Cas14能够结合并切割单链DNA的目标序列。与Cas9不同,Cas14不需要PAM序列。除了这种顺式切割,Cas14还能够不加选择地反式切割单链DNA,类似于Cas13和Cas12。
Cas14a核酸酶是一种内切核酸酶,其在tracrRNA:crRNA(或sgRNA)的引导下,特异结合并切割靶标ssDNA,且无需PAM位点。相比于其他的Cas蛋白,Cas14蛋白的分子量普遍较小(400-700AA),其中,上海惠诚生物提供的Cas14a的分子量仅为为64.9 kd(含有3.4 k的N端标签序列)。与Cas12类似,Cas14a1也可以结合靶标核酸并激活其ssDNA反式切割活性,从而被应用于靶标核酸的分子检测。然而,与Cas12不同的是,Cas14a1只能结合ssDNA靶标,因此:经过扩增富集的靶标核酸需使用T7核酸外切酶进行处理,且其中一条扩增引物需要实验磷硫酰化修饰以确保T7核酸外切酶仅切割其中一条链,从而留下ssDNA靶标链以用于Cas14a1介导的分子检测。上海惠诚生物优势提供CRISPR基因编辑系列,咨询订购热线:021-60498804
产品组成
Cas12a1 Nuclease 100 pmol (10 pmol/μL)
10 ×cas14 Buffer 1 mL
正对照反式切割结果:
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