NCI-H1734细胞：人非小细胞肺癌细胞系

"NCI-H1734细胞：人非小细胞肺癌细胞系

细胞背景资料：详见相关文献介绍

细胞形态：上皮细胞样

细胞生长：贴壁

细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源

细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支)

细胞传代方法：１：４-１：６传代。

细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系

细胞生长特性：贴壁生长

【细胞培养中支原体、黑蛟虫、真菌的污染情况总结】支原体：黑色的，好象多为多形，培养液一般培养液一般会浑浊，原体感染，国内血清很多都没有做支原体阴性检测，而支原体是牛血清中最常见的微生物之一。而且它不能用过滤的办法除去。支原体感染细胞以后，细胞病变不很明显，只是慢慢死去。用泰乐菌素，兽用支原体病的药，但可用于细胞培养，无任何不良反应。如果作为常用的抗生素的话, 建议用８ug/ml的浓度；黑蛟虫：可以穿透滤膜，也可以通过空气传播，低倍下为黑色点状，高倍下可看见黑色的小虫游来游去，培养液也是不浑的，一般不会太影响，细胞还是可以用的。常常是细胞生长状态良好，且观测到的运动物无明显增多，且培养液颜色、透明度无明显变化，可在同一批号的血清养的细胞中发现类似现象。对细胞生长状态不会有明显影响，在细胞增殖旺盛之后会自然消失，除更换血清外无须特殊处理。建议如果细胞有可能是此种污染的话，可以增加细胞的种板密度，以提高细胞的生存率；真菌：一般培养液清亮，不变色，镜下有丝状物，有些真菌开始很像死细胞碎片，只是它很多很多的小块很清楚，象珊瑚状，不象细胞碎片分不清，慢慢的会长出很细的黑色丝状物。真菌生长的比较慢，不象细菌那么容易被发现，但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了，也很难救活了。

细胞培养时分布不均匀，通常操作步骤：做细胞生物学实验，细胞铺板大概是我们最常见的一个实验。但有时候铺得不是很均匀：要么中间密周围稀，要么周围密中间秃顶。下面为大家分享几点经验。尽量消化细胞分散成单细胞悬液。对于易于消化的细胞，我一般DPBS清洗一遍，加0.5ml胰酶润洗一遍（25cm2培养瓶或6孔板），弃掉胰酶，37度消化2-3分钟或室温消化5min左右，镜下观察是否细胞消化较为分散。如果不够，延长消化时间。96孔板一般以100微升每孔接种，直接用100微升移液器吸取细胞悬液，沿孔壁（稍离开一点孔底即可，不要离底太高）直接接入，移液器不需完全打到，轻轻按下即可，每铺完一行换一次枪头同时轻轻混匀细胞悬液。都加完后盖上盖子，左手轻轻扶住板的左边，右手轻轻敲击板的右边缘，注意把握力度（我一般轻巧敲三下），太强或次数太多会导致细胞集中成堆，将板顺时针旋转（逆时针效果不好），依次敲击剩余三个边，静置约5分钟，放入37度培养箱。6孔板、12孔板或24孔板，可采用将每个孔加入少量无血清培养基，晃动浸润整个孔底，然后用移液枪吸至第二孔，同样方法浸润孔底，其它孔依此类推，这样整个孔底都是湿润的，细胞悬液会平铺在整个孔底，注意加完细胞悬液后要放工作台静置一下。这个方法就是有点慢，但操作熟练了也不慢。也可以采用轻拍的方式，但力度没有96孔板好掌握，效果没有96孔板好。培养瓶里面加好细胞以后(比如传代好/分好细胞以后)，先顺时针摇晃3次，马上逆时针摇晃3次。然后延X轴Y轴分别水平摇动3次。放入CO2培养箱后,平放着培养瓶重复延X轴Y轴分别水平摇动3次。

细胞传代培养(消化法)标准操作规程【原理】细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代(再培养)。传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。【材料和试剂】１)无菌生理缓冲液(PBS)；２)胰酶-EDTA溶液(０.０５%胰酶-０.５３mM EDTA-４Na): 以１０ml分装于１５ ml无菌离心管中，保存于–２０℃，使用前放在３７℃水槽回温；３)新鲜培养基；４)无菌吸管/离心管/培养瓶【传代前准备操作】１)预热培养用液：把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入３７℃水浴锅内预热；２)用７５％酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手；３)正确摆放使用的器械：保证足够的操作空间，不仅便于操作而且可减少污染；４)点燃酒精灯：注意火焰不能太小；５)准备好将要使用的消毒后的空培养瓶；６)取出预热好的培养用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内；７)从培养箱内取出细胞：注意取出细胞时要旋紧瓶盖，用酒精棉球擦拭显微镜的台面，再在镜下观察细胞；８)打开瓶口：将各瓶口一一打开，同时要在酒精灯上烧口消毒。

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