"CHL-1 Cell|人黑色素瘤细胞
细胞背景资料:详见相关文献介绍
细胞形态:上皮细胞样
传代培养及其操作步骤:原代细胞培养成功以后,需要进行分离培养,否则细胞会因生存空间不足或密度过大,营养障碍,影响细胞生长。细胞由原培养瓶内分离稀释后传到新的培养瓶中培养的过程称之为传代培养。传代细胞允许培养的细胞扩增(形成细胞株),可以进行细胞克隆,易于保存,但可能丧失一些殊的细胞和分化征。传代细胞形成细胞株的Zui大利处在于提供了大量持久的实验材料,便于实验。【操作步骤】1)吸掉或倒掉培养瓶内旧培养液;2)向瓶内加入胰蛋白酶液和EDTA混合液少量。以能覆盖培养瓶底为宜;3)置37℃孵箱或室温(25℃温度)下进行消化,2~5min后把培养瓶放在倒置显微镜下进行观察,当发现胞质回缩、细胞间隙增大后,应立即中止消化;4)吸出消化液,向瓶内加入Hanks液少量,轻轻转动培养瓶,把残留消化液冲掉,然后再加培养液。如果仅使用胰蛋白酶消化,在吸除胰蛋白液后,可直接加入少量含血清的培养液,终止消化;5)使用弯头吸管,吸取瓶内培养液,按顺序反复轻轻吹打瓶壁细胞,使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。吹打时动作要轻柔,以防用力过猛损伤细胞;6)用计数板计数后,分别接种于新的培养瓶中,置CO2培养箱中进行培养;7)细胞培养换液时间应根据细胞生长的状态和实验要求来确定。一般2~3d后应换一次生长液。待细胞铺满器皿底面,即可使用;也可继续传代扩大培养或换成维持液。【注意事项】1)掌握HAO细胞消化的时间,消化时间过短时,细胞不宜从瓶壁脱落,过长的消化会导致细胞脱落、损伤;2)掌握HAO消化浓度,当消化液浓度过GAO时,消化时间应缩短,过低时细胞消化时间相对延长。
细胞生长:贴壁
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细胞物种来源:人源或鼠源等其它物种来源
CHL-1 Cell|人黑色素瘤细胞
[细胞产品包装]鲜活细胞:T25培养瓶(一瓶)或冻存细胞:1ml冻存管(两支)
细胞培养更HAO经验详解:1)收到细胞,首先要镜检:观察细胞形态是否正常,对于贴壁细胞则要注意看贴壁情况是否很HAO,观察细胞密度,有疑议及时咨提供细胞的技术人员。 由于运输的时间或者温度的变化,很多贴壁细胞在盛满培养基的瓶子里生长的状态和平时会有点不一样,主要是贴壁牢固问题。比如293T,平时贴壁就不是很牢,在装满的培养基瓶子里面,会发生大片的脱落,细胞聚集在一起,但是细胞生长还是正常的,通过离心收集,加以胰酶的消化,重新打散,又可以正常的贴壁生长。2)当通过上一步的观察,细胞初步没有问题时,进行下一步操作。当收到的细胞密达到80%左右时,则处理如下:弃除瓶中大部分培养基,仅保留5到10mL培养所需的常规培养基;或更换新鲜的培养基,置于培养箱中,随后每天观察。 细胞在低于正常生长温度情况下,会调整为静止期,或者慢速生长期,恢复37度的环境至少3个小时左右,才能重新调整到接近对数生长期的状态,在对数生长期进行细胞的传代会大大增加传代的成功率,和细胞的存活率。3)如果经步观察发现细胞密度超过90%,并且细胞状态很HAO时,则复温后2个小时需要立即传代。传代的比例应依据不同的细胞而定。对于生长比较快,状态稳定,不易受外界影响的细胞可以一次多传几瓶;对于生长较慢,细胞比较薄,状态容易波动的细胞类型,一次少传些,每瓶细胞密度大些,便于稳定生长。至于一些比较陌生的细胞,次处理也可以依照第二种情况。
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细胞传代方法:1:6—1:10传代
细胞来源说明:来源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名细胞库
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细胞生长特性:贴壁生长
细胞系(cell line)指原代细胞培养物经首次传代成功后所繁殖的细胞群体。 也指可长期连续传代的培养细胞。(由此便引申出了后来的有限细胞系(FiniteCellLine)、无限细胞系(InfiniteCellLine)),因此,细胞系狭义的是指可连续传代的细胞(定环境下口语和书面语都使用),广义是指可传代的细胞。肿瘤细胞系多由癌瘤建成,多呈类上皮型细胞,常已传几十代或百代以上,并具有不死性和异体接种致瘤性,丧失接触抑制能力。国际上美、英和日本等国已建有细胞库;美国已有美国标准细胞库或细胞银行(ATCC)和人遗传突变细胞库(HGMR)、细胞衰老细胞库(CAR)等,其中ATCC不仅是美国也世界大的细胞库。细胞系建立要求:什么样的体外培养群可被认可为己鉴定的细胞,视具体情况而定,无统一规定。对于用作原代培养的细胞只要供体均一,取材部位及组织种类等条件稳定即可,如用做长期培养,别是反复传代的细胞,常需做如下说明:组织来源:细胞供体所属物种,来自人体或者动物;个体性别、年龄;取材的器官或组织。如系肿瘤组织,应说明临床和病理诊断,以及病历号等。细胞生物学检测:了解细胞一般和殊的生物学性状,如细胞一般形态,异结构,细胞生长曲线和分裂指数,倍增时间,接种率等。如为肿瘤细胞,为说明来源于原肿瘤组织并保持恶性,须做软琼脂培养,异体接种致瘤和对正常组织侵润力等实验。培养条件和方法;应说明细胞系(或株)适应的生存环境,即指明使用的培养基、血清种类、用量以及适宜PH值。
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关键字: CHL-1 Cell|人黑色素瘤细胞;
上海冠导生物工程有限公司,先后从ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、PromoCell、ScienCell、JCRB等国内外细胞库引进细胞2000余株。以此为契机,公司组建了冠导细胞库,我司细胞均由资深细胞培养工程师进行培养。我司可以提供的细胞有:①细胞系②原代细胞③稳转株④耐药株⑤标记细胞⑥细胞配套试剂等。