PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl氯仿进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
产品名称:传染性胸膜肺炎PCR试剂盒
英文名称:详见说明书
编号: FSP2442
分类:PCR检测试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意:DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA,后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线(以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水(用带芯枪头,下同)。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL,建议每次稀释 10 倍,梯度稀释至 10E7 拷贝/μL)。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头,从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头,从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中,重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 产品仅供科研从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR(见下步),每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值,并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线。
数据采集:
具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合DNA 时,吸收光谱在 471nm,结合 DNA 时的吸收光谱在 500nm,发射光谱在 530nm。
数据处理:
以 Cps 阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品浓度的 log 为横轴,以 Ct 值为纵轴,通过待测样品的 Ct 值计算出样品 DNA 的浓度。
人绒癌细胞,JEG-3细胞anti- VGLL4 antibody十二烷基苯磺酸兔腹腔主动脉平滑肌细胞
人乳头瘤状甲状腺癌细胞,TPC-1细胞anti- VGLUT1 antibody二乙烯三胺五乙酸兔腹腔主动脉外膜成纤维细胞
人乳腺癌阿霉素耐药细胞株,Mcf-7/adr细胞anti- VGLUT2 antibody二乙烯三胺五乙酸兔肝kuffer细胞
人乳腺癌细胞,Bcap-37细胞anti- VHL antibody十溴二苯醚兔肝窦内皮细胞
人乳腺癌细胞,BT-20细胞anti- VHL antibody2,6-二溴吡嗪兔肝内胆管上皮细胞
人乳腺癌细胞,BT-549细胞anti- VILIP 3 antibody2,3-二溴-5-氯吡啶兔肝实质细胞
人乳腺癌细胞,BT474细胞anti- VILIP-1 antibody2,3-二溴-5-氯吡啶兔肝外胆管上皮细胞
人乳腺癌细胞,HS578T细胞anti- Villin antibody4-羟基吡咯并[2,3-d]嘧啶兔肝星状细胞
传染性胸膜肺炎PCR试剂盒Monilinia vaccinii-corymbosi (Reade) Honey, ..ZNF268 锌指脂蛋白-1b抗体 1-(3,4-二甲基苯基)哌嗪PIP Strips
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..ZNF268 锌指脂蛋白-1c抗体 4-氯-3-甲基苯甲醛Class III PI3K Elisa Kit
Nocardia asteroides (Eppinger) BlanchardZNF268 锌指脂蛋白抗体 2,4-二氯-5-氟苯乙酸HyStem®-HP Hydrogel Kit
Auxarthron umbrinum (Boudier) Orr et Plunke ..ZNF300 锌指蛋白300抗体 3-羟基异烟酸甲酯X-gluc
Homo sapiens, humanZNF307 锌指蛋白307抗体 Fmoc-Phe-Osu酸性磷酸酶Acid Phosphatase Microplate Assay Kit
Carnobacterium gallinarum Collins et al.ZNF431 锌指蛋白431抗体 2-(4-溴苯基)-2-甲基丙腈生化分析检测实验技术服务
Aspergillus oryzae (Ahlburg) CohnZNF474/ZFP106 锌指蛋白474抗体 2-氰基-5-吡啶硼酸南美顶级胎牛血清
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..ZO-1 胞质紧密粘连蛋白1抗体(闭锁小带蛋白1) 偏硅酸锂 (metals basis)Rhodamine Phalloidin
储存条件:
仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
关键字: 传染性胸膜肺炎;PCR试剂盒;50T;FSP2442;
上海抚生实业有限公司(Shanghai?Fusheng?Industrial?Co.,?Ltd.,China)是一家生物企业,主要从事免疫学、分子生物学和常规生化试剂的研发、销售。主营产品:生化试剂、试剂盒、ELISA试剂盒、抗体、重组蛋白、生化检测试剂盒、分光光度法检测试剂盒、荧光定量PCR检测试剂盒、细胞株、原代细胞、细胞培养基、标准溶液产品。代理并销售进口SIGMA试剂、abcam抗体、R&D抗体、CST抗体、ATCC细胞、BD公司、GE公司、赛默飞世尔公司产品。
上海抚生实业有限公司(Shanghai?Fusheng?Industrial?Co.,?Ltd.,China)先后与天津中医学院、复旦大学、上海交通大学医学院、上海交通大学、华东师范大学、第二军医大学、南京大学,暨南大学,南京工业大学,曙光医院、华山医院、瑞金医院、上海有机研究所、中科院上海分院等多家单位建立了良好的合作关系。本公司可为您提供科研ELISA试剂盒,种属标本齐全,有专门针对人血清、血浆、全血、分泌物、尿液、细胞培养上清液、组织匀浆、组织液等标本的试剂盒;另有针对各种动物(鼠、兔、牛、马、鸡、猪、狗、山羊、猴、鱼)的科研试剂。
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