PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl氯仿进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
产品名称:纳氏虫属通用·PCR定量试剂盒
英文名称:Naegleria spp.·PCR
编号: FSP1959
分类:PCR检测试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意:DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA,后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线(以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水(用带芯枪头,下同)。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL,建议每次稀释 10 倍,梯度稀释至 10E7 拷贝/μL)。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头,从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头,从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中,重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 产品仅供科研从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR(见下步),每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值,并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线。
数据采集:
鹦鹉热衣原体PCR试剂盒品牌具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合DNA 时,吸收光谱在 471nm,结合 DNA 时的吸收光谱在 500nm,发射光谱在 530nm。
数据处理:
鹦鹉热衣原体PCR试剂盒品牌以 Cps 阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品浓度的 log 为横轴,以 Ct 值为纵轴,通过待测样品的 Ct 值计算出样品 DNA 的浓度。
H1N1 Hemagglutinin 1/HA probe甲型流感病毒血凝素抗体特价促销anti- NEDD1 antibody2-丙烯酰氨基-2-甲基-1-丙烷磺酸丹皮酚
H2N2 Hemagglutinin甲型流感病毒血凝素抗体(H2N2)特价促销anti- NEDD4 antibody2-氨基-6-甲氧基吡啶圣草酚
Histone H2A组蛋白H2A抗体特价促销anti- NEDD4L antibody2-氨基-6-甲氧基吡啶大豆苷
Acetyl-Histone H2A(K5)乙酰化组蛋白H2A抗体特价促销anti- NEDD8 antibody4-氨基苯硼酸频哪醇酯苍术素
Histone H2A.x组蛋白H2AX抗体特价促销anti- NEIL1 antibody4-氨基苯硼酸频哪醇酯木香烃内酯
Phospho-Histone H2A.X (Ser139)磷酸化组蛋白H2AX抗体特价促销anti- NEIL3 antibody丙烯酰胺酸枣仁皂苷A
Phospho-Histone H2A.X (Tyr143)磷酸化组蛋白H2AX抗体特价促销anti- NEK11 antibody丙烯酰胺酸枣仁皂苷B
Histone H2B组蛋白H2B抗体特价促销anti- NEK2 antibody丙烯酰胺大叶茜草素
纳氏虫属通用·PCR定量试剂盒C3 ELISA试剂盒CR1/CD35 Ⅰ型补体受体抗体(C3b/C4b受体抗体)二正己基壬,分子量:356Imidazoie 咪唑 Amresco
C4 ELISA试剂盒 DBC2 乳腺癌基因删除蛋白2抗体二正己基壬,分子量:356甲基蓝
Camel Beta-Endorphin,β-EP ELISA试剂盒FAT/CDHF7/FAT1 钙粘蛋白家族成员7抗体二(2-乙基己基)壬二酸酯,分子量:413Amygdalin 扁桃苷
Camel Endothelin 1,ET-1 ELISA试剂盒 CD36/PAS-4 CD36抗体二(2-乙基己基)壬二酸酯,分子量:413NBT 氯化硝基四氮唑蓝
Camel lipoprotein-associated phospholipase A2,Lp-PL-A2 ELISA试剂盒 GAS7/Growth Arrest Specific Protein 7 生长休止特定蛋白7抗体双(2-羟乙基)聚酸二异丙酯NBT 氯化硝基四氮唑蓝
Camel transforming growth factors β2,TGFβ2 ELISA试剂盒 EB3 微管相关蛋白EB家族3抗体双(2-羟乙基)聚酸二异丙酯MTT 噻唑蓝 Amresco
Cherax quadricarinatus lipovitellin/vitellin,Lv/Vn ELISA试剂盒 CD4 CD4抗体二壬二酸,分子量:216MTT 噻唑蓝 Amresco
Chicken 1,3-βD glucosidase,1,3-βD-Glu ELISA试剂盒 CD4 CD4抗体二壬二酸,分子量:216MTT 噻唑蓝 Amresco
储存条件:
仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
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上海抚生实业有限公司(Shanghai?Fusheng?Industrial?Co.,?Ltd.,China)是一家生物企业,主要从事免疫学、分子生物学和常规生化试剂的研发、销售。主营产品:生化试剂、试剂盒、ELISA试剂盒、抗体、重组蛋白、生化检测试剂盒、分光光度法检测试剂盒、荧光定量PCR检测试剂盒、细胞株、原代细胞、细胞培养基、标准溶液产品。代理并销售进口SIGMA试剂、abcam抗体、R&D抗体、CST抗体、ATCC细胞、BD公司、GE公司、赛默飞世尔公司产品。
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