PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测
产品名称 | 英文名称 | 货号 |
蛇形毛圆线虫探针法荧光定量PCR试剂盒 | Trichostongylus colubiformis | XGR97335 |
【结果分析条件设定】
u 基线(Baseline)设定:应选择该次实验指数扩增前所有样本荧光信号比较稳定的一段区域(所有样本荧光信号无较大波动),起始点(Start)应避开荧光采集起始阶段的信号波动,终止点(End)应比最早出现指数扩增的样本Ct值减少1~3个循环,建议基线设为6~15。
u 阈值(Threshold)设定:将阈值线设定在刚好超过正常阴性质控品扩增曲线的最高点。
【质控标准】
1. 阴性质控品的检测结果应为阴性,无指数扩增期,Ct=40或无Ct;
2. 阳性质控品的检测结果应为阳性,有明显的指数扩增期,Ct值应小于等于35;
3. 以上要求需在一次实验中同时满足,否则该次实验视为无效。
【结果判断】
1. 阳性:有明显的指数扩增期,且Ct<38;
2.可疑:有明显的指数扩增期,且38≤Ct<40,此时样本为可疑样本;对于可疑样本建议复核一次,若复核结果Ct<40且有指数扩增期,则判定为阳性,否则判定为阴性;
3. 阴性:无指数扩增期,Ct=40或无Ct值均判定为阴性样本。
【对检验结果的解释】
1. 实验室环境污染、试剂污染、样品交叉污染会出现假阳性结果;
2. 试剂运输、保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,可能会导致出现假阴性结果。
具有下列特点:
1. 一站式,足够 50 次酶切-连接反应、50 次预扩反应和 1600 次 AFLP PCR(PCR 按 30 uL 体系计算),但不包括 DNA 纯化和带型分析试剂(如 PAGE 电泳试剂和 银染试剂)。
2. 本系列产品提供 EcoRI-MseI 组合,适用于 GC 含量在 50%以上的基因组。对 GC 含量在 50%以下的基因组,需从本公司采购 AFLP(EcoRI-TaqI)组合。
3. 各种参数都经过优化,一次 PCR 所得 AFLP 片段数一般在 10-100 之间,可重复 性好,误差小于 0.6%。4. 本产品适用于基因组在 500 Mb-6000 Mb 的材料(如动物和植物),对于基因组 在 50-500 Mb 的材料(如细菌和真菌)或 50Mb 以下的材料(如质粒,cosmid, BAC,YAC 和 PAC 等),需要分别另购专门的+1 型预扩引物混合液和+3 型 EcoRI 引物(8 种)AFLP 引物对。
实验外包:
1.基因组学:基因芯片、SNP检测、DNA甲基化检测、生物信息学分析
2.转录组学:microRNA芯片、LncRNA芯片、表达谱芯片、RNA-seq
3.蛋白质组学:2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM
4.基因检测:DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR
5.蛋白质检测:Western blot、Co-ip EMSA、CHIP、免疫荧光、ELISA
6.病理检测:HE染色、特殊染色、组织切片、免疫组化、流式细胞分选
7.代谢组学:GC-MS、LC-MS、NMR
8.细胞及动物模型:原代细胞、细胞模型、动物模型构建
786-O [786-0], 人肾透明腺癌细胞酮咯酸Ketorolac质量规格:>98%
人B细胞瘤细胞;RAMOS(RA.1) 大鼠胰腺星状细胞完全培养基 100mL来氟米特Leflunomide质量规格:>98.5%,USP31,BR
视网膜微血管内皮细胞Many types of cells包装:5 × 105方(1ml)来氟米特(标准品)Leflunomide质量规格:HPLC>98%,标准品
AXR2 Others Mouse 小鼠 AXR2 / CMG2 人细胞裂解液 (阳性对照) 左氧氟沙星Levofloxacin Hemihidrated质量规格:>98.5%,USP34,BR,可用于细胞培养
大鼠脑胶质瘤细胞;C6左氧氟沙星(标准品)Levofloxacin Hemihidrated质量规格:HPLC>98%,标准品
OK(负鼠肾小管细胞) 5×106cells/瓶×2氯吡格雷Clopidogrel质量规格:美国进口
Promocell C-27001 Osteoblast Growth Medium, 成骨细胞生长培养基(即用型) 500ml氯吡格雷标记d4Clopidogrel Labeled d4质量规格:美国进口
甲状腺滤泡上皮细胞Many types of cells包装:5 × 105方(1ml)4-羟基卡唑4-Hydroxycarbazole质量规格:>98%
FCGR2B Others Cynomolgus 食蟹猴 CD32b / FCGR2B 人细胞裂解液 (阳性对照) 雌激素酮硫酸盐,去氢表雄酮硫酸钠Dehydroepiandrosterone-3-sulfate质量规格:>98%
3T3 小鼠成纤维细胞缬更昔洛韦盐酸盐 Valganciclovir hydrochloride质量规格:>99%,USP
PLAT Others Human 人 tPAβ 人细胞裂解液 (阳性对照) 5-硝基愈创木酚(植物激素级)质量规格:>98%,植物激素级5-Nitroguaiacol
CL-0207SHG-44 (人胶质瘤细胞)5×106cells/瓶×26-溴-2-萘酚(>98%,BR)质量规格:>98%,BR6-Bromo-2-naphthol
PROCR Others Human 人 Epcr / PROCR 人细胞裂解液 (阳性对照) 6-(γ,γ-二甲基1丙基氨基)嘌呤核苷(植物激素级)质量规格:>98%,植物激素级6-Dimethylallylamino purine riboside
小鼠食管上皮细胞完全培养基 100mL6-甲基(>98%,BR)质量规格:>98%,BR6-Methylcoumarin
BNL CL.2小鼠胚胎肝细胞 BNL CL.2 mouse embryo liver cells DMEM培养基+10%FBS5-甲基-1,10-菲咯啉水合物(>98.0%(T))质量规格:>98.0%(T)5-Methyl-1,10-phenanthroline Hydrate
蛇形毛圆线虫探针法荧光定量PCR试剂盒人肾皮质上皮细胞裂解物HRCEpiCL马铃薯浸出芬,英文名或英文缩写:Potato extract,级别:超,98%,规格:25U
IFNGR2 Others Mouse 小鼠 IFNGR2 人细胞裂解液 (阳性对照) 倍录米 ≥99% BqCLOMqTHcSONq 4419-39-0
BHK-21 [C-13] 仓鼠肾成纤维细胞2-录-4-硝基本-α-L-岩藻糖苷,英文名或英文缩写:CNP-Afu,级别:标准溶液,100ug/ml,规格:100克
CL-0142LM/TK(小鼠胸腺激酶缺陷细胞)5×106cells/瓶×2TRIS-TAPS-EDTA(TTE)BUFFER,10XTTE缓冲液,DNA测序用超级100MLRT
细胞名称93-05-0N.N-二乙基对本N,N-Dietxyl-1,4-pxenylenediamine
服务流程:
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。
关键字: 蛇形毛圆线虫探;探针法;荧光定量PCR试剂盒;Trichostongylus colu;XGR97335;
上海西格生物科技有限公司( Shanghai Sig Biotechnology Co., Ltd)是一家生物企业,主要从事免疫学、分子生物学和常规生化试剂的研发、销售。主营产品:生化试剂、试剂盒、ELISA试剂盒、抗体、重组蛋白、生化检测试剂盒、分光光度法检测试剂盒、荧光定量PCR检测试剂盒、细胞株、原代细胞、细胞培养基、标准溶液产品。代理并销售进口SIGMA试剂、abcam抗体、R&D抗体、CST抗体、ATCC细胞、BD公司、GE公司、赛默飞世尔公司产品。
上海西格生物科技有限公司(Shanghai Sig Biotechnology Co., Ltd)先后与天津中医学院、复旦大学、上海交通大学医学院、上海交通大学、华东师范大学、第二军医大学、南京大学,暨南大学,南京工业大学,曙光医院、华山医院、瑞金医院、上海有机研究所、中科院上海分院等多家单位建立了良好的合作关系。本公司可为您提供科研ELISA试剂盒,种属标本齐全,有专门针对人血清、血浆、全血、分泌物、尿液、细胞培养上清液、组织匀浆、组织液等标本的试剂盒;另有针对各种动物(鼠、兔、牛、马、鸡、猪、狗、山羊、猴、鱼)的科研试剂。
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