标本要求 :
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
以下是产品参数规格:
产品名称:小鼠诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)ELISA试剂盒
英文名称:Mouse inducible nitric oxide synthase,iNOS ELISA Kit
规格:48T/96T
货号:A104770
试剂盒规格:96T/48T
试剂盒说明书:48孔配置一份/96孔配置一份
种属:人、大鼠、小鼠、兔、猪、犬、猴、马、牛、羊、鸡、鸭、鱼等,多年专业酶免服务,质量保证,免费提供代测服务。
用途 :
仅供科研使用,定量检测细胞液、体液、组织、血清、血浆等标本中大肠杆菌宿主残留蛋白iNOS的含量。
原理:
小鼠诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)ELISA试剂盒采用竞争法测定大肠杆菌宿主残留蛋白iNOS水平。用大肠杆菌宿主残留蛋白iNOS抗原包被微孔板,制成固相载体,实验 时依次在微孔板中加入标本及标准品,并加入 HRP 标记的iNOS抗体,标本及标准品中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与 固相抗原结合。反复洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在过氧化物酶的催化下转化为蓝色,再用硫酸终止反应,转变成黄色。
标本中抗体量越多,结合在固相上的酶标抗体愈少,颜色越浅。颜色的深浅和样品中的iNOS含量呈负相关。采用酶标仪在 450nm 波长测定吸光度(OD 值),根据标准曲线,计算测试样品中iNOS浓度。
试剂盒组成及试剂配制 :
1. 酶联板(Assay plate ):一块(96孔)。
2. 标准品(Standard):2瓶(冻干品)。
3. 样品稀释液(Sample Diluent):1×20ml/瓶
4. 生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
5. 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
6. 生物素标记抗体(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
7. 辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
8. 底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
9. 浓洗涤液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10. 终止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
操作步骤:
1)标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2)加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3)温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4)配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5)洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6)加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7)温育:操作同3。
8)洗涤:操作同5。
9)显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟.
10)终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11)测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行
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