HL-60 Clone 15细胞：人急性早幼粒细胞白血病细胞系

"HL-60 Clone 15细胞：人急性早幼粒细胞白血病细胞系
细胞背景资料：详见相关文献介绍
细胞形态：淋巴母细胞样
细胞生长：悬浮
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支)
细胞传代方法：维持细胞浓度在１×１０５-１×１０６/ml,每２-３天换液１次。
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
细胞生长特性：悬浮生长
细胞传代培养的胰酶消化法：传代培养：是指细胞从一个培养瓶以１：２或１：２以上的比例转移，接种到另一培养瓶的培养。传代细胞，可根据不同细胞采取不同的方法进行细胞传代。贴壁生长的细胞用消化法传代，部分贴壁的细胞用直接吹打或用硅胶软刮的刮除法传代。悬浮细胞可采用加入等量新鲜培养基后直接吹打分散进行传代，或用自然沉降法加入新培养基后再吹打分散进行传代。实验步骤：①入无菌室之前用肥皂洗手，再用７５% 的酒精擦拭消毒双手；②倒置显微镜下观察细胞形态，确定细胞是否传代及细胞需要稀释的倍数。将培养用液３７℃下预热；③超净台台面应整洁，用７５%酒精棉球擦拭清洁；④打开超净工作台的紫外灯照射台面２０min左右，关闭紫外灯，打开风机清洁空气除去臭氧；⑤点燃酒精灯;取出无菌试管，巴士德吸管和刻度吸管;安上橡皮头;过酒精灯火焰略烧后插在无菌试管内；⑥将培养用液瓶口用７５%酒精消毒，过酒精灯火焰后斜置于酒精灯旁的架子上；⑦倒掉培养细胞的旧培养基。酌情可用２-３ml Hanks液洗去残留的就培养基，或用少量胰酶涮洗一下；⑧每个大培养瓶加入１ml胰酶，小培养瓶用量酌减，盖好瓶盖后在倒置显微镜下观察。当细胞收回突起变圆时立即翻转培养瓶，使细胞脱离胰酶，然后将胰酶倒掉。注意勿使细胞提早脱落入消化液中；⑨加入少量的含血清的新鲜培养基，反复吹打消化好的细胞使其脱壁并分散，再根据分传瓶数补加一定量的含血清的新鲜培养基(７-１０ml/大瓶;３-５ml/小瓶)制成细胞悬液，然后分装到新培养瓶中。盖好瓶盖，适度拧紧后稍回转，以利于CO２的进入，将培养瓶放回CO２培养箱；⑩对悬浮培养细胞，步骤７-９不做。直接将细胞悬液进行离心去除旧培养基上清，加入新鲜培养基，然后分装到各瓶中。
冻存和复苏的原则：慢冻快融》当细胞冷到零度以下，可以产生以下变化：细胞器脱水，细胞中可溶性物质浓度升高，并在细胞内形成冰晶。如果缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水，细胞内不致产生大的冰晶；相反，结晶就大，大结晶会造成细胞膜、纲胞器的损伤和破裂。复苏过程应快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重结晶。慢冻程序》1.标准程序：采用细胞冻存器》当温度在-25℃以上时，1~2℃/min；当温度达-25℃以下时，5~10℃/min；当温度达-100℃时，可迅速放入液氮中。2.简易程序：将冷冻管（管口要朝上）放入纱布袋内，纱布袋系以线绳，通过线绳将纱布袋固定于液氮罐罐口，按每分钟温度下降1~2℃的速度，在40min内降至液氮表面过夜，次晨投人液氮中。3.传统程序：冷冻管置于4℃10分钟→-20℃30分钟→-80℃16~18小时（或隔夜）→液氮槽长期储存。细胞冻存方法：1.预先配制冻存液》（1）8%DMSO+细胞生长液（92%血清）2.取对数生长期细胞，经胰酶消化后，加入适量冻存液，用吸管吹打制成细胞悬液（1×10(6)~5×10(6)细胞/ml）。3.加入1ml细胞于冻存管中，密封后标记冷冻细胞名称和冷冻日期。液氮长期保存。保存细胞的复苏方法：1.快速解冻》冻存细胞从液氮中取出后，立即放入37℃水浴中，轻轻摇动冷冻管，使其在1分钟内全部融化（不要超过3分钟）。2.解冻后的细胞可直接接种到含完全生长培养液的细胞培养瓶中直接进行培养，24小时后再用新鲜完全培养液替换旧培养液，以去除DMSO。3.如果细胞对冷冻保护剂特别敏感解冻后的细胞应先通过离心去除冷冻保护剂，然后再接种到含完全生长培养液的培养瓶中。
细胞传代时消化的问题：可以这样说，对于需要消化传代的细胞，每一次的消化都是对这个细胞存活与否，状态好与不好最至关重要的考验。很多同学都遇到过这个问题，自己养的细胞开始的几代长的还挺好的，可是穿过几代之后就发现自己的细胞，状态越来越差劲了。对于这个问题，可以非常肯定地说，你的消化环节出问题了。你每一次的消化都让细胞受到较大损伤了。所以，越长越差。在消化的过程中，你加入胰酶后，所有细胞都在被胰酶消化着，但是我们忽视了一个问题就是，细胞的生长状态是不一样的，每一个细胞的贴壁情况也是不一样的，有的贴壁牢固，有的贴壁没有那么牢固的，所以，让所有的细胞消化同样的时间对细胞是不公平的，他们受到了差别待遇当然会有脾气啊。我后来对消化的方法进行了改良。争取做到因材施教呵呵。我称之为“四步消化法”。（以难消化细胞为例）；具体操作：１)首先不加胰酶，倒掉旧培养基加入少量新培养基洗１-２遍，（这是前奏，即为步，目的是将漂浮着的死细胞之类尽量洗掉。２)然后再加入少量新培养基直接吹打一遍，这一遍是把贴壁不牢固的细胞吹打下来。再用培养基洗一遍，两次所得悬液混合传入新瓶。即为第二步（你可以将这些传入新瓶培养，以与后面胰酶消化过的细胞对比观察看谁长的更好一点就知道该细胞对胰酶的敏感度了。）３)吸干净瓶内剩余液体，加入０.３ml左右的胰酶润洗一遍，吸掉弃之，再加入１ml左右的胰酶消化。消化的同时置于显微镜下观察，待细胞与细胞之间间隙明显的时候立即吸掉胰酶与干净子弹头里备用，加入新培养基开始吹打，吹打２-３遍后吸取悬液于试管或新瓶暂存。用２ml左右新培养基洗一遍与前面的混合。（你也可以传入新瓶培养，以与后面及前面的做对比。）这是第三步。４)然后把前面刚吸出来的胰酶重新加进去瓶里继续消化剩余的贴壁牢固的细胞。当然你也可以用新的胰酶，如果你们那比较富裕的话，呵呵。继续镜下观察，待剩余细胞间隙明显，细胞独立开来的时候，吸掉胰酶，加入新培养基吹打。悬液传入新瓶培养（根据实际情况你自己把握）。这是第四步。其实还可以有第五步，对于特别难消化的细胞和对胰酶特别敏感的细胞的话，你可以继续加第五步甚至第六步。为了细胞更好的状态，更漂亮的样子，没办法，你必须分多批多次消化，这样才能限度地将胰酶对细胞的损伤降到最低，保证细胞的状态能够。当然了，如果细胞是属于那种很容易消化的细胞，像RAW２６４.７，仅仅第二步就搞定了。就没必要第三步第四步了。这个是需要你在实验中能够自己用心去体会的。建议你接受一个新细胞时把各步消化的细胞分别培养起来做比较，去摸索好细胞对胰酶的要求。便于你后续实验的开展。将细胞消化分成这几步，除了是为了避免胰酶对细胞的损伤之外，还有一个更重要的作用就是，可以程度地把细胞吹打成单个单个的状态，不成片不连体。
KYSE-150细胞系相关产品：BJA-B细胞、74Int细胞、Ly1细胞
ROS17/2.8细胞系相关产品：WERI细胞、HOS TE 85细胞、SKNAS细胞
SW837细胞系相关产品：MRC 5细胞、293AD细胞、EBC-1细胞
SMA560细胞系相关产品：Kit 225 K6细胞、CEM/0细胞、PECAPJ34细胞
DrG细胞系相关产品：H1373细胞、OAW42细胞、JB6 clone 30, subclone 7b细胞
CAMA细胞系相关产品：CAL 51细胞、TSU-Pr1细胞、H929细胞
P3.653细胞系相关产品：Ect1/E6E7细胞、Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-2细胞、H446细胞
C41细胞系相关产品：HEK293-A细胞、C2A细胞、EMT6细胞
mIMCD-3细胞系相关产品：NIH:OVCAR4细胞、BJA-B细胞、H1882细胞
MOPC细胞系相关产品：HS-294细胞、GM3570细胞、C57 Mouse Tumor 64细胞
H1688细胞系相关产品：T/G HA VSMC细胞、KLM1细胞、HEL-299细胞
CoCL3细胞系相关产品：H1355细胞、H2228细胞、T-ALL1细胞
LLC细胞系相关产品：SK-RC 52细胞、Eca 109细胞、OCI-AML-2细胞
NCI-H1373细胞系相关产品：HLMVEC细胞、Colon 38细胞、RIN Cl-5F细胞
CMT 64细胞系相关产品：TGBC11T细胞、M20 [Human melanoma]细胞、NEC8细胞
He La细胞系相关产品：C81-61细胞、EST50细胞、M210B4细胞
He La细胞系相关产品：C81-61细胞、EST50细胞、M210B4细胞
Chang liver细胞系相关产品：COS-7细胞、IB-RS2细胞、L-6TG细胞
KM.12细胞系相关产品：HFLS细胞、GM02131细胞、SK HEP 01细胞
ATN1细胞系相关产品：NOR 10细胞、GM-215细胞、H-727细胞
hOMF细胞系相关产品：Nthy ori 3.1细胞、JM-1细胞、OV 2008细胞
MV411细胞系相关产品：SCC7细胞、Transformed C3H Mouse Kidney-1细胞、PFSK细胞
SW1222细胞系相关产品：HRA 19细胞、Normal Rat Kidney-49F细胞、HCC941122细胞
MHCC-97细胞系相关产品：U-343细胞、LL2细胞、PTK-1细胞
NCIH1299细胞系相关产品：H1650_CO细胞、JS1细胞、Swiss 3T6细胞
ES-2细胞系相关产品：OCI/AML-2细胞、GMK,BSC-1细胞、TOV-112细胞
CEF细胞系相关产品：Mesothelial cells transfected with pRSV-T 5A细胞、343 MG细胞、MALME 3M细胞
U2OS细胞系相关产品：Hela-Ap-1细胞、BIU-87细胞、KLN-205细胞
HeLa/DDP细胞系相关产品：COLO 320细胞、KATO 3细胞、L-6 myoblast细胞
HCC1171细胞系相关产品：Wistar Institute-38细胞、MiaPaCa-2细胞、DSL-6A/C1细胞
MUTZ-3细胞系相关产品：H1915细胞、NCIH1734细胞、DV-90细胞
Baby Hamster Kidney-21细胞系相关产品：UMC-11细胞、SW527细胞、HCC4006细胞
MHCC 97-H细胞系相关产品：NIT-1细胞、SW-626细胞、16HBEo-细胞
Walker/LLC-WRC 256细胞系相关产品：GM05384细胞、Panc8.13细胞、HCT 8细胞
SNU-475细胞系相关产品：SuDHL 10细胞、TF-1a细胞、SuDHL 10细胞
SW-480细胞系相关产品：NCI-H78细胞、MSB-1细胞、BALL-1细胞
Kasumi-1细胞系相关产品：NCIH1623细胞、HL-60 Clone 15细胞、NCI-H1155细胞
SU86-86细胞系相关产品：H-4细胞、S3 HeLa细胞、UPCI:SCC090细胞
RPE1细胞系相关产品：WM 266-4细胞、H-2195细胞、CCD-112 CoN细胞
Hs 739.T细胞系相关产品：U138-MG细胞、HUVSMC细胞、OVCA 432细胞
G-292 clone A141B1细胞系相关产品：EB2细胞、NCIH244细胞、LLC1细胞
HASMC细胞系相关产品：HOS TE 85细胞、LIPF178C细胞、OCI Ly1细胞
DU 145细胞系相关产品：Fetal Human Lens-124细胞、McA-RH 8994细胞、U118-MG细胞
NS-20Y细胞系相关产品：CCRF CEM细胞、VK2细胞、U2932细胞
NTERA2D1细胞系相关产品：MARC145细胞、MGH-U3细胞、H2195细胞
RKO-AS-45-1细胞系相关产品：SGC996细胞、SuDHL 5细胞、Vero 76 clone E6细胞
Tu177细胞系相关产品：CMT64细胞、Mhh-Call 2细胞、HPDE细胞
GLC-15细胞系相关产品：LLCMK2细胞、INS-1E细胞、He-La细胞
NCI-H2291细胞系相关产品：NCI-H1299细胞、OCI-LY-19细胞、H1435细胞
Hs445细胞系相关产品：SK-RC-39细胞、CAL85-1细胞、CEM-C1细胞
High 5细胞系相关产品：PANC 327细胞、MA104细胞、MKN7细胞
OS-RC-2细胞系相关产品：NUGC2细胞、SF-767细胞、3T6细胞
Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-4细胞系相关产品：MDA-MB361细胞、SW-837细胞、Cloudman M3细胞
U-266 AR1细胞系相关产品：DI TNC1细胞、SU86.86细胞、H1819细胞
LC2/Ad细胞系相关产品：RCM1细胞、McG-1细胞、Hep II细胞
HS766T细胞系相关产品：CTLL(2)细胞、HMO6细胞、PZ-HPV-7细胞
HS766T细胞系相关产品：CTLL(2)细胞、HMO6细胞、PZ-HPV-7细胞
Chinese Hamster Lung细胞系相关产品：H-1568细胞、PNT1-a细胞、COLO-320-DM细胞
Hs852细胞系相关产品：FDCP1细胞、OCI-AML4细胞、PC-3M细胞
U-2932细胞系相关产品：Hs 839.T细胞、P3HR1细胞、NRK52E细胞
NCI-H1436细胞系相关产品：LNCaP FGC细胞、V79细胞、H2087细胞
2BS细胞系相关产品：alphaTC1 Clone 6细胞、NCI-H2030细胞、H69细胞
HBSMC细胞系相关产品：Hs 832(C).T细胞、SW1222细胞、CWR22R细胞
NK-92 transfected with MFG-hIL2细胞系相关产品：293GP细胞、KY70细胞、CHO-ori细胞
A-431细胞系相关产品：RL95-2细胞、Raji细胞、SKBR-3细胞
EMT-6细胞系相关产品：CTLL2细胞、MCM细胞、GA-10细胞
PLMVEC细胞系相关产品：JB6 clone 30, subclone 7b细胞、HTh-74细胞、L(TK-)细胞
Tn5B1-4细胞系相关产品：PC-2 [Human pancreatic carcinoma]细胞、B16/F10细胞、RCC10RGB细胞
SMA560细胞系相关产品：Kit 225 K6细胞、CEM/0细胞、PECAPJ34细胞
Hs832.Tc细胞系相关产品：Vero 76细胞、MDAMB231细胞、NCI-A549细胞
C3A细胞系相关产品：TCC-SUP细胞、B-cell Acute Lymphoblastic Leukemia-1细胞、NCI-SNU-C1细胞
H1238细胞系相关产品：Dysplastic Oral Keratinocyte细胞、Case 3细胞、293E细胞
SW837细胞系相关产品：MRC 5细胞、Malme-3 M细胞、SW-626细胞
Rat Chondrosarcoma Swarm细胞系相关产品：QGY 7701细胞、H-35 Reuber细胞、KE39细胞
"