CAL-12T 人肺癌细胞系

"CAL-12T 人肺癌细胞系
细胞背景资料：详见相关文献介绍 
细胞形态：上皮细胞样 
细胞传代培养的胰酶消化法：传代培养：是指细胞从一个培养瓶以１：２或１：２以上的比例转移，接种到另一培养瓶的培养。传代细胞，可根据不同细胞采取不同的方法进行细胞传代。贴壁生长的细胞用消化法传代，部分贴壁的细胞用直接吹打或用硅胶软刮的刮除法传代。悬浮细胞可采用加入等量新鲜培养基后直接吹打分散进行传代，或用自然沉降法加入新培养基后再吹打分散进行传代。实验步骤：①入无菌室之前用肥皂洗手，再用７５% 的酒精擦拭消毒双手；②倒置显微镜下观察细胞形态，确定细胞是否传代及细胞需要稀释的倍数。将培养用液３７℃下预热；③超净台台面应整洁，用７５%酒精棉球擦拭清洁；④打开超净工作台的紫外灯照射台面２０min左右，关闭紫外灯，打开风机清洁空气除去臭氧；⑤点燃酒精灯;取出无菌试管，巴士德吸管和刻度吸管;安上橡皮头;过酒精灯火焰略烧后插在无菌试管内；⑥将培养用液瓶口用７５%酒精消毒，过酒精灯火焰后斜置于酒精灯旁的架子上；⑦倒掉培养细胞的旧培养基。酌情可用２-３ml Hanks液洗去残留的就培养基，或用少量胰酶涮洗一下；⑧每个大培养瓶加入１ml胰酶，小培养瓶用量酌减，盖好瓶盖后在倒置显微镜下观察。当细胞收回突起变圆时立即翻转培养瓶，使细胞脱离胰酶，然后将胰酶倒掉。注意勿使细胞提早脱落入消化液中；⑨加入少量的含血清的新鲜培养基，反复吹打消化好的细胞使其脱壁并分散，再根据分传瓶数补加一定量的含血清的新鲜培养基(７-１０ml/大瓶;３-５ml/小瓶)制成细胞悬液，然后分装到新培养瓶中。盖好瓶盖，适度拧紧后稍回转，以利于CO２的进入，将培养瓶放回CO２培养箱；⑩对悬浮培养细胞，步骤７-９不做。直接将细胞悬液进行离心去除旧培养基上清，加入新鲜培养基，然后分装到各瓶中。 
细胞生长：贴壁 
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源 
CAL-12T 人肺癌细胞系
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支) 
有一些细胞是数量多一点比较好生长，生长状态也比较好。这种一般是属于生长速度慢的细胞。譬如内皮细胞。而有一些是细胞是数量少一点细胞状态会生长的比较好，譬如巨噬细胞和某些肿瘤细胞。尤其是巨噬细胞，生长速度非常得快，贴壁速度很快，所以传代时就应该留很少量的细胞，这样细胞状态会比较好。并且巨噬细胞比较喜欢扎堆生长，而堆与堆之间是有空间的。如果长成相连在一起的一满片的时候，细胞形态基本上就会差了，老化的会比较多，对后期实验结果是不好的。所以在养细胞的时候应该摸索该细胞喜欢的生长空间密度问题。这个其实是有一个方法可以改善的。对于贴壁细胞，如果细胞形态不好，（或者细胞形态不清晰，表面似有异物等）可以在传代的时候进行如下操作：首先，倒掉旧的培养基，加入3ml新的培养基（有无血清的都可）洗涤一次，用滴管吸走，然后再加入3ml的培养基，进行预吹打，控制吹打力度，轻轻地大概沿着瓶底过一遍，然后吸走。这时侯再开始正式的消化、吹打。（巨噬细胞建议只吹打，不消化）其次，把吹打下来的细胞悬液加入到新的培养瓶内，培养瓶事先加入培养基，放入培养箱内培养，按时间点观察细胞贴壁情况。10分钟观察一次，20分钟，30分钟观察一次。选择一个时间点，已经有部分细胞贴壁的情况下，重新置于洁净台，底面朝上迅速倒出其中的培养基，加入3ml新培养基再轻轻洗一次。然后加入完全培养基培养。后续观察细胞生长情况以及形态。通常称之为“二传”。如果一次效果还不理想，可重复多次。直到找到细胞上乘形态。其中要注意，结合细胞喜欢的生长情况。喜欢多一点数量长得好的细胞你就等贴壁细胞比较多点的时候再传。反之亦然。 
细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。 
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系 
细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分 
CAL-12T 人肺癌细胞系
细胞培养过程中相关问题总结：悬浮性细胞应如何继代处理？一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中，稀释细胞浓度即可，若培养液太多时，可将培养角瓶口端稍微抬高，直到无法容纳为止。分瓶时取出一部份含细胞之培养液至另一新的培养角瓶，加入新鲜培养基稀释至适当浓度，重复前述步骤即可。欲将一般动物细胞离心下来，其离心速率应为多少转速？欲回收动物细胞，其离心速率一般为３００xg(约１,０００rpm)，５-１０分钟，过高之转速，将造成细胞死亡；细胞之接种密度为何？依照细胞株基本数据上之接种密度或稀释分盘之比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生长之一重要原因；细胞冷冻培养基之成份为何？动物细胞冷冻保存时最常使用的冷冻培养基是含５-１０%DMSO(dimethyl sulfoxide)和９０-９５%原来细胞生长用之新鲜培养基均匀混合之。注意：由于DMSO稀释时会放出大量热能，故不可将DMSO直接加入细胞液中，必须使用前先行配制完成；DMSO之等级和无菌过滤之方式为何？冷冻保存使用之DMSO等级，必须为Tissue culture grade之DMSO，其本身即为无菌状况，次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中，保存于４°C，避免反复冷冻解冻造成DMSO之裂解而释出有害物质，并可减少污染之机会。若要过滤DMSO，则须使用耐DMSO之Nylon材质滤膜；冷冻保存细胞之方法？冷冻保存方法一：冷冻管置于４°C ３０~６０分钟→ (-２０°C ３０分钟)→-８０°C １６~１８小时(或隔夜)→液氮槽vaporphase长期储存。冷冻保存方法二：冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降１-３°C至–８０°C以下，再放入液氮槽vapor phase长期储存。-２０°C不可超过１小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-８０°C冰箱中，惟存活率稍微降低一些；细胞欲冷冻保存时，细胞冷冻管内应有多少细胞浓度？冷冻管内细胞数目一般为１x１０(６)cells/ml vial，融合瘤细胞则以５x１０(６)cells/ml vial为宜；应如何避免细胞污染？细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等。严格之无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培养基配制是减低污染之方法；如果细胞发生微生物污染时，应如何处理？直接灭菌后丢弃之。 
细胞形态特性：详见细胞说明书 
SW626细胞系相关产品：XWLC-05细胞、VMRC-LCD细胞、HCV29细胞 
Hs 578T细胞系相关产品：SK-N-AS细胞、F98细胞、WM 239-A细胞 
RCM1细胞系相关产品：J-82细胞、RMS 1598细胞、Laboratory of Allergic Diseases 2细胞 
HUCCT1细胞系相关产品：Hs-343-T细胞、MT-3 [Human leukocytes]细胞、Bx-PC3细胞 
HaCaT细胞系相关产品：HO-1-N-1细胞、Be Wo细胞、MGSMC细胞 
TM-3细胞系相关产品：LS174细胞、3T3-A31细胞、746T细胞 
P19细胞系相关产品：KYSE140细胞、LN-18细胞、L 363细胞 
SCC154细胞系相关产品：Plaepi 34细胞、VM-CUB1细胞、BHT101细胞 
TE-85细胞系相关产品：Calf Pulmonary Artery 47细胞、MDCK Type II细胞、COLO-320细胞 
OCM-1A细胞系相关产品：A.704细胞、Bronchial Epithelium transformed with Ad12-SV40 2B细胞、OCILY3细胞 
Hs 940.T细胞系相关产品：CoC1细胞、TE10细胞、MEF (CF-1)细胞 
UPCISCC154细胞系相关产品：FTC133细胞、SK-N-BE(1)n细胞、138 MG细胞 
DR2R1610细胞系相关产品：253J细胞、50.B1细胞、Tregs细胞 
Duck embryo细胞系相关产品：ECC12细胞、SCLC21H细胞、Sp 2817细胞 
OSC-19细胞系相关产品：BE2_C细胞、MDA 1386细胞、CL 1-0细胞 
LLC-MK2细胞系相关产品：Primary Liver Carcinoma/Poliomyelitis Research Foundation/5细胞、PC3细胞、L-M (TK-)细胞 
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NCI-H2126细胞系相关产品：NCIH1651细胞、BNL-HCC细胞、H-441细胞 
RT 112细胞系相关产品：PLC/PRF5细胞、H-2291细胞、KYSE0520细胞 
HCT-15细胞系相关产品：HEK293E细胞、J-82细胞、U373 MG细胞 
CAL-12T 人肺癌细胞系
526-mel细胞系相关产品：MMAc-Serum Free细胞、LLC-MK2细胞、JROECL 19细胞 
PK-136细胞系相关产品：NCI-H1876细胞、NCI-H295细胞、DHL-8细胞 
C3H/10T1/2细胞系相关产品：JIMT-1细胞、SF763细胞、RTMC细胞 
3T3-Swiss albino细胞系相关产品：RPTEC/TERT1细胞、SVG(P12)细胞、ANA-1细胞 
LNCaP-C4-2细胞系相关产品：C6细胞、QGY细胞、HT29细胞 
IPECJ2细胞系相关产品：EOC-20细胞、CAL-12T细胞、Acanthosis Nigricans 3rd attempt-CArcinoma细胞 
3T3-A31细胞系相关产品：RBE细胞、Sun Yat-sen university Ophtalmic center-Retinoblastoma 50细胞、SupB15WT细胞 
HS-766-T细胞系相关产品：HuCCT-1细胞、COLO 394细胞、ONS-76细胞 
P3.NS-1/1.Ag4.1细胞系相关产品：BJAB细胞、SKUT1细胞、B16F1细胞 
NCIH1703细胞系相关产品：NK-10A细胞、Hs 683细胞、A-172MG细胞 
SUM 102细胞系相关产品：Swiss-3T3细胞、ID8/MOSEC细胞、NFS60细胞 
Ontario Cancer Institute-Acute Myeloid Leukemia-3细胞系相关产品：SNU-869细胞、SK-Col-1细胞、D341细胞 
Walker/LLC-WRC256细胞系相关产品：INS1-E细胞、CL1-0细胞、Vero 76 clone E-6细胞 
A-101D细胞系相关产品：OCI/AML-3细胞、FRTL-5 Cl 2细胞、TE-15细胞 
OSKM-1细胞系相关产品：CMEC/D3细胞、Hs 839.T细胞、CCD-841-CoTr细胞 
McA-RH7777细胞系相关产品：H-1373细胞、SUM-149细胞、SMC-1细胞 
NCI-H526细胞系相关产品：P3-X63-Ag8.653细胞、HS-940-T细胞、MCMEC细胞 
NCI-H526细胞系相关产品：P3-X63-Ag8.653细胞、HS-940-T细胞、MCMEC细胞 
HCC1954 BL细胞系相关产品：Sun Yat-sen university Ophtalmic center-Retinoblastoma 50细胞、HPC-Y5细胞、SW 900细胞 
LIM 1215细胞系相关产品：U-87细胞、DF1细胞、H1573细胞 
RCC4细胞系相关产品：KM933细胞、NCI-SNU-423细胞、HEK 293-F细胞 
U266 Bl细胞系相关产品：H1651细胞、TM4细胞、SU.86.86细胞 
Hs281T细胞系相关产品：HBdSMC细胞、T9细胞、MC3T3-E1 Subclone 4细胞 
Loucy细胞系相关产品：Hep G2/C3A细胞、Mc Ardle 7777细胞、Hs294T细胞 
HuNS1细胞系相关产品：HHFK细胞、MPASMC细胞、ACHN细胞 
SW948细胞系相关产品：CL1-5细胞、Ramos 2G6.4C10细胞、Hs895T细胞 
H4细胞系相关产品：M1细胞、RPMI-2650细胞、SNU761细胞 
RKOE6细胞系相关产品：SUM 190PT细胞、BCECs细胞、BC-3-H-I细胞 
KP-2细胞系相关产品：NBL-S细胞、Colo-206F细胞、NCI-SNU-16细胞 
TMK-1细胞系相关产品：MGHU3细胞、SF 295细胞、BOWES细胞 
CL-34细胞系相关产品：MDA134细胞、IOSE-29细胞、Hep 3B细胞 
MKN 45细胞系相关产品：hRPTC细胞、SK-MEL-2-LUC细胞、T2细胞 
697细胞系相关产品：NUGC3细胞、CCD 841 CoN细胞、NCI-H841细胞 
Fu97细胞系相关产品：KRC/Y细胞、T 84细胞、LN 229细胞 
LA-N-6(OAN)细胞系相关产品：Mel RM细胞、MHCC97H细胞、NG 108-15细胞 
TGW-nu细胞系相关产品：SKNEP细胞、OCI Ly10细胞、TE-85细胞 
HEL-92-1-7细胞系相关产品：HCC-70细胞、Panc-3_27细胞、BNL.1ME A.7R.1细胞 
MDA 435细胞系相关产品：SP2细胞、A-375.S2细胞、T47D细胞 
MLOY4细胞系相关产品：PC615.3细胞、GM346细胞、GM00346细胞 
SUDHL5细胞系相关产品：T98-G细胞、NEC-8细胞、KP 4细胞 
MD Anderson-Metastatic Breast-175-VIII细胞系相关产品：LM TK negative细胞、MDAMB175细胞、OVCAR 5细胞 
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Det. 562细胞系相关产品：H19-7细胞、SNU620细胞、MES 13细胞 
Ontario Cancer Institute-Acute Myeloid Leukemia-3细胞系相关产品：SNU-869细胞、SK-Col-1细胞、D341细胞 
CLONE M3细胞系相关产品：P3-X63-Ag 8.653细胞、A3细胞、HPAF-II细胞 
RIN14B细胞系相关产品：CFSC-8B细胞、SCC-15细胞、LC-1-sq细胞 
NCI-H2170细胞系相关产品：Intestinal Porcine Epithelial Cell line-J2细胞、BHT101细胞、COLO-824细胞 
NPA 87细胞系相关产品：L-6TG细胞、32Dcl3细胞、Swiss 3T3细胞 
Roswell Park Memorial Institute 8226细胞系相关产品：Clone Y1细胞、H-2087细胞、SRA 01/04细胞 
H2106细胞系相关产品：RIMEC细胞、SW 403细胞、RCC-10RGB细胞 
MDA MB 361细胞系相关产品：H3255_DA细胞、Renal Proximal Tubule Epithelial Cells/TERT-immortalized 1细胞、HFF-1细胞 
HCC-2185细胞系相关产品：hTERT RPE-1细胞、SK-MEL 28细胞、746T细胞 
NCI-H2452细胞系相关产品：SKMEL28细胞、HIT细胞、COLO824细胞 
RCM1细胞系相关产品：J-82细胞、DanG细胞、COLO829细胞 
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