KP4 Cells(赠送Str鉴定报告)|人胰腺癌细胞

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细胞背景资料：详见相关文献介绍

细胞形态：上皮细胞样

解冻细胞出现大量细胞碎片的可能原因及推荐解决方案如下：１)冷冻时细胞密度过低：推荐的解决方案：缩短解冻过程中的时间。将细胞取出后，立即将冻存管浸入在３７℃的水浴中，并震荡至全部融化，然后迅速地转移到预热的培养基中；２)不适当的冷冻过程：推荐的解决方案：解冻不同冷冻室总的试管。确保在冻存过程中采用的适当的技术，并确保使用了适量和适合的冷冻液。出现生长缓慢的可能原因及推荐解决方案如下：１)培养瓶的大小：一般解决方案是一些细胞在培养基中倾向于维持一定的密度。将培养物转移到较小的培养瓶中，使细胞密度上升；如，根据培养基的体积，从T７５培养瓶转移到２或３个T２５培养瓶中；２)细胞密度过低：通常解决方案是提GAO未来冷冻物种细胞的冻存密度，或使用较小的培养容器，或解冻多个试管来进行培养。

细胞生长：贴壁

OSKM-1细胞类似产品：：CMEC/D3细胞、Hs 839.T细胞、CCD-841-CoTr细胞

FHC细胞类似产品：：HELA-GFP细胞、T-24细胞、S91细胞

SK Mel28细胞类似产品：：USMC细胞、KU 812F细胞、RWPE-2细胞

NALM-6细胞类似产品：：RCCJF细胞、NIH:OVCAR3细胞、MCF.7细胞

EFM-192C细胞类似产品：：C-33A细胞、MDAPC2B细胞、293-H细胞

KP4 Cells(赠送Str鉴定报告)|人胰腺癌细胞

细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源

[细胞产品包装]鲜活细胞：T２５培养瓶(一瓶)或冻存细胞：１ml冻存管(两支)

细胞培养更HAO经验详解：1)收到细胞，首先要镜检：观察细胞形态是否正常，对于贴壁细胞则要注意看贴壁情况是否很HAO，观察细胞密度，有疑议及时咨提供细胞的技术人员。 由于运输的时间或者温度的变化，很多贴壁细胞在盛满培养基的瓶子里生长的状态和平时会有点不一样，主要是贴壁牢固问题。比如293T，平时贴壁就不是很牢，在装满的培养基瓶子里面，会发生大片的脱落，细胞聚集在一起，但是细胞生长还是正常的，通过离心收集，加以胰酶的消化，重新打散，又可以正常的贴壁生长。2)当通过上一步的观察，细胞初步没有问题时，进行下一步操作。当收到的细胞密达到80%左右时，则处理如下：弃除瓶中大部分培养基，仅保留5到10mL培养所需的常规培养基；或更换新鲜的培养基，置于培养箱中，随后每天观察。 细胞在低于正常生长温度情况下，会调整为静止期，或者慢速生长期，恢复37度的环境至少3个小时左右，才能重新调整到接近对数生长期的状态，在对数生长期进行细胞的传代会大大增加传代的成功率，和细胞的存活率。3)如果经步观察发现细胞密度超过90%，并且细胞状态很HAO时，则复温后2个小时需要立即传代。传代的比例应依据不同的细胞而定。对于生长比较快，状态稳定，不易受外界影响的细胞可以一次多传几瓶；对于生长较慢，细胞比较薄，状态容易波动的细胞类型，一次少传些，每瓶细胞密度大些，便于稳定生长。至于一些比较陌生的细胞，次处理也可以依照第二种情况。

细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。

MLOY4细胞类似产品：：PC615.3细胞、GM346细胞、GM00346细胞

Centre Antoine Lacassagne-148细胞类似产品：：ARO-81细胞、A2058细胞、AdHek细胞

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MDA453细胞类似产品：：EMT-6细胞、CEM clone 7细胞、P3/X63-Ag8细胞

AML-EOL-1细胞类似产品：：HSAS1细胞、FAK+/+细胞、NCI-H2009细胞

细胞来源说明：来源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名细胞库

KP4 Cells(赠送Str鉴定报告)|人胰腺癌细胞

细胞生长特性：贴壁生长

MV411细胞类似产品：：SCC7细胞、Transformed C3H Mouse Kidney-1细胞、PFSK细胞

LuCL4细胞类似产品：：CD 18细胞、BC-025细胞、Baby Hamster Kidney 21细胞

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PNT1/A细胞类似产品：：HCC-1599细胞、Hs729T细胞、NRK-49F细胞

细胞冻存的步骤：１)选择处于对数生长期的细胞，在冻存前一天ZuiHAO换液。将多个培养瓶中的细胞培养液去掉，用０.２５% 胰蛋白酶消化。适时去掉胰蛋白酶，加入少量新培养液。用吸管吸取培养液反复吹打瓶壁上的细胞，使其成为均匀分散的细胞悬液。悬浮生产细胞则不要消化处理。然后将细胞收集于离心管中离心(１０００r/min，１０分钟)；２)去上清液，加入含２０%小牛血清的完全培养基，于４℃预冷１５分钟后，逐滴加入已无菌的DMSO或甘油，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，细胞浓度为５×１０６～１×１０７/mL之间。(冻存培养液的配置是不是一定要用小牛血清呢？答案是不一定的，具体要看培养的细胞类型来选择；３)将分装上述细胞悬液于２ml冻存管中，每管０.２５ml。冻存管要将盖子盖紧，并标记HAO细胞名称和冻存日期，同时作HAO登记(日期、细胞种类及代次、冻存支数)；４)将装HAO细胞的冻存管放到冻存盒中，-８０℃冰箱过夜。；如果有程序降温器(放在-８０℃冰箱过夜，放入液氮罐)ZuiHAO;或者可以在４℃，２h;然后转到-２０℃，２h;-８０℃，２h;放入液氮罐；５)细胞冻存在液氮中可以长期保存，但为妥善起见，冻存半年后，ZuiHAO取出一只冻存管细胞复苏培养，观察生长情况，然后再继续冻存。

细胞复苏后贴壁细胞较少的问题分析：总结１：复苏过程没有问题，是否是从液氮拿出直接放入温水，还有培养箱，二氧化碳浓度，培养基、PH值等环节。要么加GAO浓度FBS １５-２０%，看看能否帮助贴壁，当然也需要考虑血清问题，还有确信拿来的细胞没问题。总结２：首先应该怀疑冻存，实际上复苏出问题的可能非常小，因为操作简单，而且死板。１、你冻存的时候是不是消化的时间过长，这是一般人所注意不到的，即使书上也不讲这个问题，太长的消化时间会让细胞复苏时失去贴壁能力，表现为先贴后死，原因是在你复苏的时候细胞已进入凋亡程序，不可逆转的死亡。２、你的冻存液HAO不HAO，是什么，甘油还是DMSO，质量非常重要，否则也会死亡。３、你的冻存液的量加的是不是太多，ATCC推荐是不超过７%，大于５%，太多也不HAO。４、你在冻存的时候是不是把DMSO混均匀，这个有一些影响，但不算太大。５、你的冻存是否按部就班，就是所温度梯度是不是把握严格，很多人容易忘却这个事情，因为这个东西流程长。６、如果你细胞污染，你是否能很快看到，我比我的导师能早一天看到污染。从这个角度讲建议去除离心这步。７、你的细胞在冻存前是否过密。还有，不赞成孵箱污染这个概念的，所有在一个孵箱里的细胞都污染一个细菌的话，这个细菌是源于孵箱的，但这不代表孵箱污染，因为孵箱无论你如何处理都有大量的细菌，问题在操作。每次污染的原因都要尽可能的找，以后就不犯同样的问题，这个很重要，不能靠猜，否则你就有可能细胞养绝Zui后换课题，这个见得太多了，别不当会事。

HCC1954-BL细胞类似产品：：HEK-A细胞、SK-MEL-3细胞、MyLa 2059细胞

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NCI.H226细胞类似产品：：HEC1-B细胞、5-8F细胞、NCI H508细胞

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McArdle RH-7777细胞类似产品：：WB F344细胞、786.O细胞、OVCAR-420细胞

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H9c2(2-1)细胞类似产品：：MFE296细胞、PLCPRF5细胞、HCC0044细胞

CTLA4Ig-24细胞类似产品：：HEK293-H细胞、NCTC-929细胞、A2008细胞

LK 2细胞类似产品：：MZ-CRC-1细胞、LADMAC细胞、J774 A1细胞

IMCD3细胞类似产品：：P560细胞、MKN-1细胞、NCI-H2052细胞

Ontario Cancer Institute-Acute Myeloid Leukemia-4细胞类似产品：：Hs 294T细胞、U-118MG细胞、HNE-1细胞

HLEC-B3细胞类似产品：：MOLT 16细胞、BN-CL2细胞、MTEC1细胞

Duke University 4475细胞类似产品：：SUM-190PT细胞、EM3细胞、CMT64细胞

95-D细胞类似产品：：Line 870 Emory University-4细胞、SHP77细胞、SCI1细胞

A-172细胞类似产品：：SK Mel 2细胞、Calu-3细胞、COLO-320-HSR细胞

RPMI-8226细胞类似产品：：Human Epithelioma-2细胞、P31/Fujioka细胞、X63.Ag8.653细胞

Hep 3B细胞类似产品：：Factor Dependent Continuous-Paterson 1细胞、NT2D1细胞、HDLM2细胞

BC-3-H-I细胞类似产品：：Sp2/0细胞、PA317细胞、A375mel细胞

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