CAL-148 Cells(赠送Str鉴定报告)|人乳腺癌细胞

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细胞背景资料：乳腺癌；胸腔积液转移；女性

细胞形态：上皮细胞样

体内细胞培养及其操作步骤：【瘤细胞悬液接种】１)无菌选取生长良HAO(有光泽，淡红色)瘤组织或对数生长期培养瘤细胞；２)在PBS中将瘤组织剪碎后用匀浆器研磨，经８０～１００目筛网过滤成细胞悬液；３)培养细胞应用PBS洗两遍；４)计数并调整细胞浓度至１０７～１０８／ml；５)常规消毒后，于接种部位(通常为背部或腋窝腹股沟皮下)用医用注射器皮下潜行一段后注入细胞悬液(０.１ml／部位，＞１０６细胞)。初次接种成功率低，细胞数尽可能多一些；６)次日注意观察动物一般情况。初次接种一般有一段较长的潜伏期，以后随着传代潜伏期逐渐缩短，Zui后固定为一个相对稳定的时间。【腹水瘤的建立与腹水瘤的接种】将实体瘤细胞直接种于小鼠腹腔、腹壁或其他部位，引起腹水，腹水中含有瘤细胞，将这种腹水反复传代，即可成为腹水瘤。初次传代时，腹水常呈血性(含大量红细胞)，反复传代后腹水逐渐变成乳白色。腹水瘤的接种过程如下。１)将冻存或培养的腹水瘤细胞离心和洗涤，进行细胞计数；２)消毒动物，左下腹穿刺接种１０６腹水瘤细胞；３)接种腹水瘤细胞后约７~１２d，待小鼠腹部明显膨大。用碘酒棉球消毒小鼠腹部，用９号针头抽取腹水，也可行腹部解剖后，用滴管吸取。每只小鼠可抽３~５ml；４)抽取的腹水经３０００rpm离心１５min，收集上清，分装冻存备用。

细胞生长：贴壁

OVCAR.3细胞类似产品：：Vero C1008细胞、SKNEP1细胞、Madin Darby Canine Kidney细胞

SACC-LM细胞类似产品：：HIEC6细胞、HCC-1187细胞、Tu-177细胞

D-324MED细胞类似产品：：SF 539细胞、A-875细胞、OE-33细胞

UCLA SO M14细胞类似产品：：H-220细胞、CEF细胞、C2BBe 1细胞

X63.Ag8.653细胞类似产品：：NCIH211细胞、GC9811-P细胞、NCI-BL1339细胞

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细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源

[细胞产品包装]鲜活细胞：T２５培养瓶(一瓶)或冻存细胞：１ml冻存管(两支)

在细胞培养过程中会出现这样或那样的问题，客户遇到的问题从细胞生长角度来说，针对细胞培养过程中生长不HAO、甚至死亡的原因，我们做以下分析并提出相对应的解决方法。一、培养细胞生长不HAO》可能原因：细胞本身的状态》1)细胞传代次数多，细胞老化；2)细胞的接种量：接种量过低，细胞生长缓慢；3)细胞传代时间过晚：细胞中毒，影响传代后的细胞生长；4)胰酶消化时间过长或过短：时间过长，细胞死亡；时间过短，细胞未完全分离而成团，细胞死亡；5)细胞的冻存与复苏：慢冻速融。污染：1)支原体污染；2)霉菌污染；培养基或血清：1)更换血清或培养基之前未进行验证；2)选择的培养基是否合适；3)培养基配制是否准确无误；培养环境：1)CO2供应是否正常；2)培养箱或摇床温度控制是否正确；解决方法：根据以上四个方面的可能原因，做出针对性的解决方案》1)注意细胞的本身状态：如传代次数、接种量等；2)避免产生污染（用正规、合法、可溯源的血清）；3)要用合适的血清或培养基，ZuiHAO经过验证；4)注意实验室的环境；二、培养细胞死亡》可能原因：1)培养箱内无CO2；2)培养箱内温度波动太大；3)细胞冻存或复苏过程中损伤；4)培养液渗透压不正确；5)培养液中有毒代谢产物堆积；解决方法：1)检测培养箱内CO2；2)检查培养箱内温度；3)取新的保存细胞种；4)检测培养液渗透压；5)换入新鲜培养液。

细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。

Hs863T细胞类似产品：：NCIH1836细胞、LC-1细胞、RDES-1细胞

PTK-2细胞类似产品：：MHCC97L细胞、SUDHL-1细胞、Ramos (RA 1)细胞

AAV293细胞类似产品：：COS1细胞、MLE12细胞、NCIH2171细胞

Panc203细胞类似产品：：SCH细胞、HCASMC细胞、Human podocyte细胞

KBM-5细胞类似产品：：BPH-1细胞、University of Michigan-Urothelial Carcinoma-1细胞、Oregon J-111细胞

细胞来源说明：来源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名细胞库

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细胞生长特性：贴壁

SF-767细胞类似产品：：SNU251细胞、IOSE-Mar细胞、CT 26细胞

HEL-1细胞类似产品：：SCC 4细胞、Adeno-293细胞、H2052细胞

HGSMC细胞类似产品：：TE12细胞、RC92A细胞、NCI H82细胞

KNS62细胞类似产品：：LLC-MK-2细胞、AML12细胞、SKNEP-1细胞

MLE 12细胞类似产品：：MLA144细胞、MDA MB 453细胞、GM03569细胞

J-82细胞类似产品：：293EBNA细胞、MDA-175细胞、NCI-H2172细胞

为什么培养的细胞要及时传代？体外培养的细胞大多具有生长接触抑制的性，也就是说当一个细胞被其他细胞包围的时候，它就会停止生长，及时传代后，细胞的生长得以继续。培养细胞生长减慢的原因在哪些?其解决办法有哪些？可能的原因有：更换了不同的培养液或血清；培养液中一些细胞生长必需成分如谷眈肢或生长因子等耗尽或缺乏或己被破坏；培养物中有少量细菌或真菌污染；试剂保存不当；比较新培养液与原培养液成分，比较新血清与旧血清等，找出其它可能的原因。解决办法：增加起始培养细胞浓度；让细胞逐渐适应新培养液；换入新鲜配制培养液；补加谷酷肢或生长因子等；用无抗生素培养液培养，如发现污染，去弃培养物，或用抗生素除菌；血清需保存在５℃到２０℃; 培养液需在２-８℃避光保存;含血清完全培养液在２-８℃保存，并在２周内用完;分离培养物，检测支原体。冷冻管应如何解冻？取出冷冻管后，须立即放入３７℃水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在１-２分钟内大部分融化，别注意，需残留一小块冰块，就可拿到超净工作台操作细胞，用７５%酒精消毒冻存管，用新鲜培养基将细胞转移至培养瓶。另外冷冻管由液氮桶中取出解冻时，必须注意安全，预防冷冻管爆裂。

贴壁细胞的消化方法介绍：１、胰酶。这是用得Zui多的。一般浓度在０.２５-０.５%。作用时间根据细胞种类、作用温度等因素而变化很大，从几分钟到几十分钟不等。０.２５%的胰酶作用于单层贴壁的细胞，在３７度条件下，一般消化１-５分钟就足够了。终止是用血清。主要作用于细胞间。配制时不能用含、镁的平衡液，否则影响活性。保存于-２０度。２、胶原酶。这种方法比较少，一般是用原代培养时，从组织消化下细胞。这种方法作用温和，对细胞损伤较小，但是，价格也较贵。中止同样是用血清。３、EDTA。用得也是非常多。一般浓度在０.０２%左右。作用于细胞与间质，对细胞间也有一定作用。注意，它能显著影响pH值，而且在弱碱性条件下才易溶。因此，配制时应调节HAO酸碱度。它不能被终和。因此，消化下来的细胞要洗一遍。４、商品化的无酶消化液。个人的使用经常觉得对细胞的损伤比较大，但是分离成单细胞悬液的能力确实比较强。５、物理法。直接吹打或用细胞刮子将细胞刮下来。６、冷冻法。此方法仅能用于细胞传代时。无法使组织上的细胞脱落下来。本方法的原理，我想是因细胞冷冻后收缩，从而从培养瓶上脱落下来。YOU点是：对细胞损伤小，不需要中止或洗细胞，方便，不需要另外配制消化液。别适用那些贴壁不是别紧，又别娇气的细胞。不足是细胞常成小片脱落。此种方法曾用于因用其它方法传代导致大量细胞死亡操作的间充质干细胞、DC细胞的培养，效果非常满意。具体过程是：１、用较多的４度的PBS 洗涤一遍细胞(以６孔板为例，加１.５ml/孔)，２、再加０.５毫升４度的PBS，静置操作台上，很快细胞就小片脱落，３、轻轻吹打，细胞即完全脱落，４、按一定比例传代。

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Jurkat E6-1细胞类似产品：：CLL-CII细胞、Colon-26细胞、HB 611细胞

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RS4:11细胞类似产品：：PC-3/M细胞、Ramos (RA 1)细胞、COLO-394细胞

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SCC-1395细胞类似产品：：mREC细胞、HCC-1500细胞、Buffalo Rat Liver-3A细胞

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32D/cl3细胞类似产品：：H4-II-E-C3细胞、Hs746-T细胞、EM-3细胞

Douglas Foster-1细胞类似产品：：NCI-H2227细胞、APRE-19细胞、NIH:OVCAR-3细胞

NCIH1666细胞类似产品：：MDCK (NBL-2)细胞、SUDHL10细胞、Murine Lung Epithelial-12细胞

Metastatic Variant 522细胞类似产品：：ZR-75-30细胞、MV3细胞、MKN-74细胞

PVEC细胞类似产品：：L-5178-Y细胞、MDAMB453细胞、HeLaS3细胞

HCC1569细胞类似产品：：MC57细胞、UPCI-SCC-154细胞、SU86-86细胞

751-NA-15细胞类似产品：：SMA-560细胞、SW 480细胞、KYSE 70细胞

BNL.CL2细胞类似产品：：TFK-1细胞、MA-104细胞、NCIH244细胞

NCIH2591细胞类似产品：：KS-SLK细胞、Mouse Colon 38细胞、Meat Animal Research Center-145细胞

A-431细胞类似产品：：RL95-2细胞、Raji细胞、SKBR-3细胞

CL11细胞类似产品：：HuH6细胞、P3-X63.Ag8.653细胞、HL7702细胞

A1847细胞类似产品：：NCI-H345细胞、NCI-H647细胞、P-2003细胞

SUM159PT细胞类似产品：：DMS153细胞、LS174T细胞、118MG细胞

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