WILL-2 人弥漫大B淋巴瘤细胞系

"WILL-2 人弥漫大B淋巴瘤细胞系
细胞背景资料：弥漫大B淋巴瘤；女性 
细胞形态：淋巴母细胞样 
细胞培养方面注意的几点：无菌意识要强：实验进行前，超净台以紫外灯照射３０分钟灭菌，以７０%ethanol擦拭无菌操作抬面，并开启超净工作台风扇运转数分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以７０%ethanol擦拭无菌操作抬面。无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如支架、吸管等公用物品可以暂时放置，其它个人实验用品用完应立即拿出。实验用品以７０%乙醇擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在中央无菌区域，一般勿在边缘区域操作。小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约４５°角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。选择正确的培养基：不同的细胞可能培养基不同，甚至不同的文献可能对相同的细胞培养基成分也是可能不同的。如我当时培养神经干细胞，有文献就选用neurobase培养基，而我的实验目的主要是做抗氧化和氧化方面的，而这种培养基中含有抗氧化剂成分，此时，我就不得不选择另外一种不含抗氧化剂的培养基。瓶装血清一定要逐步解冻:４℃冰箱全溶后再分装，在溶解过程中须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与成分均一，减少沉淀的发生。勿直接由–２０℃直接至３７℃解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。热灭活是指５６℃，３０分钟加热已完全解冻之血清。水浴锅升到５６℃后，将血清放入，待温度升高到５６℃后计时，一般５分钟左右规则摇晃均匀一次。此热处理之目的是使血清中之补体成份去活化。除非必须，一般不要作此热处理，因为会造成沉淀物之显著增多，且会影响血清之品质。注意更换新血清(包括不同批次)对细胞的影响。 
细胞生长：悬浮 
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源 
WILL-2 人弥漫大B淋巴瘤细胞系
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支) 
冻存和复苏的原则：慢冻快融》当细胞冷到零度以下，可以产生以下变化：细胞器脱水，细胞中可溶性物质浓度升高，并在细胞内形成冰晶。如果缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水，细胞内不致产生大的冰晶；相反，结晶就大，大结晶会造成细胞膜、纲胞器的损伤和破裂。复苏过程应快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重结晶。慢冻程序》1.标准程序：采用细胞冻存器》当温度在-25℃以上时，1~2℃/min；当温度达-25℃以下时，5~10℃/min；当温度达-100℃时，可迅速放入液氮中。2.简易程序：将冷冻管（管口要朝上）放入纱布袋内，纱布袋系以线绳，通过线绳将纱布袋固定于液氮罐罐口，按每分钟温度下降1~2℃的速度，在40min内降至液氮表面过夜，次晨投人液氮中。3.传统程序：冷冻管置于4℃10分钟→-20℃30分钟→-80℃16~18小时（或隔夜）→液氮槽长期储存。细胞冻存方法：1.预先配制冻存液》（1）8%DMSO+细胞生长液（92%血清）2.取对数生长期细胞，经胰酶消化后，加入适量冻存液，用吸管吹打制成细胞悬液（1×10(6)~5×10(6)细胞/ml）。3.加入1ml细胞于冻存管中，密封后标记冷冻细胞名称和冷冻日期。液氮长期保存。保存细胞的复苏方法：1.快速解冻》冻存细胞从液氮中取出后，立即放入37℃水浴中，轻轻摇动冷冻管，使其在1分钟内全部融化（不要超过3分钟）。2.解冻后的细胞可直接接种到含完全生长培养液的细胞培养瓶中直接进行培养，24小时后再用新鲜完全培养液替换旧培养液，以去除DMSO。3.如果细胞对冷冻保护剂特别敏感解冻后的细胞应先通过离心去除冷冻保护剂，然后再接种到含完全生长培养液的培养瓶中。 
细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。 
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系 
细胞生长特性：悬浮 
WILL-2 人弥漫大B淋巴瘤细胞系
细胞传代时消化的问题：可以这样说，对于需要消化传代的细胞，每一次的消化都是对这个细胞存活与否，状态好与不好最至关重要的考验。很多同学都遇到过这个问题，自己养的细胞开始的几代长的还挺好的，可是穿过几代之后就发现自己的细胞，状态越来越差劲了。对于这个问题，可以非常肯定地说，你的消化环节出问题了。你每一次的消化都让细胞受到较大损伤了。所以，越长越差。在消化的过程中，你加入胰酶后，所有细胞都在被胰酶消化着，但是我们忽视了一个问题就是，细胞的生长状态是不一样的，每一个细胞的贴壁情况也是不一样的，有的贴壁牢固，有的贴壁没有那么牢固的，所以，让所有的细胞消化同样的时间对细胞是不公平的，他们受到了差别待遇当然会有脾气啊。我后来对消化的方法进行了改良。争取做到因材施教呵呵。我称之为“四步消化法”。（以难消化细胞为例）；具体操作：１)首先不加胰酶，倒掉旧培养基加入少量新培养基洗１-２遍，（这是前奏，即为步，目的是将漂浮着的死细胞之类尽量洗掉。２)然后再加入少量新培养基直接吹打一遍，这一遍是把贴壁不牢固的细胞吹打下来。再用培养基洗一遍，两次所得悬液混合传入新瓶。即为第二步（你可以将这些传入新瓶培养，以与后面胰酶消化过的细胞对比观察看谁长的更好一点就知道该细胞对胰酶的敏感度了。）３)吸干净瓶内剩余液体，加入０.３ml左右的胰酶润洗一遍，吸掉弃之，再加入１ml左右的胰酶消化。消化的同时置于显微镜下观察，待细胞与细胞之间间隙明显的时候立即吸掉胰酶与干净子弹头里备用，加入新培养基开始吹打，吹打２-３遍后吸取悬液于试管或新瓶暂存。用２ml左右新培养基洗一遍与前面的混合。（你也可以传入新瓶培养，以与后面及前面的做对比。）这是第三步。４)然后把前面刚吸出来的胰酶重新加进去瓶里继续消化剩余的贴壁牢固的细胞。当然你也可以用新的胰酶，如果你们那比较富裕的话，呵呵。继续镜下观察，待剩余细胞间隙明显，细胞独立开来的时候，吸掉胰酶，加入新培养基吹打。悬液传入新瓶培养（根据实际情况你自己把握）。这是第四步。其实还可以有第五步，对于特别难消化的细胞和对胰酶特别敏感的细胞的话，你可以继续加第五步甚至第六步。为了细胞更好的状态，更漂亮的样子，没办法，你必须分多批多次消化，这样才能限度地将胰酶对细胞的损伤降到最低，保证细胞的状态能够。当然了，如果细胞是属于那种很容易消化的细胞，像RAW２６４.７，仅仅第二步就搞定了。就没必要第三步第四步了。这个是需要你在实验中能够自己用心去体会的。建议你接受一个新细胞时把各步消化的细胞分别培养起来做比较，去摸索好细胞对胰酶的要求。便于你后续实验的开展。将细胞消化分成这几步，除了是为了避免胰酶对细胞的损伤之外，还有一个更重要的作用就是，可以程度地把细胞吹打成单个单个的状态，不成片不连体。 
细胞形态特性：详见细胞说明书 
CCD-841CoTr细胞系相关产品：Fao细胞、NuTu 19细胞、UPCI-SCC-090细胞 
DMS 53细胞系相关产品：CCRF-CEM C7细胞、VB细胞、Eca 109细胞 
COV 504细胞系相关产品：HGBEC细胞、NCI-H520细胞、L-132细胞 
8226细胞系相关产品：HCT-15细胞、H-1930细胞、NCI H295R细胞 
LNCaP clone FGC细胞系相关产品：Centre Antoine Lacassagne-51细胞、H2330细胞、JKT-1细胞 
A-172MG细胞系相关产品：HLEpiC细胞、SKG IIIa细胞、MD Anderson-Metastatic Breast-361细胞 
HaCaT细胞系相关产品：HO-1-N-1细胞、Be Wo细胞、MGSMC细胞 
Bac1 2F5细胞系相关产品：X63Ag8.653细胞、PanC1细胞、Hu-P-T4细胞 
Hs 606细胞系相关产品：L132细胞、NCI-H2081细胞、NTERA-2 clone D1细胞 
3T6细胞系相关产品：L cells细胞、alpha TC1-6细胞、OV 1063细胞 
Kit225/K6细胞系相关产品：J111细胞、GM00215细胞、OCI-AML4细胞 
HB 611细胞系相关产品：RPMI #1846细胞、CAL12T细胞、H2405细胞 
XWLC-05细胞系相关产品：H1770细胞、V79-1细胞、Hela-mock细胞 
KM12 SM细胞系相关产品：Madin Darby Bovine Kidney细胞、SCH细胞、GAK细胞 
RPMI 7951细胞系相关产品：X63.Ag8.653细胞、BEAS 2B细胞、SU-DHL-4细胞 
Lewis Lung Cancer细胞系相关产品：Embryonic Bovine Tracheal cells细胞、HEL-1细胞、Caki-1细胞 
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HEC151细胞系相关产品：Monomac-1细胞、LN-382细胞、253J细胞 
alpha TC1 clone 6细胞系相关产品：Leukemic 1210细胞、COLO-320-HSR细胞、H19-7细胞 
VM Cub 1细胞系相关产品：INS1E细胞、HLEpiC细胞、22Rv1细胞 
WILL-2 人弥漫大B淋巴瘤细胞系
VMCUB-1细胞系相关产品：Huh 7.5.1细胞、NB1RGB细胞、NOR10细胞 
NCIH2107细胞系相关产品：H295R细胞、CD-18细胞、Hs 822.T细胞 
Hs888T细胞系相关产品：C4 I细胞、LPC-H12细胞、GOS3细胞 
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Bat lung细胞系相关产品：LTEP-sm细胞、SHI1细胞、H-187细胞 
COLO 16细胞系相关产品：EFM192C细胞、MSTO-211H细胞、MES23.5细胞 
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LOUNH91细胞系相关产品：CCD-112 CoN细胞、HSC-T6细胞、Vx-2细胞 
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MPP89细胞系相关产品：HNEpC细胞、MBdSMC细胞、KS-SLK细胞 
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MH-S细胞系相关产品：Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-1细胞、PC12(高分化)细胞、KE39细胞 
293 HEK细胞系相关产品：FAO-1细胞、Huh 7.5细胞、Sp 2/0-Ag 14细胞 
Panc2.03细胞系相关产品：AMJ2-C8细胞、U266BL细胞、C 6细胞 
IPAM-WT细胞系相关产品：Mink细胞、Hs 822.T细胞、BEND细胞 
Kasumi-1细胞系相关产品：NCIH1623细胞、HL-60 Clone 15细胞、NCI-H1155细胞 
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C-6细胞系相关产品：MRC9细胞、JIMT细胞、GM-637细胞 
LU451细胞系相关产品：J82 COT细胞、NCI-H1238细胞、MRC 5细胞 
WILL-2 人弥漫大B淋巴瘤细胞系
Granta-519细胞系相关产品：RMS13细胞、RPMI 8226/S细胞、SUM 102PT细胞 
VE细胞系相关产品：GC-2spd(ts)细胞、LM3细胞、EA.Hy926细胞 
TE-12细胞系相关产品：SKNBE细胞、U2-OS细胞、SuDHL 1细胞 
ELD-1细胞系相关产品：SKNEP-1细胞、22Rv-1细胞、BT-483细胞 
CEM C7细胞系相关产品：NPC-TW 039细胞、A2008细胞、BeWo细胞 
Duke University 145细胞系相关产品：M619细胞、D-283 Med细胞、Japanese Tissue Culture-39细胞 
H35细胞系相关产品：OV 2008细胞、6T-CEM细胞、OVCAR8细胞 
WM-115细胞系相关产品：NCIH1944细胞、MHHCALL2细胞、SK-BR-3细胞 
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Line 697细胞系相关产品：HUT 226细胞、C-Lu-65细胞、alpha TC1.6细胞 
102PT细胞系相关产品：KMH2细胞、HEK293FT细胞、SW 480细胞 
COV 504细胞系相关产品：HGBEC细胞、H-1299细胞、OE21细胞 
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