PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl氯仿进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
产品名称:转基因植物Sad基因PCR检测试剂盒
英文名称:详见说明书
编号: FSP2834
分类:PCR检测试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意:DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA,后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线(以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水(用带芯枪头,下同)。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL,建议每次稀释 10 倍,梯度稀释至 10E7 拷贝/μL)。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头,从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头,从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中,重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 产品仅供科研从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR(见下步),每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值,并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线。
数据采集:
具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合DNA 时,吸收光谱在 471nm,结合 DNA 时的吸收光谱在 500nm,发射光谱在 530nm。
数据处理:
以 Cps 阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品浓度的 log 为横轴,以 Ct 值为纵轴,通过待测样品的 Ct 值计算出样品 DNA 的浓度。
Human NKA(Neurokinin A) ELISA KitHuman proPSA(precursor of Prostate Specific Antigen) ELISA Kit邻碘苯甲酸 细胞JNK/SAPK蛋白表达荧光定量检测试剂盒
Human MMP-10(Matrix Metalloproteinase 10) ELISA KitHuman PRR4(Proline Rich Protein 4, Lacrimal) ELISA Kit溴代异丁烷 JNK/SAPK蛋白表达西方杂交分析试剂盒
Human MUC3(Mucin 3) ELISA KitHuman PRSS23(Protease, Serine 23) ELISA Kit淫羊藿苷JNK/SAPK蛋白免疫共沉淀分析试剂盒
Human MUC6(Mucin 6) ELISA KitHuman PRSS33(Protease, Serine 33) ELISA Kit3-碘-4-氨基吡啶JNK/SAPK蛋白表达ELISA定量检测试剂盒
Human N-MID-OT(N-MID Osteocalcin) ELISA KitHuman PSAP(Prosaposin) ELISA Kit3-碘-4-氨基吡啶 细胞TUBULIN蛋白表达流式细胞仪检测试剂盒
Human NKB(Neurokinin B) ELISA KitHuman PSPN(Persephin) ELISA Kit乙酸异丙酯载玻片细胞TUBULIN蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒
Human MUSKab(Muscle Skeletal Receptor Tyrosine Kinase antibody) ELISA KitHuman PTD(Pentosidine) ELISA Kit异甘草素冰冻切片组织TUBULIN蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒
Human NPYR1(Neuropeptide Y Receptor Y1) ELISA KitHuman PTF1α(Pancreas Specific Transcription Factor 1α) ELISA Kit焦磷酸铁(III)石蜡切片组织TUBULIN蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒
转基因植物Sad基因PCR检测试剂盒亚细亚皂苷凝血酶原时间(PT)测定试剂盒ISI1.0-1.3<含复溶液>5mg14432-12-3Rat Gonadotropin-releasing hormone receptor, GnRHR Elisa KitHPLC98%凝血酶原时间(PT)测定试剂盒ISI1.0-1.3<含复溶液>5mgADRP25mgCAS号:针头滤器 可换膜 直径25mm 25个/袋 100个/盒517-28-289130-86-996T高尔基蛋白73(GP73)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%凝血酶原时间(PT)测定试剂盒ISI1.0-1.3<含复溶液>5mgADRP3737-95-9高端化学试剂硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)50mgCAS号:针头滤器(直径)13mm 水系 一次性 25个/袋 100个/盒 0.22um 8005-03-6103917-26-696T脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%部分凝血活酶时间(APTT)测定试剂盒<鞣花酸含cacl2>5mgCAMK1D1667-99-8高端化学试剂17-β-羟基类固醇脱氢酶10(HSD17β10)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
部分凝血活酶时间(APTT)测定试剂盒<鞣花酸含cacl2>5mg15663-27-1Rat Gonadotropin-releasing hormone receptor, GnRHR Elisa KitHPLC98%部分凝血活酶时间(APTT)测定试剂盒<鞣花酸含cacl2>5mgCAMK1D50mgCAS号:针头滤器(直径)13mm 水系 一次性 25个/袋 100个/盒 0.22um 8005-03-6103917-26-696T脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%部分凝血活酶时间(APTT)测定试剂盒<鞣花酸含cacl2>5mgCAMK1D1667-99-8高端化学试剂17-β-羟基类固醇脱氢酶10(HSD17β10)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)eaCAS号:针头滤器(直径)25mm 水系 一次性 25个/袋 100个/盒 0.22um 8005-02-599882-10-796T黑素瘤细胞黏附分子(MCAM)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%部分凝血活酶时间(APTT)测定试剂盒<鞣花酸含cacl2>5mgCAMK41667-99-8高端化学试剂肌钙蛋白I(TNI)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
部分凝血活酶时间(APTT)测定试剂盒<鞣花酸含cacl2>5mg15663-27-1Rat Phosphorylated adenosine monophosphate activated protein kinase, AMPK Elisa KitHPLC98%部分凝血活酶时间(APTT)测定试剂盒<鞣花酸含cacl2>5mgCAMK4eaCAS号:针头滤器(直径)25mm 水系 一次性 25个/袋 100个/盒 0.22um 8005-02-599882-10-796T黑素瘤细胞黏附分子(MCAM)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%部分凝血活酶时间(APTT)测定试剂盒<鞣花酸含cacl2>5mgCAMK41667-99-8高端化学试剂肌钙蛋白I(TNI)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)50mgCAS号:针头滤器(直径)13mm 有机 一次性 25个/袋 100个/盒 0.22um 4197-07-3479-21-096TAMP激活蛋白激酶β1(PRKAβ1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%0.025M化钙5mgHSPA12A84166-13-2高端化学试剂周期素依赖性激酶5(CDK5)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
0.025M化钙5mg15362-40-0Rat Phosphorylated adenosine monophosphate activated protein kinase, AMPK Elisa KitHPLC98%0.025M化钙5mgHSPA12A50mgCAS号:针头滤器(直径)13mm 有机 一次性 25个/袋 100个/盒 0.22um 4197-07-3479-21-096TAMP激活蛋白激酶β1(PRKAβ1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%0.025M化钙5mgHSPA12A84166-13-2高端化学试剂周期素依赖性激酶5(CDK5)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)200mgCAS号:针头滤器(直径)25mm 有机 一次性 25个/袋 100个/盒 0.22um 4197-07-381371-54-296T肺部激活调节趋化因子(PARC)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%凝血酶时间(TT)测定试剂盒5mgHSP1733-12-6高端化学试剂补体1q(C1q)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
凝血酶时间(TT)测定试剂盒5mg15362-40-0Rat heat shock protein, HSP47 Elisa KitHPLC98%凝血酶时间(TT)测定试剂盒5mgHSP200mgCAS号:针头滤器(直径)25mm 有机 一次性 25个/袋 100个/盒 0.22um 4197-07-381371-54-296T肺部激活调节趋化因子(PARC)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%凝血酶时间(TT)测定试剂盒5mgHSP1733-12-6高端化学试剂补体1q(C1q)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)15mgCAS号:针头滤器(直径)13mm 水系 一次性 25个/袋 100个/盒 0.45um148-25-4100234-59-196T转运蛋白1(TNPO1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%凝血酶时间(TT)测定试剂盒<含复溶液>5mgPGAM51733-12-6高端化学试剂N-甲基-D-天氡氨酸离子能谷氨酸受体2C(GRIN2C)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
辣椒素(天然纯化分离)凝血酶时间(TT)测定试剂盒<含复溶液>5mg652-67-5Rat heat shock protein, HSP47 Elisa KitHPLC98%凝血酶时间(TT)测定试剂盒<含复溶液>5mgPGAM515mgCAS号:针头滤器(直径)13mm 水系 一次性 25个/袋 100个/盒 0.45um148-25-4100234-59-196T转运蛋白1(TNPO1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%凝血酶时间(TT)测定试剂盒<含复溶液>5mgPGAM51733-12-6高端化学试剂N-甲基-D-天氡氨酸离子能谷氨酸受体2C(GRIN2C)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)25mgCAS号:针头滤器(直径)25mm 水系 一次性 25个/袋 100个/盒 0.45um5808-22-0112503-87-496T胰岛素样生长因子结合蛋白6(IGFBP6)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%纤维蛋白原(BFI)测定试剂盒<含ibs、定标血浆>5mg14-15-D H62625-29-0高端化学试剂N-甲基-D-天氡氨酸离子能谷氨酸受体2B(GRIN2B)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
二氢辣椒素纤维蛋白原(BFI)测定试剂盒<含ibs、定标血浆>5mg652-67-5Rat glucocorticoid, GC Elisa KitHPLC98%纤维蛋白原(BFI)测定试剂盒<含ibs、定标血浆>5mg14-15-D H25mgCAS号:针头滤器(直径)25mm 水系 一次性 25个/袋 100个/盒 0.45um5808-22-0112503-87-496T胰岛素样生长因子结合蛋白6(IGFBP6)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%纤维蛋白原(BFI)测定试剂盒<含ibs、定标血浆>5mg14-15-D H62625-29-0高端化学试剂N-甲基-D-天氡氨酸离子能谷氨酸受体2B(GRIN2B)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)350mgCAS号:针头滤器(直径)13mm 有机 一次性 25个/袋 100个/盒 0.45um5808-22-0226560-96-996T白介素12B(IL12B)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%纤维蛋白原(BFI)测定试剂盒<含ibs、定标血浆>5mghistidine62625-29-0高端化学试剂鞘氨醇-1-酸酸酶2(SGPP2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
胡椒酰胺纤维蛋白原(BFI)测定试剂盒<含ibs、定标血浆>5mg652-67-5Rat glucocorticoid, GC Elisa KitHPLC98%纤维蛋白原(BFI)测定试剂盒<含ibs、定标血浆>5mghistidine350mgCAS号:针头滤器(直径)13mm 有机 一次性 25个/袋 100个/盒 0.45um5808-22-0226560-96-996T白介素12B(IL12B)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%纤维蛋白原(BFI)测定试剂盒<含ibs、定标血浆>5mghistidine62625-29-0高端化学试剂鞘氨醇-1-酸酸酶2(SGPP2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)50mgCAS号:针头滤器(直径)25mm 有机 一次性 25个/袋 100个/盒 0.45um5808-22-0226561-02-096T促性腺激素释放激素受体(GnRHR)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%纤维蛋白原(BFI)测定试剂盒<含ibs>5mgHSV1-Ab1393-92-6高端化学试剂谷氨酸半胱氨酸连接酶(GCLM)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
纤维蛋白原(BFI)测定试剂盒<含ibs>5mg154-42-7Rat Citrate synthase, CS Elisa KitHPLC98%纤维蛋白原(BFI)测定试剂盒<含ibs>5mgHSV1-Ab50mgCAS号:针头滤器(直径)25mm 有机 一次性 25个/袋 100个/盒 0.45um5808-22-0226561-02-096T促性腺激素释放激素受体(GnRHR)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%纤维蛋白原(BFI)测定试剂盒<含ibs>5mgHSV1-Ab1393-92-6高端化学试剂谷氨酸半胱氨酸连接酶(GCLM)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)25mgCAS号:移液器92-32-041137-85-396T孕酮受体(PGR)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%纤维蛋白原(BFI)测定试剂盒<含ibs>5mgM-CSF1393-92-6高端化学试剂鞘氨醇-1-酸酸酶1(SGPP1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
射干苷纤维蛋白原(BFI)测定试剂盒<含ibs>5mg154-42-7Rat Citrate synthase, CS Elisa KitHPLC98%纤维蛋白原(BFI)测定试剂盒<含ibs>5mgM-CSF25mgCAS号:移液器92-32-041137-85-396T孕酮受体(PGR)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%纤维蛋白原(BFI)测定试剂盒<含ibs>5mgM-CSF1393-92-6高端化学试剂鞘氨醇-1-酸酸酶1(SGPP1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)25mgCAS号:助理移液器 10mL92-32-055497-79-596T激肽释放酶1(KLK1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%清洗液5mgTGF2591-17-5高端化学试剂骨涎蛋白(BSP)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
储存条件:
仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
关键字: 转基因植物Sad基因;PCR检测试剂盒;50T;PCR检测试剂盒;
上海抚生实业有限公司(Shanghai?Fusheng?Industrial?Co.,?Ltd.,China)是一家生物企业,主要从事免疫学、分子生物学和常规生化试剂的研发、销售。主营产品:生化试剂、试剂盒、ELISA试剂盒、抗体、重组蛋白、生化检测试剂盒、分光光度法检测试剂盒、荧光定量PCR检测试剂盒、细胞株、原代细胞、细胞培养基、标准溶液产品。代理并销售进口SIGMA试剂、abcam抗体、R&D抗体、CST抗体、ATCC细胞、BD公司、GE公司、赛默飞世尔公司产品。
上海抚生实业有限公司(Shanghai?Fusheng?Industrial?Co.,?Ltd.,China)先后与天津中医学院、复旦大学、上海交通大学医学院、上海交通大学、华东师范大学、第二军医大学、南京大学,暨南大学,南京工业大学,曙光医院、华山医院、瑞金医院、上海有机研究所、中科院上海分院等多家单位建立了良好的合作关系。本公司可为您提供科研ELISA试剂盒,种属标本齐全,有专门针对人血清、血浆、全血、分泌物、尿液、细胞培养上清液、组织匀浆、组织液等标本的试剂盒;另有针对各种动物(鼠、兔、牛、马、鸡、猪、狗、山羊、猴、鱼)的科研试剂。
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