通过5周2针的标准免疫程序制备小鼠单克隆和多克隆抗体,ELISA滴度(Cutoff值为0.1000)可达到1:10000-1:10000000。
1. 用生理盐水将抗原稀释到2倍最终浓度(按每针次50μl用量配制)。
备注:推荐使用的抗原用量为
(1)免疫原性较强的灭活全病毒或全细菌以及病毒样颗粒抗原每针次1-5μg;
(2)免疫原性较弱的亚单位蛋白抗原每针次5-20μg;
(3)偶联了载体蛋白的小分子抗原每针次20-50μg。
2. 充分混匀佐剂,无菌条件下取出所需用量(按每针次50μl)与抗原按体积比1:1迅速混匀。
备注:本佐剂产生沉淀属正常现象,与抗原混合操作越快越好。
3. 通过后腿小腿肌肉注射免疫小鼠(
),每只小鼠注射100μl。
备注:本佐剂与抗原混合后产生沉淀属正常现象,抽入针管前应充分混匀,抽入针管后应尽快注射。
4. 第21天按同样方式加强免疫1针。
备注:每次佐剂和抗原现配现用。
5. 第35天采微量尾血进行ELISA测定,抗体滴度应在1:10000-1:10000000范围内,随后即可采全血或按常规方法进行抗原冲击免疫和脾细胞融合。
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