NE-1细胞：人永生化食管上皮细胞系

"NE-1细胞：人永生化食管上皮细胞系
细胞背景资料：详见相关文献介绍
细胞形态：上皮细胞样
细胞生长：贴壁
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支)
细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分
细胞培养无菌操作的演示：凡是带入超净工作台内的酒精、PBS、培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用７５％酒精擦拭瓶子的外表面；靠近酒精灯火焰操作。器皿使用前必须过火灭菌，继续使用的器皿(如瓶盖、滴管)要放在高处，使用时仍要过火。各种操作要靠近酒精灯，动作要轻、准确，不能乱碰。如吸管不能碰到废液缸。吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管，防止交叉污染。玻璃器械洗消：一、新的玻璃器皿的洗消：自来水刷洗，除去灰尘。烘干、泡：烤箱中烘干，然后再浸入５％稀中１２小时以除去脏物、铅、等物。刷洗、烘干：１２小时后立即用自来水冲洗，再用洗涤剂刷洗，自来水冲干净后用烤箱烘干；泡酸、清洗：用清洁液浸泡１２小时，然后从酸缸内捞出器皿用自来水冲洗１５次，最后蒸馏水冲洗３-５次和用双蒸水过３次。烘干、包装：洗干净后先烘干，然后用牛皮纸(油光纸)包装。高压消毒：包装好的器皿装入高压锅内盖好盖子，打开开关和安全阀，当蒸气成直线上升时，关闭安全阀，当指针指向１５磅时，维持２０-３０分钟。高压消毒后烘干。二、旧的玻璃器皿的洗消：刷洗、烘干：使用过的玻璃器皿可直接泡入来苏尔液或洗涤剂溶液中，泡过来苏尔溶液(洗涤剂)的器皿要用清水刷洗干净，然后烘干。泡酸、清洗：烘干后泡入清洁液(酸液)，１２小时后从酸缸内捞出器皿立即用自来水冲洗(避免蛋白质干涸后粘附于玻璃上难以清洗)，再用蒸馏水冲洗３次。烘干、包装：洗干净的器皿烘干后取出用牛皮纸(油光纸)等包装。
公司细胞库冻存并保种有2300多种各类细胞系。针对每种不同的细胞系，公司摸索并积累了大量细胞培养条件和优化参数，为您的细胞实验保驾护航。细胞培养是生命科学研究中最基础、也是最常用的实验手段。从冻存→复苏→传代→实验，在每一次细胞培养的过程中我们都是精心呵护，小心培养，心里都是默默承诺：我要护你一世周全！可是可是……无数次细胞都因污染而离我而去，投入的不只是我们貌美如花的青春，还有那一去不复返的经费！在细胞生物学，生物化学，免疫学，神经生物学，病理学……只要涉及细胞的研究领域，都面临着支原体污染的威胁。在众多污染物中，也就属支原体最狡猾了，他最善于隐藏自己，因为被支原体污染的细胞不会马上死亡，但会改变细胞的新陈代谢，甚至会改变细胞的基因表达谱，我们就这样被欺骗了无数次，谁让我们就是个看“颜值”的花痴了。可是我们通过被虐了几百次的经验中总结出来，当你的细胞出现了这些症状时：生长速率改变；活性减弱；形态改变；染色体畸变；转染效率显著降低；细胞复苏后存活率降低……。那你就得千万小心了，也许你的细胞已经被支原体欺凌了！
因为细胞生长的时候肯定是要相互联系，大部分的细胞都是要成片生长的，尤其是对于贴壁细胞，单个细胞贴壁之后长着长着就长到一片去了。但是如果是成片的细胞抱团的话，传代后细胞是不能贴壁的，这样抱团的细胞就会死亡。所以，消化传代的时候一定要将细胞消化成单个单个的独立状态，这个啊是非常考究你的功夫的！细胞一旦脱落入悬液里你很难再将他吹打成单个，因为他没有受力点了。很难找到受力点让你对他吹打的力分散开细胞。所以必须要在细胞未脱落之前将其吹打开，受力点就是细胞贴壁的地方。这样你就必须要严格控制好消化的程度啊，这和大师做饭掌握好火候是一样的道理啊。既要消化到容易吹打下来，又不能太过，一吹就整片脱落，要单个单个地往下掉。所以我才要分批分次地加胰酶消化就是为了保证不同生长状态贴壁程度的细胞能够都维持在好的受力点分散开。这个是很重要的一点。尤其是对于某些细胞这一点就是他活去死的致命点。像Caco-２细胞就是如此。另外关于传代很重要一点就是一定不能等到细胞长满的时候才去消化传代。要在细胞长到７０%左右的时候就要传代了，一旦发现细胞生长中已经有叠层生长的时候就要立即进行消化传代。不能再拖了。关于换液传代时候洗瓶的问题。对于用DMEM培养基培养的细胞，你在洗的时候如果是用无血清１６４０去洗细胞在随即后的几次中会比用DMEM洗的长的要好。同样，用１６４０培养的也有这个现象。如果不嫌麻烦的话，可以用PBS来洗，洗的效果和用无血清培养基洗的效果基本上是一样的，对于有些细胞会更胜一筹。洗的目的主要是洗去培养瓶里残留的血清，防止它对胰酶的影响。这样能够保证胰酶的消化能力优先，是很关键的一点。先补充这么多，还会后续更新。再补充一点：传代时PBS洗是很重要的一步，最近发现，用PBS就可以把细胞消化开来。加入PBS放置１０-１５分钟，有些需要更长的时间，等到细胞一个个分离开来的时候，就可以直接吹打下来，但是和胰酶消化一样，要控制好时间，不能时间太过了，要不然损伤细胞，细胞不容易成活，状态容易不好。这个方法对于某些细胞是很管用的。有些细胞用胰酶消化不容易消化成单个的时候，或者临时没有胰酶了，可以选用此方法。不过一定要试试，看是否适合你的细胞。
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