MeWo Cells(赠送Str鉴定报告)|人恶性黑色素瘤细胞

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细胞背景资料：详见相关文献介绍

细胞形态：上皮细胞样

【细胞培养中支原体、黑蛟虫、真菌的污染情况总结】支原体：黑色的，HAO象多为多形，培养液一般培养液一般会浑浊，原体感染，国内血清很多都没有做支原体阴性检测，而支原体是牛血清中Zui常见的微生物之一。而且它不能用过滤的办法除去。支原体感染细胞以后，细胞病变不很明显，只是慢慢死去。用泰乐菌素，兽用支原体病的药，但可用于细胞培养，无任何不良反应。如果作为常用的抗生素的话, 建议用８ug/ml的浓度；黑蛟虫：可以穿透滤膜，也可以通过空气传播，低倍下为黑色点状，GAO倍下可看见黑色的小虫游来游去，培养液也是不浑的，一般不会太影响，细胞还是可以用的。常常是细胞生长状态良HAO，且观测到的运动物无明显增多，且培养液颜色、透明度无明显变化，可在同一批号的血清养的细胞中发现类似现象。对细胞生长状态不会有明显影响，在细胞增殖旺盛之后会自然消失，除更换血清外无须殊处理。建议如果细胞有可能是此种污染的话，可以增加细胞的种板密度，以提GAO细胞的生存率；真菌：一般培养液清亮，不变色，镜下有丝状物，有些真菌开始很像死细胞碎片，只是它很多很多的小块很清楚，象珊瑚状，不象细胞碎片分不清，慢慢的会长出很细的黑色丝状物。真菌生长的比较慢，不象细菌那么容易被发现，但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了，也很难救活了。

细胞生长：贴壁

SW-1463细胞类似产品：：HO1-N-1细胞、MCF.7细胞、BEAS2B细胞

YD-15细胞类似产品：：Ketr3细胞、NSC34细胞、Panc-10.05细胞

Shadyside Hospital Pittsburgh-77细胞类似产品：：H9c2 (2-1)细胞、R1800[RA]细胞、M059K细胞

NCI-H810细胞类似产品：：ACHN细胞、JB6 Cl 30-7b细胞、H2228细胞

Colo741细胞类似产品：：KYSE-410细胞、EnCa1细胞、TE671细胞

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细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源

[细胞产品包装]鲜活细胞：T２５培养瓶(一瓶)或冻存细胞：１ml冻存管(两支)

在细胞培养过程中会出现这样或那样的问题，客户遇到的问题从细胞生长角度来说，针对细胞培养过程中生长不HAO、甚至死亡的原因，我们做以下分析并提出相对应的解决方法。一、培养细胞生长不HAO》可能原因：细胞本身的状态》1)细胞传代次数多，细胞老化；2)细胞的接种量：接种量过低，细胞生长缓慢；3)细胞传代时间过晚：细胞中毒，影响传代后的细胞生长；4)胰酶消化时间过长或过短：时间过长，细胞死亡；时间过短，细胞未完全分离而成团，细胞死亡；5)细胞的冻存与复苏：慢冻速融。污染：1)支原体污染；2)霉菌污染；培养基或血清：1)更换血清或培养基之前未进行验证；2)选择的培养基是否合适；3)培养基配制是否准确无误；培养环境：1)CO2供应是否正常；2)培养箱或摇床温度控制是否正确；解决方法：根据以上四个方面的可能原因，做出针对性的解决方案》1)注意细胞的本身状态：如传代次数、接种量等；2)避免产生污染（用正规、合法、可溯源的血清）；3)要用合适的血清或培养基，ZuiHAO经过验证；4)注意实验室的环境；二、培养细胞死亡》可能原因：1)培养箱内无CO2；2)培养箱内温度波动太大；3)细胞冻存或复苏过程中损伤；4)培养液渗透压不正确；5)培养液中有毒代谢产物堆积；解决方法：1)检测培养箱内CO2；2)检查培养箱内温度；3)取新的保存细胞种；4)检测培养液渗透压；5)换入新鲜培养液。

细胞传代方法：１：３-１：５传代，２-３天换液１次。

H-220细胞类似产品：：Cor L51细胞、SV-HUC-1细胞、PK 15细胞

UMR106细胞类似产品：：TGW-nu细胞、Panc203细胞、Mouse INsulinoma 6细胞

MEF (CF-1)细胞类似产品：：HPDE6c7细胞、RMG-I细胞、1301细胞

NCI-H520细胞类似产品：：Hs888T细胞、DC2.4细胞、HIEC-6细胞

Centre Antoine Lacassagne-62细胞类似产品：：MESSA细胞、IHC-ST1细胞、CEM-CCRF (CAMR)细胞

细胞来源说明：来源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名细胞库

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细胞生长特性：混合生长

U 138 MG细胞类似产品：：A375-MEL细胞、R-1059-D细胞、32D-Cl3细胞

MOLT 3细胞类似产品：：BC-009细胞、OAW-42细胞、LA-4 [Mouse lung adenoma]细胞

R.K.13细胞类似产品：：MDA-MB-134-VI细胞、Microbiological Associates-104细胞、OCI AML5细胞

2780CP细胞类似产品：：KOPN8细胞、TFH细胞、CHP-100细胞

UT-7细胞类似产品：：HCCC-9810细胞、Panc_04_03细胞、FL62891细胞

LS411细胞类似产品：：H-2195细胞、NCI-H1668细胞、HCC1954细胞

培养细胞真的不难，Zui关键几点：１)所有的东西使用，如果你用的血清、培养皿、培养基、胰酶什么的都是进口的，真的很难相信你会把细胞养坏；２)动作要快，胰酶消化，换液什么，细胞暴露在空气中的时间越少越HAO。另外，要掌握HAO胰酶消化时间，所谓的细胞状态差，很多时候是传代的原因；３)有时间的话，需要细胞计数，传相应数目的细胞到培养皿中，可以大致清楚细胞的生长曲线，不会临时要处理，手足无措；４)要做什么心里要非常清楚，合理安排时间，传代细胞的实验穿插进行，可以节省很多时间，也不会耽误别人的实验；５)个人的实验器具自己收一套，不要和别人混用，Zui近换了什么新的东西稍微记一下，试剂一旦怀疑污染，马上丢；６)传代细胞不能进去太多人，避免相互干扰。每天对待细胞比孝敬爹妈还用心，那真是捧在手里怕碎了，含在嘴里怕化了，看在眼里怕丢了，培养细胞时有哪些经验教训可以分享呢?１)严格无菌操作，多喷喷酒精，要是对灭菌的东西不放心，自己包自己送自己烘干；２)不要和别人共用试剂耗材，自己准备一套；３)有可能的话在拿到新细胞的时候做HAO支原体衣原体检测；４)水浴锅很脏，生化培养箱要是得手动加湿的话盘里的水也会很脏，勤换(灭菌水加进去)；５)晚上离开的时候ZuiHAO给传代细胞照紫外，超净台是用完就开；６)是同一时间就你一个人在用传代细胞在养细胞。

细胞复苏相关注意事项：１.取细胞的过程中注意带HAO防冻手套，护目镜。此项尤为重要，细胞冻存管可能漏入液氮，解冻时冻存管中的气温急剧上升，可导致爆炸。２.冻存液的问题：冻存液的配置已是常识，在这里不作详述，但二甲基亚砜(DMSO )对细胞不是完全无毒副作用，在常温下，二甲基亚砜对细胞的毒副作较大，因此，必须在１-２min内使冻存液完全融化。如果复苏温度太慢，会造成细胞的损伤，二甲基亚砜(DMSO)ZuiHAO选择进口产品。３.离心前须加入少量培养液。细胞解冻后二甲基亚砜浓度较GAO，注意加入少量培养液可稀释其浓度，以减少对细胞的损伤。４.离心问题：目前主要有两种见解。一种是解冻后的细胞悬液直接吹打均匀后分装到培养瓶中进行培养，第二天换液。因为离心的目的是两个，去除DMSO，去除死细胞，这个是标准流程，但对一般人来说，把握不HAO离心转速和时间，转的不够活细胞沉底的少，细胞就全被扔掉了，转过了活细胞会受压过大，死亡。此外在操作过程中容易污染，所以不推荐。另一种说法为细胞悬液中含有二甲基亚砜(DMSO)，DMSO对细胞有一定的毒副作用，所以须将离心后的液体前倒净，且一定倒干净。我在试验中按照常规的离心分装的方法进行复苏，结果无异常。５.细胞贴壁少的问题：教科书中说明冻存细胞解冻时１ml细胞液要加１０ml-１５ml培养液，而在我的试验中的经验总结为培养基越少细胞越容易贴附。６.复苏细胞分装的问题：试验中我的经验总结为复苏１管细胞一般可分装到１-２只培养瓶中，分装过多，细胞浓度过低，不利于细胞的贴壁。７.加培养基的量放入问题：这个量的多少的把握主要涉及到的问题DMSO的浓度，从如果你加培养基的太少，那么DMSO的浓度就会比较大，就会影响细胞生长，从以前的资料来看，DMSO的浓度在小于０.５%的时候对一般细胞没有什么影响，还有一个说法是１%。所以如果你的冻存液的浓度是１０%DMSO的话那么加１０ml以上的培养基就恰HAO稀释到了无害浓度。

RH-30细胞类似产品：：IAR-20细胞、SK-N-BE2C细胞、CMT 93细胞

SK-RC-20细胞类似产品：：CT 26细胞、L 1210细胞、TE 32.T细胞

Microbiological Associates-104细胞类似产品：：HR1K细胞、KG-1a细胞、LN 382细胞

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NCI-H69C细胞类似产品：：SK.MEL.28细胞、KNS42细胞、HEK;293细胞

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KU-812-F细胞类似产品：：SEM细胞、Mevo细胞、OCIAML2细胞

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MC-3T3细胞类似产品：：CESS细胞、A-172MG细胞、RFL 6细胞

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TM-4细胞类似产品：：OAC-P4C细胞、HEC-1-B细胞、CCD966SK细胞

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