OLN-93 大鼠胶质细胞系

"OLN-93 大鼠胶质细胞系
细胞背景资料：胶质细胞；自发永生；Wistar 
细胞形态：上皮细胞样 
细胞培养方面注意的几点：无菌意识要强：实验进行前，超净台以紫外灯照射３０分钟灭菌，以７０%ethanol擦拭无菌操作抬面，并开启超净工作台风扇运转数分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以７０%ethanol擦拭无菌操作抬面。无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如支架、吸管等公用物品可以暂时放置，其它个人实验用品用完应立即拿出。实验用品以７０%乙醇擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在中央无菌区域，一般勿在边缘区域操作。小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约４５°角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。选择正确的培养基：不同的细胞可能培养基不同，甚至不同的文献可能对相同的细胞培养基成分也是可能不同的。如我当时培养神经干细胞，有文献就选用neurobase培养基，而我的实验目的主要是做抗氧化和氧化方面的，而这种培养基中含有抗氧化剂成分，此时，我就不得不选择另外一种不含抗氧化剂的培养基。瓶装血清一定要逐步解冻:４℃冰箱全溶后再分装，在溶解过程中须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与成分均一，减少沉淀的发生。勿直接由–２０℃直接至３７℃解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。热灭活是指５６℃，３０分钟加热已完全解冻之血清。水浴锅升到５６℃后，将血清放入，待温度升高到５６℃后计时，一般５分钟左右规则摇晃均匀一次。此热处理之目的是使血清中之补体成份去活化。除非必须，一般不要作此热处理，因为会造成沉淀物之显著增多，且会影响血清之品质。注意更换新血清(包括不同批次)对细胞的影响。 
细胞生长：贴壁 
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源 
OLN-93 大鼠胶质细胞系
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支) 
冻存和复苏的原则：慢冻快融》当细胞冷到零度以下，可以产生以下变化：细胞器脱水，细胞中可溶性物质浓度升高，并在细胞内形成冰晶。如果缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水，细胞内不致产生大的冰晶；相反，结晶就大，大结晶会造成细胞膜、纲胞器的损伤和破裂。复苏过程应快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重结晶。慢冻程序》1.标准程序：采用细胞冻存器》当温度在-25℃以上时，1~2℃/min；当温度达-25℃以下时，5~10℃/min；当温度达-100℃时，可迅速放入液氮中。2.简易程序：将冷冻管（管口要朝上）放入纱布袋内，纱布袋系以线绳，通过线绳将纱布袋固定于液氮罐罐口，按每分钟温度下降1~2℃的速度，在40min内降至液氮表面过夜，次晨投人液氮中。3.传统程序：冷冻管置于4℃10分钟→-20℃30分钟→-80℃16~18小时（或隔夜）→液氮槽长期储存。细胞冻存方法：1.预先配制冻存液》（1）8%DMSO+细胞生长液（92%血清）2.取对数生长期细胞，经胰酶消化后，加入适量冻存液，用吸管吹打制成细胞悬液（1×10(6)~5×10(6)细胞/ml）。3.加入1ml细胞于冻存管中，密封后标记冷冻细胞名称和冷冻日期。液氮长期保存。保存细胞的复苏方法：1.快速解冻》冻存细胞从液氮中取出后，立即放入37℃水浴中，轻轻摇动冷冻管，使其在1分钟内全部融化（不要超过3分钟）。2.解冻后的细胞可直接接种到含完全生长培养液的细胞培养瓶中直接进行培养，24小时后再用新鲜完全培养液替换旧培养液，以去除DMSO。3.如果细胞对冷冻保护剂特别敏感解冻后的细胞应先通过离心去除冷冻保护剂，然后再接种到含完全生长培养液的培养瓶中。 
细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。 
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系 
细胞生长特性：贴壁 
OLN-93 大鼠胶质细胞系
细胞培养过程中相关问题总结：悬浮性细胞应如何继代处理？一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中，稀释细胞浓度即可，若培养液太多时，可将培养角瓶口端稍微抬高，直到无法容纳为止。分瓶时取出一部份含细胞之培养液至另一新的培养角瓶，加入新鲜培养基稀释至适当浓度，重复前述步骤即可。欲将一般动物细胞离心下来，其离心速率应为多少转速？欲回收动物细胞，其离心速率一般为３００xg(约１,０００rpm)，５-１０分钟，过高之转速，将造成细胞死亡；细胞之接种密度为何？依照细胞株基本数据上之接种密度或稀释分盘之比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生长之一重要原因；细胞冷冻培养基之成份为何？动物细胞冷冻保存时最常使用的冷冻培养基是含５-１０%DMSO(dimethyl sulfoxide)和９０-９５%原来细胞生长用之新鲜培养基均匀混合之。注意：由于DMSO稀释时会放出大量热能，故不可将DMSO直接加入细胞液中，必须使用前先行配制完成；DMSO之等级和无菌过滤之方式为何？冷冻保存使用之DMSO等级，必须为Tissue culture grade之DMSO，其本身即为无菌状况，次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中，保存于４°C，避免反复冷冻解冻造成DMSO之裂解而释出有害物质，并可减少污染之机会。若要过滤DMSO，则须使用耐DMSO之Nylon材质滤膜；冷冻保存细胞之方法？冷冻保存方法一：冷冻管置于４°C ３０~６０分钟→ (-２０°C ３０分钟)→-８０°C １６~１８小时(或隔夜)→液氮槽vaporphase长期储存。冷冻保存方法二：冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降１-３°C至–８０°C以下，再放入液氮槽vapor phase长期储存。-２０°C不可超过１小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-８０°C冰箱中，惟存活率稍微降低一些；细胞欲冷冻保存时，细胞冷冻管内应有多少细胞浓度？冷冻管内细胞数目一般为１x１０(６)cells/ml vial，融合瘤细胞则以５x１０(６)cells/ml vial为宜；应如何避免细胞污染？细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等。严格之无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培养基配制是减低污染之方法；如果细胞发生微生物污染时，应如何处理？直接灭菌后丢弃之。 
细胞形态特性：详见细胞说明书 
NCI-H460细胞系相关产品：SK Mel28细胞、NCI-H1793细胞、SW 480细胞 
L6细胞系相关产品：SKCO 1细胞、DU4475细胞、Michigan Cancer Foundation-12F细胞 
OCI-Ly 19细胞系相关产品：SK-HEP-1细胞、UCLA RO-81-A-1细胞、J 82细胞 
Tu177细胞系相关产品：CMT64细胞、Mhh-Call 2细胞、HPDE细胞 
H-1734细胞系相关产品：JM-1细胞、3T3NIH细胞、HBL-100细胞 
RPMI7951细胞系相关产品：SK-N-BE(2)-C细胞、HT144细胞、TGW-nu细胞 
Namalwa细胞系相关产品：A 253细胞、CV-1 in Origin Simian-7细胞、Mc Ardle 7777细胞 
CWR22Rv1细胞系相关产品：NCI-H2110细胞、Det 562细胞、HME-1细胞 
DV90细胞系相关产品：SRA01/04 (HLE)细胞、RenCa细胞、373 MG细胞 
MD Anderson-Metastatic Breast-415细胞系相关产品：GM17219细胞、UACC-812细胞、D-324 Med细胞 
NCIH716细胞系相关产品：GM03573A细胞、3D4/21细胞、AMJ2C8细胞 
LC2/Ad细胞系相关产品：RCM1细胞、McG-1细胞、Hep II细胞 
Colo-678细胞系相关产品：SupB15WT细胞、Hela-mock细胞、Biopsy xenograft of Pancreatic Carcinoma line-3细胞 
Metastatic Variant-522细胞系相关产品：NCI-H2291细胞、GH 3细胞、Granta 519细胞 
EC-GI细胞系相关产品：MV-3细胞、PK13细胞、293-GP细胞 
QSG7701细胞系相关产品：SKUT-1细胞、CCRF-SB细胞、PGBE1细胞 
QSG7701细胞系相关产品：SKUT-1细胞、CCRF-SB细胞、PGBE1细胞 
MNNGHOS细胞系相关产品：BIC1细胞、V 79细胞、H28细胞 
AtT-20细胞系相关产品：H-1436细胞、HConEpic细胞、A-253细胞 
Oka-C1细胞系相关产品：H-719细胞、NCI-H322细胞、HHFK细胞 
OLN-93 大鼠胶质细胞系
HL-60 clone15细胞系相关产品：MLOY4细胞、Tn-5B1-4细胞、NIH-OVCAR-3细胞 
NCIH1385细胞系相关产品：P 815细胞、NCI H345细胞、Kobe university Oral Squamous Cell culture-2细胞 
HCC2185细胞系相关产品：BEL-7402细胞、CCD-33Co细胞、B16/F0细胞 
OVCA433_Bast细胞系相关产品：AE 1201细胞、Bat lung细胞、T1-73细胞 
SCL-II细胞系相关产品：C41细胞、LL/2(LLc1)细胞、CCFSTTG1细胞 
Hs895.T细胞系相关产品：BMU-S1细胞、D10细胞、H1395细胞 
MC-CAR细胞系相关产品：NSH细胞、SKLU1细胞、BE2M17细胞 
Hs-729-T细胞系相关产品：RPMI8226细胞、OCILY-10细胞、MM96L细胞 
SGC-7901/DDP细胞系相关产品：CCD-841CoTr细胞、DHL5细胞、LLCPK1细胞 
VMM-5A细胞系相关产品：CC-LP-I细胞、AtT20细胞、PL-9细胞 
SNU-407细胞系相关产品：HCC-44细胞、SK UT 1细胞、TE-1细胞 
L5178Y细胞系相关产品：Transformed Human Liver Epithelial-3细胞、J774.A1细胞、PL-5细胞 
HEK-A细胞系相关产品：LTPA细胞、VAESBJ细胞、NCIH747细胞 
SDBMSC细胞系相关产品：hSCC-25细胞、HSAS4细胞、VMM39细胞 
J774A.1细胞系相关产品：32D:cl3细胞、UCLA-SO-14细胞、U-138-MG细胞 
VMRC-LCD细胞系相关产品：M059K细胞、NBL-S细胞、NCI-H1522细胞 
Pro-Lec1.3C细胞系相关产品：3T3 clone A31细胞、UACC 812细胞、NCI-H1770细胞 
H650细胞系相关产品：K1细胞、SK HEP 01细胞、RLE-6TN细胞 
CTLL(2)细胞系相关产品：KU-19-19细胞、SLMT-1细胞、MC9细胞 
HEL92.1.7细胞系相关产品：MLMEC细胞、MDA157细胞、GM05372细胞 
SCL2细胞系相关产品：MD Anderson-Metastatic Breast-415细胞、4175细胞、TFK-1细胞 
SNU398细胞系相关产品：G 401细胞、SKUT-1细胞、SK-N-BE(2)-C细胞 
HEC-1B细胞系相关产品：HPB/ALL细胞、SW-982细胞、H226细胞 
PC615.3细胞系相关产品：HCC827细胞、LIM1215细胞、BEL7402细胞 
YES-2细胞系相关产品：NCI-H889细胞、OCI-LY-18细胞、BNL 1MEA.7R.1细胞 
AC29细胞系相关产品：HEC-1-B细胞、H8细胞、GM3190细胞 
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Jurkat FHCRC细胞系相关产品：SCC-1395细胞、KMY1022细胞、SNK6细胞 
P-36细胞系相关产品：HCT_116细胞、Chinese Hamster Ovary细胞、VM-CUB-1细胞 
526-mel细胞系相关产品：MMAc-Serum Free细胞、LLC-MK2细胞、JROECL 19细胞 
SUP-T1细胞系相关产品：N-2a细胞、A-431细胞、SN12C细胞 
Tn5 B1-4细胞系相关产品：CORL51细胞、UCLA-RO 81细胞、B-3细胞 
B6Tert-1细胞系相关产品：CEM-0细胞、EL4细胞、SNT8细胞 
H341细胞系相关产品：MTEC1细胞、Radiation Effects Research Foundation-Lung Cancer-MS细胞、MDAMB435细胞 
751-NA-15细胞系相关产品：SMA-560细胞、SW 480细胞、KYSE 70细胞 
GM04671细胞系相关产品：HONE-1细胞、Karpas-299细胞、H735细胞 
RDES细胞系相关产品：RC-4B/C细胞、CD 18细胞、BT 549细胞 
HFL-I细胞系相关产品：Tregs细胞、HT1376细胞、H-295细胞 
H22细胞系相关产品：KYSE 70细胞、Y3Ag1.2.3细胞、Glioma 261细胞 
Ku812细胞系相关产品：VK-2/E6E7细胞、HTh 74细胞、EFM192细胞 
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RAW264.7细胞系相关产品：SK MEL 5细胞、U-266细胞、Panc02-H0细胞 
RetroPack PT67细胞系相关产品：MAD109细胞、CAL78细胞、T84细胞 
HT144mel细胞系相关产品：MDAMB435细胞、HPAF细胞、CHL1细胞 
HT clone H9细胞系相关产品：AsPC-1细胞、KU-19-19细胞、NCI-H2081细胞 
MSB-1细胞系相关产品：WEHI3细胞、MC57细胞、NBL-5细胞 
EU-4细胞系相关产品：FUOV1细胞、ZYM-DIEC02细胞、HEK-293F细胞 
Kit 225-K6细胞系相关产品：3T3-F442A细胞、PIEC细胞、SK-MEL-3细胞 
BEL 7402细胞系相关产品：HTR-8/SVneo细胞、SW403细胞、NT-2细胞 
MDAMB361细胞系相关产品：HuH-6细胞、SW1783细胞、HT1080细胞 
MGc80-3细胞系相关产品：Hep 3B细胞、IOSE-29细胞、Vero-E6细胞 
SKLMS1细胞系相关产品：SCLC-21H细胞、DMS 153细胞、NPA87细胞 
OCI-Ly 19细胞系相关产品：SK-HEP-1细胞、PANC0203细胞、NTERA2-D1细胞 
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