长致密时即可传代；③如发现细胞有污染迹象，应立即采取措施，一般应弃置污染的细胞，如果必须挽救，可加含有抗生素的BBS或培养基反复清洗，随后培养基中加入较大量的抗生素，并经常更换培养基。传代细胞的建系和维持：细胞系的维持通过换液传代再换液、再传代和细胞种子冻存来实现。对每一个细胞系来说都有其自身的特点，要做好建系的维持必须记录好细胞档案,换液传代和做好细胞系的管理工作。培养细胞的冻存及复苏：细胞低温冻存是培养室常规工作和通用技术。细胞冻存在-１９６℃液氮中，储存时间几乎是无限的。细胞冻存及复苏的原则是慢冻快融。
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支)
细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。
贴壁细胞传代实验准备事项：将15mL离心管、T25细胞培养瓶、PBS缓冲液、移液管、电动移液器等物品提前放入生物安全柜中，紫外照射30min消毒灭菌；细胞完全培养基、0.25%胰酶-0.02%EDTA从4℃冰箱中取出后，复温至室温，备用。贴壁细胞传代实验步骤：将准备好的培养基等物品用酒精消毒后放入安全柜中；从培养箱中取出待处理的细胞，在显微镜下观察细胞状态；用酒精消毒培养瓶，放入安全柜中；轻轻吸去细胞上清；加入2~3ml(PBS缓冲液)润洗一次，吸去上清；加入1mL(0.25%胰酶-0.02%EDTA)，轻轻晃匀、覆盖所有细胞后，置于37℃培养箱静置消化；消化1min左右，在显微镜下观察细胞消化情况；消化完全后，加3ml完全培养基终止；按比例将细胞悬液分装至培养瓶中；在显微镜下观察传代后的细胞密度及状态；将培养瓶放入培养箱中培养。注意事项：培养过程中需维持细胞处于对数生长期，80%左右即可传代，传代比例请参照说明书建议；消化时间不宜过长，大部分细胞回缩变圆并有少量细胞脱落即可中止消化，难消化的细胞可分次消化，每次时间不超过5min；培养过程中需要定期换液，一般细胞建议2~3天换液一次。
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
EM-3 Thawing人髓系白血病细胞系
细胞生长特性：悬浮
细胞培养过程中相关问题总结：悬浮性细胞应如何继代处理？一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中，稀释细胞浓度即可，若培养液太多时，可将培养角瓶口端稍微抬高，直到无法容纳为止。分瓶时取出一部份含细胞之培养液至另一新的培养角瓶，加入新鲜培养基稀释至适当浓度，重复前述步骤即可。欲将一般动物细胞离心下来，其离心速率应为多少转速？欲回收动物细胞，其离心速率一般为３００xg(约１,０００rpm)，５-１０分钟，过高之转速，将造成细胞死亡；细胞之接种密度为何？依照细胞株基本数据上之接种密度或稀释分盘之比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生长之一重要原因；细胞冷冻培养基之成份为何？动物细胞冷冻保存时最常使用的冷冻培养基是含５-１０%DMSO(dimethyl sulfoxide)和９０-９５%原来细胞生长用之新鲜培养基均匀混合之。注意：由于DMSO稀释时会放出大量热能，故不可将DMSO直接加入细胞液中，必须使用前先行配制完成；DMSO之等级和无菌过滤之方式为何？冷冻保存使用之DMSO等级，必须为Tissue culture grade之DMSO，其本身即为无菌状况，次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中，保存于４°C，避免反复冷冻解冻造成DMSO之裂解而释出有害物质，并可减少污染之机会。若要过滤DMSO，则须使用耐DMSO之Nylon材质滤膜；冷冻保存细胞之方法？冷冻保存方法一：冷冻管置于４°C ３０~６０分钟→ (-２０°C ３０分钟)→-８０°C １６~１８小时(或隔夜)→液氮槽vaporphase长期储存。冷冻保存方法二：冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降１-３°C至–８０°C以下，再放入液氮槽vapor phase长期储存。-２０°C不可超过１小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-８０°C冰箱中，惟存活率稍微降低一些；细胞欲冷冻保存时，细胞冷冻管内应有多少细胞浓度？冷冻管内细胞数目一般为１x１０(６)cells/ml vial，融合瘤细胞则以５x１０(６)cells/ml vial为宜；应如何避免细胞污染？细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等。严格之无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培养基配制是减低污染之方法；如果细胞发生微生物污染时，应如何处理？直接灭菌后丢弃之。
细胞形态特性：详见细胞说明书
CAKI1细胞系相关产品：Anip 973细胞、159 PT细胞、HTR8svn细胞
HCC1428细胞系相关产品：P-388细胞、CTLL-2细胞、NR8383.1细胞
Danio rerio Gill细胞系相关产品：SKG-3a细胞、343MG细胞、FHs74Int细胞
PA317细胞系相关产品：R 2 C细胞、Panc04.03细胞、H3396细胞
COS7细胞系相关产品：BALB/3T3 cl. A31细胞、HR1K细胞、Vx2细胞
Hs832T细胞系相关产品：PA I细胞、SCL I细胞、mIMCD-3细胞
HCC1806细胞系相关产品：OVCA420细胞、GM03569细胞、COV-434细胞
KHYG细胞系相关产品：Cates 1B细胞、OVCAR8/ADR细胞、H2172细胞
BRL细胞系相关产品：HEK293细胞、LAD 2细胞、Hs 445细胞
32D:cl3细胞系相关产品：Farage OL细胞、LS174细胞、HepG2/C3A细胞
NT2-D1细胞系相关产品：Lewis Lung细胞、SK-MES细胞、A253细胞
SW48细胞系相关产品：NCI-H2452细胞、LAN5细胞、RS4:11细胞
H446细胞系相关产品：SUIT 2细胞、OV-CA 432细胞、SF 767细胞
KYSE30细胞系相关产品：MCF7/WT细胞、Lymph Node Carcinoma of the prostate细胞、HCA7细胞
LICR-LON-HN6-R细胞系相关产品：751细胞、BC-024细胞、EA. hy 926细胞
DMS273细胞系相关产品：CF PAC-1细胞、H2591细胞、MILE SVEN1细胞
ssMCF7细胞系相关产品：Mc Coy细胞、NCI-H2106细胞、BEL/FU细胞
J82细胞系相关产品：Y1细胞、SW-480细胞、CAKI 1细胞
HCC1954细胞系相关产品：MFE280细胞、A549-Taxol细胞、SKO3细胞
X63-Ag8.653细胞系相关产品：LU451细胞、H-196细胞、SHIN3细胞
CWR22Rv1细胞系相关产品：NCI-H2110细胞、Det 562细胞、HME-1细胞
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231-luc细胞系相关产品：BTT739细胞、HCC-2185细胞、RPE1-hTERT细胞
OKa-C-1细胞系相关产品：RPMI-1788细胞、C33细胞、N-87细胞
3T3(A31)细胞系相关产品：MKN-1细胞、H-548细胞、PL-11细胞
HT3细胞系相关产品：FDC-P1细胞、HEK293EBNA细胞、OK细胞
EM-3 Thawing人髓系白血病细胞系
PK136细胞系相关产品：NFS60细胞、Vero-76细胞、Institute for Medical Research-90细胞
A253细胞系相关产品：RPE-hTERT细胞、ME16C细胞、LED-WiDr细胞
C4-1细胞系相关产品：IOSE80UBC细胞、HeLa S 3细胞、COR-L88细胞
MCMEC细胞系相关产品：IB-RS2细胞、HUT28细胞、PC-3/M细胞
HEK;293细胞系相关产品：HCC1954 BL细胞、B16/F1细胞、PaTu 8988 S细胞
HEK 293细胞系相关产品：WM266细胞、PaTu8988s细胞、LN382细胞
CSQT-2细胞系相关产品：Blotchy fibroblast-11细胞、COR-L88细胞、BT-474细胞
TALL 1细胞系相关产品：Michigan Cancer Foundation-12F细胞、SW837细胞、MPC-5细胞
T/G HA-VSMC细胞系相关产品：OVCAR-433细胞、PLC/PRF5细胞、NCI-H1563细胞
K562/ADP细胞系相关产品：SJRH-30细胞、TE-85 clone 5细胞、Renal Proximal Tubule Epithelial Cells/TERT-immortalized 1细胞
HNE-3细胞系相关产品：SK ES 01细胞、SK 1细胞、HOS-MNNG细胞
C22 (Clara)细胞系相关产品：EFM-192C细胞、HCC1833细胞、NCI/ADRRES细胞
MS-751细胞系相关产品：H-1184细胞、COLO.205细胞、H847细胞
MDA-MB-175VII细胞系相关产品：H-2108细胞、SF767细胞、BNL-HCC细胞
A9细胞系相关产品：NCIH1688细胞、H-1573细胞、A-10细胞
CEM-C1细胞系相关产品：Reuber H35细胞、AG06814-J细胞、Hs 729细胞
AML 12细胞系相关产品：Kit225 K6细胞、NCI-H1882细胞、NCIN87细胞
COLO 320 HSR细胞系相关产品：DR2R1610细胞、E0771细胞、H-498细胞
Psi2 DAP细胞系相关产品：NCIH128细胞、A9(Hamprecht)细胞、ML2细胞
V-79-4细胞系相关产品：HBZY 1细胞、C3H/10T1/2 clone 8细胞、A204细胞
Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-10细胞系相关产品：NHEK细胞、T-HEECs细胞、SV40-MES13细胞
DH 82细胞系相关产品：A549/DDP细胞、MEG01细胞、IMR 32细胞
H-1836细胞系相关产品：Colo699细胞、BJ [Human fibroblast]细胞、SK-N-AS细胞
NCI-H1563细胞系相关产品：HO-8910PM细胞、U87MG细胞、FHCRC-11细胞
OCI-Ly 19细胞系相关产品：SK-HEP-1细胞、UCLA RO-81-A-1细胞、J 82细胞
TE-8细胞系相关产品：Wien-133细胞、Daudi细胞、Wien 133细胞
Ca-Ski细胞系相关产品：LIM1215细胞、KPNRTBM1细胞、L-1210细胞
HOC-1细胞系相关产品：SCC 25细胞、Cloudman S91 melanoma clone M-3细胞、H-2023细胞
PATU-S细胞系相关产品：SHZ-88细胞、NCI-460细胞、SW620细胞
BNL 1ME A.7R.1细胞系相关产品：HCC2218细胞、SW 1573细胞、COLO 684细胞
NCI-H460细胞系相关产品：SK Mel28细胞、NCI-H1793细胞、SW 480细胞
TNC-1B12B4细胞系相关产品：Pa18C细胞、G-402细胞、U373MG细胞
H2172细胞系相关产品：alphaTC clone 6细胞、Med 341细胞、MKN74细胞
EM-3 Thawing人髓系白血病细胞系
VMRC-RCZ细胞系相关产品：SW-839细胞、H-358细胞、Panc02.03细胞
CHO-S细胞系相关产品：OPM-2细胞、NTera2 cl.D1细胞、KMB17细胞
C6661细胞系相关产品：MOLP-8细胞、THLE-3细胞、NS1细胞
MX1细胞系相关产品：BXPC3细胞、ASH-3细胞、Lu-65细胞
JTC-28细胞系相关产品：G 292 Clone A 141B1细胞、HSC2细胞、MD Anderson-Metastatic Breast-415细胞
T-cell Acute Lymphoblastic Leukemia-1细胞系相关产品：Hs 766细胞、H-676细胞、RPVSMC细胞
NCI-H1882细胞系相关产品：HOPC细胞、SEM细胞、SKCO-1细胞
MDCK-II细胞系相关产品：C-Lu-65细胞、MN-60细胞、HCC94细胞
SK-GT-2细胞系相关产品：D-407细胞、KP-N-RT-BM-1细胞、H-774细胞
Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-10细胞系相关产品：NHEK细胞、T-HEECs细胞、SV40-MES13细胞
Fetal Rhesus Kidney-4细胞系相关产品：IGR-OV1细胞、HOS TE85细胞、LAN-6细胞
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