L-WRN 小鼠皮下结缔组织细胞系

"L-WRN 小鼠皮下结缔组织细胞系
细胞背景资料：皮下结缔组织；自发永生；雄性；C３H/An 
细胞形态：上皮细胞样 
细胞培养无菌操作的演示：凡是带入超净工作台内的酒精、PBS、培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用７５％酒精擦拭瓶子的外表面；靠近酒精灯火焰操作。器皿使用前必须过火灭菌，继续使用的器皿(如瓶盖、滴管)要放在高处，使用时仍要过火。各种操作要靠近酒精灯，动作要轻、准确，不能乱碰。如吸管不能碰到废液缸。吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管，防止交叉污染。玻璃器械洗消：一、新的玻璃器皿的洗消：自来水刷洗，除去灰尘。烘干、泡：烤箱中烘干，然后再浸入５％稀中１２小时以除去脏物、铅、等物。刷洗、烘干：１２小时后立即用自来水冲洗，再用洗涤剂刷洗，自来水冲干净后用烤箱烘干；泡酸、清洗：用清洁液浸泡１２小时，然后从酸缸内捞出器皿用自来水冲洗１５次，最后蒸馏水冲洗３-５次和用双蒸水过３次。烘干、包装：洗干净后先烘干，然后用牛皮纸(油光纸)包装。高压消毒：包装好的器皿装入高压锅内盖好盖子，打开开关和安全阀，当蒸气成直线上升时，关闭安全阀，当指针指向１５磅时，维持２０-３０分钟。高压消毒后烘干。二、旧的玻璃器皿的洗消：刷洗、烘干：使用过的玻璃器皿可直接泡入来苏尔液或洗涤剂溶液中，泡过来苏尔溶液(洗涤剂)的器皿要用清水刷洗干净，然后烘干。泡酸、清洗：烘干后泡入清洁液(酸液)，１２小时后从酸缸内捞出器皿立即用自来水冲洗(避免蛋白质干涸后粘附于玻璃上难以清洗)，再用蒸馏水冲洗３次。烘干、包装：洗干净的器皿烘干后取出用牛皮纸(油光纸)等包装。 
细胞生长：贴壁 
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源 
L-WRN 小鼠皮下结缔组织细胞系
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支) 
冻存和复苏的原则：慢冻快融》当细胞冷到零度以下，可以产生以下变化：细胞器脱水，细胞中可溶性物质浓度升高，并在细胞内形成冰晶。如果缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水，细胞内不致产生大的冰晶；相反，结晶就大，大结晶会造成细胞膜、纲胞器的损伤和破裂。复苏过程应快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重结晶。慢冻程序》1.标准程序：采用细胞冻存器》当温度在-25℃以上时，1~2℃/min；当温度达-25℃以下时，5~10℃/min；当温度达-100℃时，可迅速放入液氮中。2.简易程序：将冷冻管（管口要朝上）放入纱布袋内，纱布袋系以线绳，通过线绳将纱布袋固定于液氮罐罐口，按每分钟温度下降1~2℃的速度，在40min内降至液氮表面过夜，次晨投人液氮中。3.传统程序：冷冻管置于4℃10分钟→-20℃30分钟→-80℃16~18小时（或隔夜）→液氮槽长期储存。细胞冻存方法：1.预先配制冻存液》（1）8%DMSO+细胞生长液（92%血清）2.取对数生长期细胞，经胰酶消化后，加入适量冻存液，用吸管吹打制成细胞悬液（1×10(6)~5×10(6)细胞/ml）。3.加入1ml细胞于冻存管中，密封后标记冷冻细胞名称和冷冻日期。液氮长期保存。保存细胞的复苏方法：1.快速解冻》冻存细胞从液氮中取出后，立即放入37℃水浴中，轻轻摇动冷冻管，使其在1分钟内全部融化（不要超过3分钟）。2.解冻后的细胞可直接接种到含完全生长培养液的细胞培养瓶中直接进行培养，24小时后再用新鲜完全培养液替换旧培养液，以去除DMSO。3.如果细胞对冷冻保护剂特别敏感解冻后的细胞应先通过离心去除冷冻保护剂，然后再接种到含完全生长培养液的培养瓶中。 
细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。 
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系 
细胞生长特性：贴壁 
L-WRN 小鼠皮下结缔组织细胞系
细胞培养过程中相关问题总结：悬浮性细胞应如何继代处理？一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中，稀释细胞浓度即可，若培养液太多时，可将培养角瓶口端稍微抬高，直到无法容纳为止。分瓶时取出一部份含细胞之培养液至另一新的培养角瓶，加入新鲜培养基稀释至适当浓度，重复前述步骤即可。欲将一般动物细胞离心下来，其离心速率应为多少转速？欲回收动物细胞，其离心速率一般为３００xg(约１,０００rpm)，５-１０分钟，过高之转速，将造成细胞死亡；细胞之接种密度为何？依照细胞株基本数据上之接种密度或稀释分盘之比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生长之一重要原因；细胞冷冻培养基之成份为何？动物细胞冷冻保存时最常使用的冷冻培养基是含５-１０%DMSO(dimethyl sulfoxide)和９０-９５%原来细胞生长用之新鲜培养基均匀混合之。注意：由于DMSO稀释时会放出大量热能，故不可将DMSO直接加入细胞液中，必须使用前先行配制完成；DMSO之等级和无菌过滤之方式为何？冷冻保存使用之DMSO等级，必须为Tissue culture grade之DMSO，其本身即为无菌状况，次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中，保存于４°C，避免反复冷冻解冻造成DMSO之裂解而释出有害物质，并可减少污染之机会。若要过滤DMSO，则须使用耐DMSO之Nylon材质滤膜；冷冻保存细胞之方法？冷冻保存方法一：冷冻管置于４°C ３０~６０分钟→ (-２０°C ３０分钟)→-８０°C １６~１８小时(或隔夜)→液氮槽vaporphase长期储存。冷冻保存方法二：冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降１-３°C至–８０°C以下，再放入液氮槽vapor phase长期储存。-２０°C不可超过１小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-８０°C冰箱中，惟存活率稍微降低一些；细胞欲冷冻保存时，细胞冷冻管内应有多少细胞浓度？冷冻管内细胞数目一般为１x１０(６)cells/ml vial，融合瘤细胞则以５x１０(６)cells/ml vial为宜；应如何避免细胞污染？细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等。严格之无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培养基配制是减低污染之方法；如果细胞发生微生物污染时，应如何处理？直接灭菌后丢弃之。 
细胞形态特性：详见细胞说明书 
SK-N-F1细胞系相关产品：Hs 274.T细胞、IM-95细胞、SW 1271细胞 
Sup T-1细胞系相关产品：NTERA-2 cl.D1细胞、MC116细胞、SK-MEL-MeWo细胞 
HEK;293细胞系相关产品：HCC1954 BL细胞、B16/F1细胞、PaTu 8988 S细胞 
MDA361细胞系相关产品：HCC0038细胞、RCC 786-O细胞、QG56细胞 
L-363细胞系相关产品：H2342细胞、MCF-7细胞、SK ES 01细胞 
BJA-B细胞系相关产品：Y3Ag1.2.3细胞、NE-1细胞、BC-020细胞 
A 2058细胞系相关产品：SK-N-BE2C细胞、G-292, clone A141B1细胞、LS 174 T细胞 
Tu-686细胞系相关产品：HEK-AD 293细胞、Tohoku Hospital Pediatrics-1细胞、ROS 17/2.8细胞 
HEC251细胞系相关产品：CL1-0细胞、IHH4细胞、MDA453细胞 
Ej138细胞系相关产品：Hi5细胞、MB-49细胞、G422细胞 
CT-26细胞系相关产品：Immortal Pig Intestinal-2I细胞、Hs-606-T细胞、A2780/Taxol细胞 
PC 61细胞系相关产品：CCF-STTG1细胞、Huh-7细胞、H-524细胞 
BL1339细胞系相关产品：L363细胞、OVISE细胞、H-358细胞 
PANC1005细胞系相关产品：H-2198细胞、N-87细胞、MOLM-16细胞 
J774 A1细胞系相关产品：Hs 895.T细胞、C-26细胞、OCIAML3细胞 
639 V细胞系相关产品：CD18细胞、V-79-4细胞、FCCH1024细胞 
639 V细胞系相关产品：CD18细胞、V-79-4细胞、FCCH1024细胞 
HGE细胞系相关产品：Hs343T细胞、ECGI10细胞、A-2058细胞 
NPA87-1细胞系相关产品：SUM 52PE细胞、Y3细胞、HT 1376细胞 
RBSMC细胞系相关产品：LNCaP-C4-2细胞、MDA MB231细胞、HFT 8810细胞 
L-WRN 小鼠皮下结缔组织细胞系
HOP 92细胞系相关产品：WiDr/S细胞、624mel细胞、DI-TNC1细胞 
UCLA-SO-M14细胞系相关产品：C22细胞、NCIH1563细胞、MLE 12细胞 
LC1sq细胞系相关产品：Fukuoka University-Malignant mixed Mullerian Tumor-1细胞、RPMI-8226S细胞、RenCa细胞 
MOLP2细胞系相关产品：MDA231细胞、Panc2.03细胞、PTK1细胞 
Hs-675-T细胞系相关产品：HO8910细胞、C4 I细胞、RPMI-8226S细胞 
LA 4细胞系相关产品：T/G HA-VSMC细胞、Fao细胞、BC3H-1细胞 
Y3M细胞系相关产品：HCCLM3细胞、DiFi细胞、DHL8细胞 
RT4-D6-P2T细胞系相关产品：CAKI.1细胞、H-2196细胞、AR-42J细胞 
Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-6细胞系相关产品：Tsup-1细胞、P3X63Ag8细胞、HTori-3.1细胞 
U138MG细胞系相关产品：HT3细胞、Y3.AG.1.2.3细胞、MSTO-211 H细胞 
NCI-H929细胞系相关产品：S3-HeLa细胞、Glioma 261细胞、NCI-H865细胞 
CBRH7919细胞系相关产品：CHP100细胞、MDA-PCa-2b细胞、BT 325细胞 
3T3(A31)细胞系相关产品：MKN-1细胞、H-548细胞、PL-11细胞 
ST 486细胞系相关产品：HCEC-B4G12细胞、KLN 205细胞、BMF细胞 
MDA-436细胞系相关产品：RKOAS451细胞、BNL-CL.2细胞、HUT28细胞 
NCIH23细胞系相关产品：mIMCD-3细胞、SUPM2细胞、U-118-MG细胞 
KRC Y细胞系相关产品：L540细胞、B-95-8细胞、McG-1细胞 
Kit-225细胞系相关产品：PLC8024细胞、ST486细胞、NCIH209细胞 
Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-5细胞系相关产品：MeWo细胞、HCC-9724细胞、H-520细胞 
HSC5细胞系相关产品：SW 900细胞、AR42J细胞、H-510A细胞 
SL1细胞系相关产品：Cates-1B细胞、NCI-H2347细胞、TFK1细胞 
RL95细胞系相关产品：MMVECs细胞、P30/0HK细胞、OCI/AML-2细胞 
HCC-44细胞系相关产品：NU-GC-2细胞、BLO11细胞、TH1细胞 
P31-FUJ细胞系相关产品：801-D细胞、HCT 15细胞、SL-29细胞 
PG-4 S+L-细胞系相关产品：PLMVEC细胞、SW-780细胞、HSC-3细胞 
GLRK 13细胞系相关产品：IB-RS-2细胞、RCC_7860细胞、67NR细胞 
MCA-205细胞系相关产品：HEK-293 c18细胞、NCI-SNU-1040细胞、Nb2a细胞 
NCI-H508细胞系相关产品：293-H细胞、NCI660细胞、JVM3细胞 
PTK1细胞系相关产品：UPCISCC154细胞、CHP 100细胞、GLRK 13细胞 
NRK52E细胞系相关产品：HCC-1500细胞、SK-MEL-2细胞、SKNEP1细胞 
HEK 293FT细胞系相关产品：CBRH7919细胞、HBE细胞、IAR 20细胞 
MDAMB-231细胞系相关产品：KTCTL140细胞、SUM 149PT细胞、PC3-M细胞 
P3-x63-Ag8 653细胞系相关产品：H23细胞、NCIH2126细胞、MV3细胞 
CCRF-SB细胞系相关产品：RT-BM 1细胞、NS1-1 Ag4.1细胞、C12细胞 
CL1-5细胞系相关产品：HuH-1细胞、HEp-2细胞、SW 626细胞 
AE1201细胞系相关产品：COLO 357细胞、WM-266-mel细胞、MM1S细胞 
PC-3细胞系相关产品：Lec1细胞、C57 Mouse Tumor 93细胞、H2141细胞 
P815细胞系相关产品：SKMEL2细胞、NPA'87细胞、hFOB 1.19细胞 
TE5细胞系相关产品：MN-9D细胞、NCI-H2066细胞、TE-5细胞 
MKN 45细胞系相关产品：hRPTC细胞、SK-MEL-2-LUC细胞、T2细胞 
SKLU-1细胞系相关产品：SK-Mel1细胞、WEHI 3细胞、D283-MED细胞 
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HEI193细胞系相关产品：DLD1细胞、138MG细胞、UMNSAH/DF-1细胞 
HTori:3细胞系相关产品：KBM-7/Hap8细胞、H4-II-E细胞、SCC7细胞 
SW 1990细胞系相关产品：MLE12细胞、NB19细胞、R2C细胞 
ARO-81细胞系相关产品：CT-26细胞、RCC4细胞、SK-N-BE(1)细胞 
TALL 1细胞系相关产品：Michigan Cancer Foundation-12F细胞、SW837细胞、MPC-5细胞 
VM-CUB-1细胞系相关产品：BT-483细胞、SF-126细胞、AU565细胞 
QGP1细胞系相关产品：NCI-H220细胞、MT-2J细胞、LS-180细胞 
McCoy B细胞系相关产品：SNU16细胞、NCIH1373细胞、BEL-7405细胞 
HPBALL细胞系相关产品：HBL100细胞、FDCP1细胞、3T3-F442A细胞 
HEEpiC细胞系相关产品：Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-6细胞、BT 325细胞、NCI-H2330细胞 
KMY1022细胞系相关产品：OCILY-19细胞、118MG细胞、RT-112细胞 
HEK/EBNA细胞系相关产品：K 562细胞、CFPAC-1细胞、RD-ES细胞 
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