G-401 Cells(赠送Str鉴定报告)|人肾癌Wilms细胞

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细胞背景资料：详见相关文献介绍

细胞形态：上皮细胞样

解冻细胞常见实验问题分析及推荐解决方法：在解冻冻存细胞时，发现会出现存活率低、大量细胞碎片及生长缓慢等问题，究竟是什么原因导致，我们该怎么进行解决？以下是国内外细胞培养专家针对解冻细胞实验问题，总结的一些解决方案！出现低存活率的可能原因及推荐解决方案如下：１)解冻过程中细胞裂解，推荐的解决方案：可预期到一定量的细胞死亡，因此细胞的浓度应足够GAO，考虑到这一损失。起始浓度为１*１０(６)至１*１０(７)细胞/毫升；２)解冻过程中的问题，推荐的解决方案：在-７０℃至-８０℃下保存冷冻的培养物，保存时间为１-５天，但这不是保存的方法。在３７℃充分解冻后应立即开始培养；３)对冷冻液过敏，推荐的解决方案：A.完全或部分更换培养基，减少培养基中冷冻液的量。在２４小时后更换培养液体可全部去除冷冻液。B.留出更多时间供培养物恢复。有时细胞需要几周时间才能形成单层或密集的悬浮物，取决于冷冻时细胞的年龄或传代次数或在生长阶段中的位置。冷冻的Zui佳条件在对数期；４)被冷冻的原种细胞的年龄或冷冻时培养物的年龄，推荐的解决方案：解冻Zui近冷冻的细胞。细胞处于冷冻状态的时间越长，存活率越低。检查冷冻细胞的时间和方法。在冷冻时细胞应处于对数期。

细胞生长：贴壁

LCLC103H细胞类似产品：：CHO-S细胞、OAC-P4C细胞、MDA-MB-134细胞

INS1E细胞类似产品：：HEC1B细胞、KTCTL140细胞、HEK 293T/17细胞

SW-480细胞类似产品：：NCI-H78细胞、MSB-1细胞、BALL-1细胞

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University of Arizona Cell Culture-893细胞类似产品：：GM2132细胞、SKBr3细胞、Sp2/O细胞

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细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源

[细胞产品包装]鲜活细胞：T２５培养瓶(一瓶)或冻存细胞：１ml冻存管(两支)

悬浮细胞不容易转染：悬浮细胞是指细胞生长不依赖支持物表面，在培养液中呈悬浮状态生长，如淋巴细胞。在实验室经常会遇到悬浮细胞的转染，其和贴壁细胞转染还是有很大不同的。目前大多数实验室用的是脂质体类的转染试剂，脂质体转染是基于电荷吸引原理，先形成脂质体-DNA复合物，散布在细胞周围，然后通过细胞的内吞作用，将目的基因导入细胞内，而脂质体复合物与贴壁细胞的接触机会比悬浮细胞GAO出很多倍，所以，脂质体转染时悬浮细胞的转染效率要明显低于贴壁细胞。其次，脂质体试剂的毒性较大，这就使得悬浮细胞的转染更为困难了。另外，悬浮细胞不易培养，易死亡，也给细胞转染造成了一定的困难。为了提GAO悬浮细胞的转染效率，可以使用非脂质体的转染试剂，如纳米材料的。也可以使用电转染方法，针对悬浮细胞等难转染细胞还是挺不错的，电击对细胞有一定的损伤，ZuiHAO选用具有细胞膜修复功能的电转染试剂，可以将电击对细胞的伤害降到Zui低，悬浮细胞不易转染，选对试剂及良HAO的细胞培养环境才是关键。

细胞传代方法：１：２-１：６传代，每周２-３次。

OUMS23细胞类似产品：：LA795细胞、WEHI-164细胞、Panc 03.27细胞

DBTRG-05MG细胞类似产品：：EBTr细胞、HB611细胞、NCI-SNU-216细胞

SW1088细胞类似产品：：P3X63NS1细胞、SUDHL-2细胞、SW-1573细胞

Experimental Mammary Tumour-6细胞类似产品：：TE 354.T细胞、bEND.3细胞、QGY7703细胞

MD Anderson-Metastatic Breast-361细胞类似产品：：OCILY10细胞、RCC23细胞、CRFK细胞

细胞来源说明：来源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名细胞库

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细胞生长特性：贴壁生长

BAEC细胞类似产品：：C28/I2细胞、H295细胞、LK2细胞

Ishikawa细胞类似产品：：C166细胞、CCD19Lu细胞、SUM-102PT细胞

L-1210细胞类似产品：：Cattle chondrocytes细胞、3T3J2细胞、MJ细胞

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NCI-SNU-668细胞类似产品：：B16-BL6细胞、PATU-S细胞、L2细胞

Y-79细胞类似产品：：MBT2细胞、DITNC1细胞、CX-1细胞

细胞冻存的步骤：１)选择处于对数生长期的细胞，在冻存前一天ZuiHAO换液。将多个培养瓶中的细胞培养液去掉，用０.２５% 胰蛋白酶消化。适时去掉胰蛋白酶，加入少量新培养液。用吸管吸取培养液反复吹打瓶壁上的细胞，使其成为均匀分散的细胞悬液。悬浮生产细胞则不要消化处理。然后将细胞收集于离心管中离心(１０００r/min，１０分钟)；２)去上清液，加入含２０%小牛血清的完全培养基，于４℃预冷１５分钟后，逐滴加入已无菌的DMSO或甘油，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，细胞浓度为５×１０６～１×１０７/mL之间。(冻存培养液的配置是不是一定要用小牛血清呢？答案是不一定的，具体要看培养的细胞类型来选择；３)将分装上述细胞悬液于２ml冻存管中，每管０.２５ml。冻存管要将盖子盖紧，并标记HAO细胞名称和冻存日期，同时作HAO登记(日期、细胞种类及代次、冻存支数)；４)将装HAO细胞的冻存管放到冻存盒中，-８０℃冰箱过夜。；如果有程序降温器(放在-８０℃冰箱过夜，放入液氮罐)ZuiHAO;或者可以在４℃，２h;然后转到-２０℃，２h;-８０℃，２h;放入液氮罐；５)细胞冻存在液氮中可以长期保存，但为妥善起见，冻存半年后，ZuiHAO取出一只冻存管细胞复苏培养，观察生长情况，然后再继续冻存。

细胞复苏相关注意事项：１.取细胞的过程中注意带HAO防冻手套，护目镜。此项尤为重要，细胞冻存管可能漏入液氮，解冻时冻存管中的气温急剧上升，可导致爆炸。２.冻存液的问题：冻存液的配置已是常识，在这里不作详述，但二甲基亚砜(DMSO )对细胞不是完全无毒副作用，在常温下，二甲基亚砜对细胞的毒副作较大，因此，必须在１-２min内使冻存液完全融化。如果复苏温度太慢，会造成细胞的损伤，二甲基亚砜(DMSO)ZuiHAO选择进口产品。３.离心前须加入少量培养液。细胞解冻后二甲基亚砜浓度较GAO，注意加入少量培养液可稀释其浓度，以减少对细胞的损伤。４.离心问题：目前主要有两种见解。一种是解冻后的细胞悬液直接吹打均匀后分装到培养瓶中进行培养，第二天换液。因为离心的目的是两个，去除DMSO，去除死细胞，这个是标准流程，但对一般人来说，把握不HAO离心转速和时间，转的不够活细胞沉底的少，细胞就全被扔掉了，转过了活细胞会受压过大，死亡。此外在操作过程中容易污染，所以不推荐。另一种说法为细胞悬液中含有二甲基亚砜(DMSO)，DMSO对细胞有一定的毒副作用，所以须将离心后的液体前倒净，且一定倒干净。我在试验中按照常规的离心分装的方法进行复苏，结果无异常。５.细胞贴壁少的问题：教科书中说明冻存细胞解冻时１ml细胞液要加１０ml-１５ml培养液，而在我的试验中的经验总结为培养基越少细胞越容易贴附。６.复苏细胞分装的问题：试验中我的经验总结为复苏１管细胞一般可分装到１-２只培养瓶中，分装过多，细胞浓度过低，不利于细胞的贴壁。７.加培养基的量放入问题：这个量的多少的把握主要涉及到的问题DMSO的浓度，从如果你加培养基的太少，那么DMSO的浓度就会比较大，就会影响细胞生长，从以前的资料来看，DMSO的浓度在小于０.５%的时候对一般细胞没有什么影响，还有一个说法是１%。所以如果你的冻存液的浓度是１０%DMSO的话那么加１０ml以上的培养基就恰HAO稀释到了无害浓度。

HCGC细胞类似产品：：BC3H-1细胞、PG-BE1细胞、OCUM-1细胞

BNL CL.2细胞类似产品：：TF1细胞、JURKAT E-6.1细胞、Colo-206F细胞

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Panc 4.03细胞类似产品：：WEHI-3细胞、RTE细胞、NCI-H2452细胞

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WEHI3B细胞类似产品：：OS-732细胞、HepG2/C3A细胞、Madison细胞

GS9L细胞类似产品：：Mouse INsulinoma 6细胞、RAMOS2G64C10细胞、RGE细胞

COLO 320DM细胞类似产品：：4T1.2细胞、R2C细胞、C3H/10T1/2 CL8细胞

RMG1细胞类似产品：：MFE-280细胞、NCI-H2110细胞、H82sclc细胞

HCT_116细胞类似产品：：RT4-D6P2T细胞、Hs-675-T细胞、WB F344细胞

NCI-H1155细胞类似产品：：H-146细胞、MDCK-II细胞、RSMC细胞

RLE-6TN细胞类似产品：：C3H10T1/2CL8细胞、U-251MG细胞、RWPE-1细胞

L 363细胞类似产品：：WEHI 3B细胞、MDCK.2细胞、LU451细胞

REC细胞类似产品：：JROECL21细胞、SU4细胞、NCI-H2286细胞

IGROV1细胞类似产品：：NCI.H226细胞、THP 1细胞、JVM-3细胞

RC-4B细胞类似产品：：RIN-14B细胞、FL 62891细胞、HCC-2279细胞

AN3 CA细胞类似产品：：LAD 2细胞、Los Angeles Prostate Cancer-4细胞、C2BBe 1细胞

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