LAD 2 Cells(赠送Str鉴定报告)|人肥大细胞

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细胞背景资料：肥大细胞

细胞形态：上皮细胞样

【细胞培养中支原体、黑蛟虫、真菌的污染情况总结】支原体：黑色的，HAO象多为多形，培养液一般培养液一般会浑浊，原体感染，国内血清很多都没有做支原体阴性检测，而支原体是牛血清中Zui常见的微生物之一。而且它不能用过滤的办法除去。支原体感染细胞以后，细胞病变不很明显，只是慢慢死去。用泰乐菌素，兽用支原体病的药，但可用于细胞培养，无任何不良反应。如果作为常用的抗生素的话, 建议用８ug/ml的浓度；黑蛟虫：可以穿透滤膜，也可以通过空气传播，低倍下为黑色点状，GAO倍下可看见黑色的小虫游来游去，培养液也是不浑的，一般不会太影响，细胞还是可以用的。常常是细胞生长状态良HAO，且观测到的运动物无明显增多，且培养液颜色、透明度无明显变化，可在同一批号的血清养的细胞中发现类似现象。对细胞生长状态不会有明显影响，在细胞增殖旺盛之后会自然消失，除更换血清外无须殊处理。建议如果细胞有可能是此种污染的话，可以增加细胞的种板密度，以提GAO细胞的生存率；真菌：一般培养液清亮，不变色，镜下有丝状物，有些真菌开始很像死细胞碎片，只是它很多很多的小块很清楚，象珊瑚状，不象细胞碎片分不清，慢慢的会长出很细的黑色丝状物。真菌生长的比较慢，不象细菌那么容易被发现，但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了，也很难救活了。

细胞生长：贴壁

PBMC细胞类似产品：：kms 11细胞、LLC-MK-2细胞、526-mel细胞

SK-N-F1细胞类似产品：：Hs 274.T细胞、IM-95细胞、SW 1271细胞

SK-N-BE2细胞类似产品：：SNT8细胞、NCI-H676B细胞、SUM159细胞

SNU-182细胞类似产品：：B-104细胞、Hep 3B细胞、MDA-MB-175细胞

ZR-75-30细胞类似产品：：EBC-1/original细胞、SiHa细胞、EAC-E2G8细胞

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细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源

[细胞产品包装]鲜活细胞：T２５培养瓶(一瓶)或冻存细胞：１ml冻存管(两支)

细胞培养过程中，总是会出现各种意想不到的问题，一不留神就会全盘皆输。所谓细胞虐我千百遍，我待细胞如初恋。下面是贴壁细胞的保藏方法，希望对细胞培养初学操作者有所帮助：1)观察细胞状态：贴壁细胞密度达到85-90%，即可以细胞冻存形式进行保藏，拍照，记录细胞状态；2)细胞清洗：培养皿表面消毒后，转移至生物安全柜中，去除培养皿中培养液，加入12mlPBS，轻轻摇晃培养皿清洗细胞，随后吸除PBS清洗液；3)细胞消化：将2ml胰酶加入培养皿中，完全覆盖细胞，置于显微镜下观察（期间禁止摇晃培养皿），当细胞刚开始脱落时，立即转移至生物安全柜中，除去大部分胰酶，剩余约0.5ml胰酶，转移至培养箱内继续消化，每30秒肉眼观察细胞状态，至细胞成流沙状完全脱落，转移至生物安全柜中，加入12ml完全培养基，终止消化；4)细胞离心：将终止消化后的细胞悬液吹打均匀，吸取至15ml离心管中，1000r/min（110g），离心3min；5)细胞冻存：离心后去除细胞上清液，按照冻存细胞量5*10^5/ml，吸取冻存液重悬细胞沉淀，吹打均匀后分装至相应的冻存管中，进行冻存；6)细胞保藏：冻存管做HAO标记，放至程序降温盒中，于4℃冰箱放置30min，转移至-80℃超低温冰箱过夜，将过夜后的冻存细胞转移至液氮中保藏。

细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。

CTSC-3细胞类似产品：：HFF细胞、Nb2-11细胞、SU-DHL-5细胞

SU.86细胞类似产品：：TCam-2细胞、IGROV1细胞、HPAF-I细胞

CT26细胞类似产品：：H-EMC-SS细胞、GM03569B细胞、H-526细胞

KYSE70细胞类似产品：：TF-1细胞、H-1838细胞、52PE细胞

NB-19细胞类似产品：：HREC细胞、PGLH7细胞、F98细胞

细胞来源说明：来源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名细胞库

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细胞生长特性：悬浮

OCUM-1细胞类似产品：：MDA-MB-157细胞、NCI-H1666细胞、HEK (AD293)细胞

McG-1细胞类似产品：：Y3.AG.1.2.3细胞、HPDEC细胞、ECV-304细胞

L 1210细胞类似产品：：BHP10-3细胞、NCI-SNU-5细胞、NCI-H2073细胞

U118MG细胞类似产品：：NCI-H2141细胞、TCCSUP细胞、SNU-878细胞

IMCD-3细胞类似产品：：NCI-H2009细胞、Ontario Cancer Institute-Acute Myeloid Leukemia-2细胞、LIM 1215细胞

TE14细胞类似产品：：C3H/10T1/2 clone 8细胞、OVCAR10细胞、7404细胞

细胞冻存的步骤：１)选择处于对数生长期的细胞，在冻存前一天ZuiHAO换液。将多个培养瓶中的细胞培养液去掉，用０.２５% 胰蛋白酶消化。适时去掉胰蛋白酶，加入少量新培养液。用吸管吸取培养液反复吹打瓶壁上的细胞，使其成为均匀分散的细胞悬液。悬浮生产细胞则不要消化处理。然后将细胞收集于离心管中离心(１０００r/min，１０分钟)；２)去上清液，加入含２０%小牛血清的完全培养基，于４℃预冷１５分钟后，逐滴加入已无菌的DMSO或甘油，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，细胞浓度为５×１０６～１×１０７/mL之间。(冻存培养液的配置是不是一定要用小牛血清呢？答案是不一定的，具体要看培养的细胞类型来选择；３)将分装上述细胞悬液于２ml冻存管中，每管０.２５ml。冻存管要将盖子盖紧，并标记HAO细胞名称和冻存日期，同时作HAO登记(日期、细胞种类及代次、冻存支数)；４)将装HAO细胞的冻存管放到冻存盒中，-８０℃冰箱过夜。；如果有程序降温器(放在-８０℃冰箱过夜，放入液氮罐)ZuiHAO;或者可以在４℃，２h;然后转到-２０℃，２h;-８０℃，２h;放入液氮罐；５)细胞冻存在液氮中可以长期保存，但为妥善起见，冻存半年后，ZuiHAO取出一只冻存管细胞复苏培养，观察生长情况，然后再继续冻存。

细胞复苏相关注意事项：１.取细胞的过程中注意带HAO防冻手套，护目镜。此项尤为重要，细胞冻存管可能漏入液氮，解冻时冻存管中的气温急剧上升，可导致爆炸。２.冻存液的问题：冻存液的配置已是常识，在这里不作详述，但二甲基亚砜(DMSO )对细胞不是完全无毒副作用，在常温下，二甲基亚砜对细胞的毒副作较大，因此，必须在１-２min内使冻存液完全融化。如果复苏温度太慢，会造成细胞的损伤，二甲基亚砜(DMSO)ZuiHAO选择进口产品。３.离心前须加入少量培养液。细胞解冻后二甲基亚砜浓度较GAO，注意加入少量培养液可稀释其浓度，以减少对细胞的损伤。４.离心问题：目前主要有两种见解。一种是解冻后的细胞悬液直接吹打均匀后分装到培养瓶中进行培养，第二天换液。因为离心的目的是两个，去除DMSO，去除死细胞，这个是标准流程，但对一般人来说，把握不HAO离心转速和时间，转的不够活细胞沉底的少，细胞就全被扔掉了，转过了活细胞会受压过大，死亡。此外在操作过程中容易污染，所以不推荐。另一种说法为细胞悬液中含有二甲基亚砜(DMSO)，DMSO对细胞有一定的毒副作用，所以须将离心后的液体前倒净，且一定倒干净。我在试验中按照常规的离心分装的方法进行复苏，结果无异常。５.细胞贴壁少的问题：教科书中说明冻存细胞解冻时１ml细胞液要加１０ml-１５ml培养液，而在我的试验中的经验总结为培养基越少细胞越容易贴附。６.复苏细胞分装的问题：试验中我的经验总结为复苏１管细胞一般可分装到１-２只培养瓶中，分装过多，细胞浓度过低，不利于细胞的贴壁。７.加培养基的量放入问题：这个量的多少的把握主要涉及到的问题DMSO的浓度，从如果你加培养基的太少，那么DMSO的浓度就会比较大，就会影响细胞生长，从以前的资料来看，DMSO的浓度在小于０.５%的时候对一般细胞没有什么影响，还有一个说法是１%。所以如果你的冻存液的浓度是１０%DMSO的话那么加１０ml以上的培养基就恰HAO稀释到了无害浓度。

B95.8细胞类似产品：：BC-3-H-I细胞、HT29细胞、Kit-225-K6细胞

DHL-6细胞类似产品：：MLMA细胞、H719细胞、A549/DDP细胞

MDA-MB453细胞类似产品：：CCD966SK细胞、NCI-H1734细胞、NCIH2135细胞

Hs 888.Lu细胞类似产品：：HT细胞、PL12细胞、P3J细胞

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U-343 MG细胞类似产品：：MGH-U3 (RN)细胞、H735细胞、H1385细胞

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hA549细胞类似产品：：MOLT16细胞、OVCA420细胞、Hs863T细胞

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PK15细胞类似产品：：WM 2664细胞、HEC151细胞、Mel RM细胞

293/EBNA-1细胞类似产品：：SK_N_FI细胞、Ly3细胞、U2-OS细胞

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LAD 2 Cells(赠送Str鉴定报告)|人肥大细胞

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Scott细胞类似产品：：GOS3细胞、SCC 4细胞、SW1116细胞

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SJRH 30细胞类似产品：：NCI-H498细胞、GA-10(Clone 4)细胞、HVSMC细胞

OCI/AML-5细胞类似产品：：EC-GI-10细胞、253J-Bladder-V细胞、MHCC97-H细胞

MPC-11细胞类似产品：：U2OS细胞、SJSA细胞、HIT.T15细胞

Epstein-Barr-1细胞类似产品：：HIT T-15细胞、HCC1359细胞、MDCC-MSB-1细胞

HHL-5细胞类似产品：：PL 5细胞、NCI-H1963细胞、LAD2细胞

2E8细胞类似产品：：HCT 8细胞、U-87细胞、SKUT1细胞

HEK293EBNA细胞类似产品：：OACP4 C细胞、NCIH2110细胞、3AA细胞

D283 Med细胞类似产品：：253JB-V细胞、L 428细胞、BC3H1细胞

NCI H345细胞类似产品：：TOV112D细胞、Earles's cells细胞、PATU-S细胞

MOLT-16细胞类似产品：：T-cell Acute Lymphoblastic Leukemia-1细胞、HT 144细胞、NCIH1437细胞

HCC78细胞类似产品：：SK-N-SH细胞、SK-MEL2细胞、SW-837细胞

Panc08.13细胞类似产品：：PC-3M-1E8细胞、MEL-526细胞、NIH3T3-L1细胞

MPASMC细胞类似产品：：Panc_03_27细胞、H-1672细胞、T-HSC细胞

ONS76细胞类似产品：：TCam 2细胞、He-La细胞、MG63细胞

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