COR-L105细胞：人原发性非小细胞肺癌细胞系

"COR-L105细胞：人原发性非小细胞肺癌细胞系
细胞背景资料：详见相关文献介绍
细胞形态：上皮细胞样
细胞生长：贴壁
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支)
细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分
细胞接收后的操作流程与注意事项：１)如果细胞为贴壁细胞，而收到时呈悬浮或者部分悬浮的状态，请将悬浮的细胞即时离心，加１５%血清的完全培养基到新的培养皿/瓶继续培养３天；同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为１５%血清的完全培养基培养３天。３天后若原瓶或者新瓶中的细胞都没有出现增值而是继续脱落死亡，请及时联系实验室技术人员会跟进解决；２)贴壁细胞生长缓慢；适当提高血清浓度(最高不能超过２０%)，或可根据该细胞生长密度，考虑胰酶消化后，转移到新的培养瓶继续培养；３)生长不均：贴壁细胞若出现分布不均，成岛状生长，可将细胞进行消化，重悬打散细胞，加入新鲜培养基进行培养。
贴壁消化难题：１，先用PBS 把细胞洗两遍，使瓶内没有血清了，减少对胰酶的中和，然后用新配的０.２５%的胰酶加入３ml左右，放在３７度，然后可以在细胞有些消化下来时，拿着瓶口，运用手腕的力量轻轻震荡瓶内液体，这样细胞很快就下来了，还不需要吹打，分散也均匀；２，成团、絮状：消化液里加入edta可以减少细胞成团的现象，血清可以终止胰酶的作用，如果是进口血清的话也能终止edta的作用。用胰酶消化后胰酶可以倒掉，也可以不倒，直接加血清终止，如果消化液中加入了edta的话，就要将消化液倒干净，如果细胞贴壁要求不是很严格的话，一般不需要进行离心。鼻咽癌细胞的贴壁能力很强，用０.５%胰酶(含０.１%EDTA)一般要消化１２~１５min。用PBS洗涤时要洗净残余的培养基，加入胰酶后在培养箱中消化(避免细胞室温下受损以及在此温度时胰酶活性最强)至细胞收缩变圆(可显微镜下观察)且有少许细胞脱落(有流下来的趋势)，随后立即弃去胰酶(如果脱落的细胞很多且需要大量细胞实验，则不能弃去胰酶)，加入培养基仔细吹打(不能用无血清培养基或者PBS替代，否则细胞聚集成团块或絮状)。一般我都离心一次弃去上清(去除残留的胰酶及漂浮的死细胞或细胞碎片)；消化过度：马上用培养基中和，用吸管吹打细胞，收集全部的细胞到以无菌的离心管中８００RPM ３分钟。弃上清，用全培重悬，换新的培养瓶继续培养，状态不好的细胞在培养的过程中会死亡脱落，在换液的时候可以清除掉！
细胞培养中支原体污染的经验分享：支原体是一类缺乏细胞壁的原核细胞型微生物，大小一般在０.３-０.５um之间，呈高度多形性，有球形、杆形、丝状、分枝状等多种形态。它不同于细胞，也不同于病毒。支原体用普通染色法不易着色，用姬姆萨染色很浅，革兰染色为阴性。支原体可在鸡胚绒毛尿囊膜上或细胞培养中生长，营养要求比细菌高。细胞培养(特别是传代细胞)被支原体污染是个世界性问题。在细胞培养中支原体感染发生率达到６３%，支原体感染发生后能改变细胞的DNA,RNA及蛋白表达，又不能通过可视法对其进行检测，而且它对细胞的生长率影响较小，不易引起注意。国内外研究表明，９５%以上是以下四种支原体：口腔支原体(M.orale)、精酸支原体(M.arginini)、猪鼻支原体(M.hyorhinis)和莱氏无胆甾原体(A.laidlawii)，为牛源性。以上是最常见的污染细胞培养的支原体菌群，但能够污染细胞的支原体种类是很多的，国外调查证明，大约有二十多种支原体能污染细胞，有的细胞株可以同时污染两种以上的支原体。支原体污染的来源包括工作环境的污染、操作者本身的污染(一些支原体在人体是正常菌群)、培养基的污染、污染支原体的细胞造成的交叉污染、实验器材带来的污染和用来制备细胞的原始组织或器官的污染。组织细胞培养工作中，主要从以下几个方面来预防支原体的污染：控制环境污染;严格实验操作；细胞培养基和器材要保证无菌；在细胞培养基中加入适量的抗生素。支原体污染细胞后，特别是重要的细胞株，有必要清除支原体，常用方法有抗生素处理、抗血清处理、抗生素加抗血清和补体联合处理。支原体最突出的结构特征是没有细胞壁，一般来讲，对作用于细胞壁生物合成的抗生素，如万古霉素等完全不敏感；对多粘菌素(polymycin)、利福平、磺胺药物普遍耐药。对支原体最有抑制活性及常用于支原体感染治疗的抗生素是四环素类、大环内酯类及一些喹诺酮;其他类抗生素如基糖苷类、霉素对支原体有较小抑制作用，所以常不用来作为支原体感染的化学治疗剂。
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