MDCK Cells(赠送Str鉴定报告)|犬肾细胞

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细胞背景资料：详见相关文献介绍

细胞形态：上皮细胞样

解冻细胞常见实验问题分析及推荐解决方法：在解冻冻存细胞时，发现会出现存活率低、大量细胞碎片及生长缓慢等问题，究竟是什么原因导致，我们该怎么进行解决？以下是国内外细胞培养专家针对解冻细胞实验问题，总结的一些解决方案！出现低存活率的可能原因及推荐解决方案如下：１)解冻过程中细胞裂解，推荐的解决方案：可预期到一定量的细胞死亡，因此细胞的浓度应足够GAO，考虑到这一损失。起始浓度为１*１０(６)至１*１０(７)细胞/毫升；２)解冻过程中的问题，推荐的解决方案：在-７０℃至-８０℃下保存冷冻的培养物，保存时间为１-５天，但这不是保存的方法。在３７℃充分解冻后应立即开始培养；３)对冷冻液过敏，推荐的解决方案：A.完全或部分更换培养基，减少培养基中冷冻液的量。在２４小时后更换培养液体可全部去除冷冻液。B.留出更多时间供培养物恢复。有时细胞需要几周时间才能形成单层或密集的悬浮物，取决于冷冻时细胞的年龄或传代次数或在生长阶段中的位置。冷冻的Zui佳条件在对数期；４)被冷冻的原种细胞的年龄或冷冻时培养物的年龄，推荐的解决方案：解冻Zui近冷冻的细胞。细胞处于冷冻状态的时间越长，存活率越低。检查冷冻细胞的时间和方法。在冷冻时细胞应处于对数期。

细胞生长：贴壁

SK-N-BE(1)细胞类似产品：：AZ-521细胞、NOR-10细胞、RAMOS2G64C10细胞

T/G HA VSMC细胞类似产品：：10T1/2细胞、AsPC-1细胞、HARAB细胞

RMS13细胞类似产品：：WM115-mel细胞、P3 NS1 Ag4细胞、SP2细胞

NBL-4细胞类似产品：：UMRC-2细胞、Simpson细胞、NCI-H498细胞

CAL-78细胞类似产品：：NCI-H1435细胞、COLO 680N细胞、Ontario Cancer Institute-Acute Myeloid Leukemia-5细胞

MDCK Cells(赠送Str鉴定报告)|犬肾细胞

细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源

[细胞产品包装]鲜活细胞：T２５培养瓶(一瓶)或冻存细胞：１ml冻存管(两支)

在细胞培养过程中会出现这样或那样的问题，客户遇到的问题从细胞生长角度来说，针对细胞培养过程中生长不HAO、甚至死亡的原因，我们做以下分析并提出相对应的解决方法。一、培养细胞生长不HAO》可能原因：细胞本身的状态》1)细胞传代次数多，细胞老化；2)细胞的接种量：接种量过低，细胞生长缓慢；3)细胞传代时间过晚：细胞中毒，影响传代后的细胞生长；4)胰酶消化时间过长或过短：时间过长，细胞死亡；时间过短，细胞未完全分离而成团，细胞死亡；5)细胞的冻存与复苏：慢冻速融。污染：1)支原体污染；2)霉菌污染；培养基或血清：1)更换血清或培养基之前未进行验证；2)选择的培养基是否合适；3)培养基配制是否准确无误；培养环境：1)CO2供应是否正常；2)培养箱或摇床温度控制是否正确；解决方法：根据以上四个方面的可能原因，做出针对性的解决方案》1)注意细胞的本身状态：如传代次数、接种量等；2)避免产生污染（用正规、合法、可溯源的血清）；3)要用合适的血清或培养基，ZuiHAO经过验证；4)注意实验室的环境；二、培养细胞死亡》可能原因：1)培养箱内无CO2；2)培养箱内温度波动太大；3)细胞冻存或复苏过程中损伤；4)培养液渗透压不正确；5)培养液中有毒代谢产物堆积；解决方法：1)检测培养箱内CO2；2)检查培养箱内温度；3)取新的保存细胞种；4)检测培养液渗透压；5)换入新鲜培养液。

细胞传代方法：１：２传代

HCC1359细胞类似产品：：SU-DHL2细胞、MC3T3-E1 Subclone 24细胞、LL/2 (LLC1)细胞

C 643细胞类似产品：：NPC-TW 01细胞、HTh74细胞、MDA-453细胞

HCT 8细胞类似产品：：KNS42细胞、P-388D1细胞、WEHI 231细胞

Y 1细胞类似产品：：MESSA/Dx5细胞、U-251-MG细胞、P3J HR-1细胞

NCIH358细胞类似产品：：NOMO-1细胞、Giant Cell Tumor细胞、COS-1细胞

细胞来源说明：来源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名细胞库

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细胞生长特性：贴壁生长　

IMCD-3细胞类似产品：：NCI-H2009细胞、Ontario Cancer Institute-Acute Myeloid Leukemia-2细胞、LIM 1215细胞

MKN-45细胞类似产品：：SHSY-5Y细胞、HPB/ALL细胞、MCF-7细胞

253J细胞类似产品：：GM3569细胞、Mouse Podocyte Clone-5细胞、RT4P细胞

RKO-E6细胞类似产品：：RetroPack PT67细胞、HMEL细胞、SF126细胞

H-378细胞类似产品：：SW839细胞、NCI-H87细胞、Alpha Mouse Liver 12细胞

SW-900细胞类似产品：：HD11细胞、Hs68细胞、AMO1细胞

细胞冻存的步骤：１)选择处于对数生长期的细胞，在冻存前一天ZuiHAO换液。将多个培养瓶中的细胞培养液去掉，用０.２５% 胰蛋白酶消化。适时去掉胰蛋白酶，加入少量新培养液。用吸管吸取培养液反复吹打瓶壁上的细胞，使其成为均匀分散的细胞悬液。悬浮生产细胞则不要消化处理。然后将细胞收集于离心管中离心(１０００r/min，１０分钟)；２)去上清液，加入含２０%小牛血清的完全培养基，于４℃预冷１５分钟后，逐滴加入已无菌的DMSO或甘油，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，细胞浓度为５×１０６～１×１０７/mL之间。(冻存培养液的配置是不是一定要用小牛血清呢？答案是不一定的，具体要看培养的细胞类型来选择；３)将分装上述细胞悬液于２ml冻存管中，每管０.２５ml。冻存管要将盖子盖紧，并标记HAO细胞名称和冻存日期，同时作HAO登记(日期、细胞种类及代次、冻存支数)；４)将装HAO细胞的冻存管放到冻存盒中，-８０℃冰箱过夜。；如果有程序降温器(放在-８０℃冰箱过夜，放入液氮罐)ZuiHAO;或者可以在４℃，２h;然后转到-２０℃，２h;-８０℃，２h;放入液氮罐；５)细胞冻存在液氮中可以长期保存，但为妥善起见，冻存半年后，ZuiHAO取出一只冻存管细胞复苏培养，观察生长情况，然后再继续冻存。

细胞培养无菌操作步骤和注意事项：１.打开无菌工作台及净化室的紫外灯，消毒半小时以上。２.进入净化室前先关闭紫外灯，打开超净台风机，等待３０min以上，以排尽臭氧。３.穿HAO隔离衣，戴HAO口罩，帽子。４.风淋２分钟。５.０.１%水泡手，擦干。６.点燃酒精灯;超净台内应避免放入过多的物品;使用的吸管，滴管，试管，培养瓶等均事先灭菌。７.打开各类瓶盖前先过火，以固定灰尘;打开的瓶口、试管口过火焰，镊子使用前应经火焰烧灼。８.水平式风机的超净台，应使瓶口斜置，应尽量避免瓶口敞开直立。９.同一根吸管或滴管不应连续用于几个不同的细胞系；吸取培养基的吸管应离开培养瓶或试管口０.５cm，避免伸入培养瓶口或试管口；以防止细胞系的互相混杂污染。１０.漏在培养瓶上或台上的液体，立即用酒精棉球擦净。１１.操作完毕后恢复工作台面。

HCMEC细胞类似产品：：C4-2B细胞、LAD-2细胞、Hs706T细胞

TE14细胞类似产品：：C3H/10T1/2 clone 8细胞、OVCAR10细胞、7404细胞

D283MED细胞类似产品：：Lu99A细胞、HEK293S细胞、DoTc2细胞

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RC13细胞类似产品：：JF305细胞、BE2-C细胞、HSC5细胞

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3AO细胞类似产品：：TH1细胞、H711细胞、RN细胞

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SKml2细胞类似产品：：P3/X63-Ag8细胞、C-32细胞、MOLM16细胞

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BCP-1细胞类似产品：：P3X63Ag8-6-5-3细胞、High-5细胞、H-810细胞

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BA/F3细胞类似产品：：DSL-6A-C1细胞、HEP-3B2细胞、MDA-MB468细胞

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Mel RM细胞类似产品：：MFC细胞、HEK-293-F细胞、H2135细胞

C-33A细胞类似产品：：NCIH740细胞、CEM-T4细胞、PC3M-IE8细胞

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MC116细胞类似产品：：Hs839.T细胞、SCaBER细胞、IHHA-1细胞

OV90细胞类似产品：：McG-1细胞、Hs 821.T细胞、PANC-03-27细胞

Namalva细胞类似产品：：Nakata-1细胞、MDA231-LM2细胞、HCC1419细胞

293EBNA细胞类似产品：：GM-3573细胞、NCIH929细胞、MB49细胞

D283MED细胞类似产品：：Lu99A细胞、ASH-3细胞、PC 61.5.3细胞

C28/I2细胞类似产品：：Rabbit Kidney 13细胞、CCK-81细胞、SW 403细胞

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