PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl氯仿进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
产品名称:木贼镰刀菌PCR试剂盒
英文名称:Fusarium equisetiPCR
编号: FSP1678
分类:PCR检测试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意:DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA,后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线(以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水(用带芯枪头,下同)。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL,建议每次稀释 10 倍,梯度稀释至 10E7 拷贝/μL)。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头,从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头,从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中,重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 产品仅供科研从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR(见下步),每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值,并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线。
数据采集:
鹦鹉热衣原体PCR试剂盒品牌具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合DNA 时,吸收光谱在 471nm,结合 DNA 时的吸收光谱在 500nm,发射光谱在 530nm。
数据处理:
鹦鹉热衣原体PCR试剂盒品牌以 Cps 阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品浓度的 log 为横轴,以 Ct 值为纵轴,通过待测样品的 Ct 值计算出样品 DNA 的浓度。
C11orf2411号染色体开放阅读框24抗体特价促销anti- GK3P antibodyAcetic alcohol固着液血小板活化因子抗体
C11orf5311号染色体开放阅读框53抗体特价促销anti- GK5 antibodySusa 固着液蛋白酶激活受体-1抗体
C11orf5711号染色体开放阅读框57抗体特价促销anti- GKAP1 antibodyBouin固着液蛋白酶激活受体-2抗体
C11orf6511号染色体开放阅读框65抗体特价促销anti- GKN1 antibodyOrth固着液蛋白酶活化受体4抗体
C11orf7111号染色体开放阅读框71抗体特价促销anti- GKN2 antibodyHelly 固着液多腺苷二磷酸多聚酶抗体/多聚ADP-核糖聚合酶1
C11orf7311号染色体开放阅读框73抗体特价促销anti- GLAST antibodyB5固着液配对盒基因3抗体
C11orf7411号染色体开放阅读框74抗体特价促销anti- GLDC antibodyLowy FMA固着液配对盒基因8抗体
C12ORF412号染色体开放阅读框4抗体特价促销anti- GLI2-Specific antibodyHARTMAN固着液配对盒基因9抗体
木贼镰刀菌PCR试剂盒Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..FAM91A1 FAM91A1蛋白抗体牛疱疹病毒3型探针法荧光定量PCR试剂盒Imipenem 亚胺培南
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..ODF2/Cenexin1 精子尾部结构蛋白抗体牛疱疹乳头炎病毒探针法荧光定量PCR试剂盒亚胺培南-西司他丁钠
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..FAM84B/BCMP101 乳腺癌膜相关蛋白101抗体牛白血病病毒探针法荧光定量PCR试剂盒亚胺培南-西司他丁钠
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..TEF4/TEA domain family member 2 转录增强因子TEF4抗体牛结节疹病毒探针法荧光定量PCR试剂盒亚胺培南-西司他丁钠
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hanse ..FAM113A FAM113A蛋白抗体牛乳头瘤病毒探针法荧光定量PCR试剂盒替加环素
Ascochyta leptospora (Trail) Hara, anamorphFAM21C FAM21C蛋白抗体牛丘疹性口炎病毒探针法荧光定量PCR试剂盒替加环素
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..FAM13C1 FAM13C1蛋白抗体牛细小病毒探针法荧光定量PCR试剂盒替加环素
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..FAM161A FAM161A蛋白抗体猪痢疾短螺旋体探针法荧光定量PCR试剂盒伏立康唑
储存条件:
仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
关键字: 木贼镰刀菌;PCR试剂盒;50T;FSP1678;
上海抚生实业有限公司(Shanghai?Fusheng?Industrial?Co.,?Ltd.,China)是一家生物企业,主要从事免疫学、分子生物学和常规生化试剂的研发、销售。主营产品:生化试剂、试剂盒、ELISA试剂盒、抗体、重组蛋白、生化检测试剂盒、分光光度法检测试剂盒、荧光定量PCR检测试剂盒、细胞株、原代细胞、细胞培养基、标准溶液产品。代理并销售进口SIGMA试剂、abcam抗体、R&D抗体、CST抗体、ATCC细胞、BD公司、GE公司、赛默飞世尔公司产品。
上海抚生实业有限公司(Shanghai?Fusheng?Industrial?Co.,?Ltd.,China)先后与天津中医学院、复旦大学、上海交通大学医学院、上海交通大学、华东师范大学、第二军医大学、南京大学,暨南大学,南京工业大学,曙光医院、华山医院、瑞金医院、上海有机研究所、中科院上海分院等多家单位建立了良好的合作关系。本公司可为您提供科研ELISA试剂盒,种属标本齐全,有专门针对人血清、血浆、全血、分泌物、尿液、细胞培养上清液、组织匀浆、组织液等标本的试剂盒;另有针对各种动物(鼠、兔、牛、马、鸡、猪、狗、山羊、猴、鱼)的科研试剂。
公司秉承“专注品质、信守承诺、积极沟通、创新服务”的企业文化积极参与生物领域的技术创新和技术服务,力求为我国科研事业更好的,更专业的服务!
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