布鲁氏菌核酸荧光PCR（探针法）

PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
产品名称：布鲁氏菌核酸荧光PCR（探针法）
英文名称：详见说明书
编号： FSP2425
分类：PCR检测试剂盒
储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。
运输：低温、避光，快递免费送货上门。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管，分别为 6，5，4，3，2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL，建议每次稀释 10 倍，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中，重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 产品仅供科研从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步），每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
数据采集：
具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合DNA 时，吸收光谱在 471nm，结合 DNA 时的吸收光谱在 500nm，发射光谱在 530nm。
数据处理:
以 Cps 阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品浓度的 log 为横轴，以 Ct 值为纵轴，通过待测样品的 Ct 值计算出样品 DNA 的浓度。
人肺癌细胞,A549细胞anti- uPAR antibody2-环己烯酮大鼠胸腺细胞

人肺癌细胞，Calu-1细胞anti- UPB1 antibody硫酸钙,二水合物大鼠牙髓干细胞

人肺癌细胞，NCI-H2126细胞anti- UPF1 antibody氟化铯大鼠牙周膜成纤维细胞

人肺癌细胞，NCI-H3255细胞anti- UPF3A antibody氟化铯大鼠牙周膜干细胞

人肺癌细胞，PC-9细胞anti- UPF3B antibody椰油酰胺丙基甜菜碱大鼠胰岛β细胞

人肺成纤维细胞,HFL-1细胞anti- UPK1A antibody2-氯噻吩-3-硼酸大鼠胰岛细胞

人肺鳞癌细胞，NCI-H226细胞anti- UPK2 antibody2-氯噻吩-3-硼酸大鼠胰腺星状细胞

人肺鳞癌细胞，NCI-H520细胞anti- UPK2 antibody3-氯吡啶-4-羧酸大鼠造血干细胞
布鲁氏菌核酸荧光PCR（探针法）Red spider lily strychninePhospho-Tuberin/TSC2(Ser1420)  磷酸化结节性硬化蛋白抗体2,6-二羟基苯乙酮腔肠素f

Cyanidin 3-O- glucosideTXNIP  硫氧还蛋白结合蛋白2抗体间甲苯磺酰氯腔肠素h

Rat tail oxalic acidPhospho-Tuberin/TSC2(Ser1798)  磷酸化结节性硬化蛋白抗体4-氯苯磺酰氯腔肠素hcp

DioscinPhospho-Tuberin/TSC2(Ser664)  磷酸化结节性硬化蛋白抗体氟试剂腔肠素n

AmicarbalidePhospho-Tuberin/TSC2(Ser1418)  磷酸化结节性硬化蛋白抗体奎诺二甲基丙烯酸酯D-氨基虫荧光素

Double hydrogenTyk2  非受体酪氨酸蛋白激酶2抗体氘代氢化锂铝D-虫荧光素游离酸

BisdemethoxycurcuminPhospho-Tyk2(Tyr1054/1055)  磷酸化非受体酪氨酸蛋白激酶2抗体3-溴甲基-5-氯苯并噻吩D-虫荧光素钾盐

SilymarinTyrosine Hydroxylase(Neuronal Marker)/Tyk2/TYH  酪氨酸羟化酶抗体联二噻吩D-虫荧光素钠盐
储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

 

上海抚生实业有限公司(Shanghai?Fusheng?Industrial?Co.,?Ltd.，China)是一家生物企业,主要从事免疫学、分子生物学和常规生化试剂的研发、销售。主营产品:生化试剂、试剂盒、ELISA试剂盒、抗体、重组蛋白、生化检测试剂盒、分光光度法检测试剂盒、荧光定量PCR检测试剂盒、细胞株、原代细胞、细胞培养基、标准溶液产品。代理并销售进口SIGMA试剂、abcam抗体、R&D抗体、CST抗体、ATCC细胞、BD公司、GE公司、赛默飞世尔公司产品。 上海抚生实业有限公司(Shanghai?Fusheng?Industrial?Co.,?Ltd.，China)先后与天津中医学院、复旦大学、上海交通大学医学院、上海交通大学、华东师范大学、第二军医大学、南京大学，暨南大学，南京工业大学，曙光医院、华山医院、瑞金医院、上海有机研究所、中科院上海分院等多家单位建立了良好的合作关系。本公司可为您提供科研ELISA试剂盒，种属标本齐全,有专门针对人血清、血浆、全血、分泌物、尿液、细胞培养上清液、组织匀浆、组织液等标本的试剂盒；另有针对各种动物（鼠、兔、牛、马、鸡、猪、狗、山羊、猴、鱼）的科研试剂。 公司秉承“专注品质、信守承诺、积极沟通、创新服务”的企业文化积极参与生物领域的技术创新和技术服务，力求为我国科研事业更好的，更专业的服务！ 公司售后服务宗旨:有质量问题可申请退换，有技术疑问可随时给于解答，一对一的客服服务，客户的需求也是我们不断的更新服务。