NCI-H1915 Cells(赠送Str鉴定报告)|人非小细胞肺癌细胞

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细胞背景资料：详见相关文献介绍

细胞形态：上皮细胞样

【细胞培养中支原体、黑蛟虫、真菌的污染情况总结】支原体：黑色的，HAO象多为多形，培养液一般培养液一般会浑浊，原体感染，国内血清很多都没有做支原体阴性检测，而支原体是牛血清中Zui常见的微生物之一。而且它不能用过滤的办法除去。支原体感染细胞以后，细胞病变不很明显，只是慢慢死去。用泰乐菌素，兽用支原体病的药，但可用于细胞培养，无任何不良反应。如果作为常用的抗生素的话, 建议用８ug/ml的浓度；黑蛟虫：可以穿透滤膜，也可以通过空气传播，低倍下为黑色点状，GAO倍下可看见黑色的小虫游来游去，培养液也是不浑的，一般不会太影响，细胞还是可以用的。常常是细胞生长状态良HAO，且观测到的运动物无明显增多，且培养液颜色、透明度无明显变化，可在同一批号的血清养的细胞中发现类似现象。对细胞生长状态不会有明显影响，在细胞增殖旺盛之后会自然消失，除更换血清外无须殊处理。建议如果细胞有可能是此种污染的话，可以增加细胞的种板密度，以提GAO细胞的生存率；真菌：一般培养液清亮，不变色，镜下有丝状物，有些真菌开始很像死细胞碎片，只是它很多很多的小块很清楚，象珊瑚状，不象细胞碎片分不清，慢慢的会长出很细的黑色丝状物。真菌生长的比较慢，不象细菌那么容易被发现，但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了，也很难救活了。

细胞生长：贴壁

SNU-761细胞类似产品：：HM1900细胞、MES 13细胞、769P细胞

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NCI-H1915 Cells(赠送Str鉴定报告)|人非小细胞肺癌细胞

细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源

[细胞产品包装]鲜活细胞：T２５培养瓶(一瓶)或冻存细胞：１ml冻存管(两支)

细胞培养过程中，总是会出现各种意想不到的问题，一不留神就会全盘皆输。所谓细胞虐我千百遍，我待细胞如初恋。下面是贴壁细胞的保藏方法，希望对细胞培养初学操作者有所帮助：1)观察细胞状态：贴壁细胞密度达到85-90%，即可以细胞冻存形式进行保藏，拍照，记录细胞状态；2)细胞清洗：培养皿表面消毒后，转移至生物安全柜中，去除培养皿中培养液，加入12mlPBS，轻轻摇晃培养皿清洗细胞，随后吸除PBS清洗液；3)细胞消化：将2ml胰酶加入培养皿中，完全覆盖细胞，置于显微镜下观察（期间禁止摇晃培养皿），当细胞刚开始脱落时，立即转移至生物安全柜中，除去大部分胰酶，剩余约0.5ml胰酶，转移至培养箱内继续消化，每30秒肉眼观察细胞状态，至细胞成流沙状完全脱落，转移至生物安全柜中，加入12ml完全培养基，终止消化；4)细胞离心：将终止消化后的细胞悬液吹打均匀，吸取至15ml离心管中，1000r/min（110g），离心3min；5)细胞冻存：离心后去除细胞上清液，按照冻存细胞量5*10^5/ml，吸取冻存液重悬细胞沉淀，吹打均匀后分装至相应的冻存管中，进行冻存；6)细胞保藏：冻存管做HAO标记，放至程序降温盒中，于4℃冰箱放置30min，转移至-80℃超低温冰箱过夜，将过夜后的冻存细胞转移至液氮中保藏。

细胞传代方法：每周换液２—３次

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B10BR细胞类似产品：：NCI-H838细胞、OVCA5细胞、IPEC-1细胞

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Mouse Podocyte Clone-5细胞类似产品：：DSL-6A/C1细胞、HCEC-12细胞、U-251细胞

细胞来源说明：来源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名细胞库

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细胞生长特性：贴壁生长

SW480E细胞类似产品：：MDA-361细胞、NCI-H650细胞、SU-DH-L5细胞

HOS-TE85细胞类似产品：：SkMel31细胞、MS1细胞、OCI/AML-4细胞

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造成实验室细胞污染常见情况总结：细胞培养中Zui常见污染的是细菌、真菌和支原体污染。细胞一旦污染，大多数较难处理。那么，哪些情况我们不注意的话就会造成细胞污染呢？我们根据常见细胞培养实验分析总结下。【违规操作】１)为节省时间，有人已经用超净台四个多小时，不开紫外灭菌３０min,酒精擦拭后直接开始试验；２)器材或者溶液很久没用，未检测是否污染而直接使用；离心管多次使用，枪头为了方便交叉使用；３)超净台不点酒精灯；点了酒精灯放在右上角，而你在左下角做试验；４)不带手套，徒手操作；５)细胞培养间配备枪式移液器、手术器械、离心机、冰箱等专用仪器设备以及专用的实验服和拖鞋，未定期消毒。专用物品被带出传代细胞使用。培养细胞过程中使用的所有实验用具，如移液管、一次性枪头、一次性塑料离心管、冻存管等未按要求灭菌使用(通常需１２１°CGAO压灭菌２０分钟后３７％烤干备用)。超净台和桌面，东西太多太乱：超净台不是储物箱，什么培养皿、各种规格的板子、枪头就不要堆在超净台！这样就会有许多紫外线顾不到的卫生死角。传代细胞其他的桌面，切忌东西堆积如山，不要将酒精棉球、标签纸、牛皮纸买来后全部堆在传代细胞！一不小心“飘”进你的细胞培养板里，细胞就会养的不HAO，啥时候死了都不知道！【培养箱太久没清洁】细胞污染了，并非直接扔了培养皿就不管了，首先你还得看看这个恒温培养箱里其他培养皿或孔板里的细胞是否污染，如果有而且HAO几个板子都有类似的污染块，那很可能是培养箱中的水或者空气污染了，得给培养箱做个大扫除，重新酒精消毒，照紫外；孵箱里的水，水没了要记得加，还得记得十天半个月的就用酒精擦擦托盘。【传代细胞人多口杂，难管理】在传代细胞这种卫生要求GAO，人多了，不确定因素多了，难以保证试验在无菌条件下操作。出入试验室，实验服当风衣穿，不扣纽扣，不戴，就容易造成细胞污染；超净台做实验时，喜欢说话聊着做试验，要是还不带口罩，里面就有很多细菌等着去攻击你的细胞呢！

细胞复苏相关注意事项：１.取细胞的过程中注意带HAO防冻手套，护目镜。此项尤为重要，细胞冻存管可能漏入液氮，解冻时冻存管中的气温急剧上升，可导致爆炸。２.冻存液的问题：冻存液的配置已是常识，在这里不作详述，但二甲基亚砜(DMSO )对细胞不是完全无毒副作用，在常温下，二甲基亚砜对细胞的毒副作较大，因此，必须在１-２min内使冻存液完全融化。如果复苏温度太慢，会造成细胞的损伤，二甲基亚砜(DMSO)ZuiHAO选择进口产品。３.离心前须加入少量培养液。细胞解冻后二甲基亚砜浓度较GAO，注意加入少量培养液可稀释其浓度，以减少对细胞的损伤。４.离心问题：目前主要有两种见解。一种是解冻后的细胞悬液直接吹打均匀后分装到培养瓶中进行培养，第二天换液。因为离心的目的是两个，去除DMSO，去除死细胞，这个是标准流程，但对一般人来说，把握不HAO离心转速和时间，转的不够活细胞沉底的少，细胞就全被扔掉了，转过了活细胞会受压过大，死亡。此外在操作过程中容易污染，所以不推荐。另一种说法为细胞悬液中含有二甲基亚砜(DMSO)，DMSO对细胞有一定的毒副作用，所以须将离心后的液体前倒净，且一定倒干净。我在试验中按照常规的离心分装的方法进行复苏，结果无异常。５.细胞贴壁少的问题：教科书中说明冻存细胞解冻时１ml细胞液要加１０ml-１５ml培养液，而在我的试验中的经验总结为培养基越少细胞越容易贴附。６.复苏细胞分装的问题：试验中我的经验总结为复苏１管细胞一般可分装到１-２只培养瓶中，分装过多，细胞浓度过低，不利于细胞的贴壁。７.加培养基的量放入问题：这个量的多少的把握主要涉及到的问题DMSO的浓度，从如果你加培养基的太少，那么DMSO的浓度就会比较大，就会影响细胞生长，从以前的资料来看，DMSO的浓度在小于０.５%的时候对一般细胞没有什么影响，还有一个说法是１%。所以如果你的冻存液的浓度是１０%DMSO的话那么加１０ml以上的培养基就恰HAO稀释到了无害浓度。

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