抗体反应特点:
1.高度特异性,特异性是抗原抗体反应的最主要特征,特定抗原决定簇只与特定抗体结合;
2.产品仅用于科研可逆性:抗原与抗体结合形成抗原抗体复合物的过程是一种动态平衡, 其反应式为:Ag+AbAg·Ab;
3.适当浓度和比例;
4.敏感性:在测定血清中某一物质的含量时,化学比色法的敏感度为mg/ml水平,酶反应测定法的敏感度约为5~10μg/ml,免疫测定中凝胶扩散法的敏感度与酶反应法相仿。
1号染色体开放阅读框177抗体 别 名 Chromosome 1 open reading frame 177; FLJ40201; Hypothetical protein LOC163747; Uncharacterized protein C1orf177; CA177_HUMAN.
浓 度 1mg/1ml
规 格 0.2ml/200μg
抗体来源 Rabbit
克隆类型 polyclonal
交叉反应 Human, Mouse, Rat
产品类型 一抗
英文名称 Anti-C1orf177
中文名称 1号染色体开放阅读框177抗体
研究领域 肿瘤 细胞生物 免疫学 神经生物学
蛋白分子量 predicted molecular weight: 48kDa
性 状 Lyophilized or Liquid
免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human C1orf177
亚 型 IgG
纯化方法 affinity purified by Protein A
储 存 液 Preservative: 15mM Sodium Azide, Constituents: 1% BSA, 0.01M PBS, pH 7.4
产品应用 WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IP=1:20-100 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 ICC=1:100-500 IF=1:100-500
(石蜡切片需做抗原修复)
抗体反应的因素:
1.电解质 :抗原抗体特异结合后,胶体粒便可发生脱水作用,此时易受电解质影响,如有适当浓度的电解质存在就会使它们失去部分负电荷而相互凝聚,于是出现明显的凝集或沉淀现象。
2.酸碱度:合适的pH为6-8。
3.温度:37℃通常是抗原体反应最适温度。
含试剂:
1、一抗(应用:IHC-P=1:400-800 IHC-F=1:400-800 )
2、无色试剂:内源性过氧化物酶阻断剂
3、试剂A:封闭用正常山羊血清工作液
4、试剂B:生物素标记二抗工作液:生物素标记羊抗兔IgG
5、试剂C:辣根酶标记链酶卵白素工作液
6、显色液D液 (棕色) 1ml
7、显色液E液(白色)20ml
实验步骤:
1、石蜡切片,常规脱蜡至水
2、蒸馏水冲洗,pbs 浸泡5 分钟(如需采用抗原修复,在此步骤后进行)。
3、3%双氧水去离子水(无色液体)孵育15-20 分钟,以消除内源性过氧物酶活性。
4、滴加试剂A(蓝色液体)室温孵育15-20 分钟,倾去,勿洗。
5、滴加适当比例稀释的一抗,37℃孵育2-3 小时或4℃过夜。
6、PBS 冲洗,3 分钟3 次。
7、滴加试剂B(黄色液体),室温或37℃孵育15-20 分钟。
8、PBS 冲洗,3 分钟3 次。
9、滴加试剂C(橙色液体),室温或37℃孵育15-20 分钟。
10、PBS 冲洗,3 分钟3 次。
11、显色剂显色(DAB 或AEC)
12、自来水充分冲洗。
13、产品仅用于科研如果需要,可进行复染,脱水,透明。
14、选择适当的封片剂封片。
抗体的鉴定:
1)抗体的效价鉴定:不管是用于诊断还是用于治疗,制备抗体的目的都是要求较高效价。不同的抗原制备的抗体,要求的效价不一。鉴定效价的方法很多,包括有试管凝集反应,琼脂扩散试验,酶联免疫吸附试验等。常用的抗原所制备的抗体一般都有约成的鉴定效价的方法,以资比较。如制备抗抗体的效价,一般就采用琼脂扩散试验来鉴定。
2)抗体的特异性鉴定:抗体的特异性是指与相应抗原或近似抗原物质的识别能力。抗体的特异性高,它的识别能力就强。衡量特异性通常以交叉反应率来表示。交叉反应率可用竞争抑制试验测定。以不同浓度抗原和近似抗原分别做竞争抑制曲线,计算各自的结合率,求出各自在IC50时的浓度,并按公式计算交叉反应率。
如果所用抗原浓度IC50浓度为pg/管,而一些近似抗原物质的IC50浓度几乎是无穷大时,表示这一抗血清与其他抗原物质的交叉反应率近似为0,即该血清的特异性较好。
3)抗体亲和力:是指抗体和抗原结合的牢固程度。亲和力的高低是由抗原分子的大小,抗体分子的结合位点与抗原决定簇之间立体构型的合适度决定的。有助于维持抗原抗体复合物稳定的分子间力有氢键,疏水键,侧链相反电荷基因的库仑力,范德华力和空间斥力。亲和力常以亲和常数K表示,K的单位是L/mol。抗体亲和力的测定对抗体的筛选,确定抗体的用途,验证抗体的均一性等均有重要意义。
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1号染色体开放阅读框177抗体 Ganoderma│applanatum (Pers.) Pat.种属:Ganoderma│applanatum (Pers.) Pat.
分离基物:倒木
提供形式:斜面培养物
安全等级:1
模式菌株:no
培养方法
培养基:14
生长条件:25
存储条件:液氮超低温冻结法;定期移植法扁芝