1640培养基的配置方法

2019/12/29 11:57:45

概述

RPMI是Roswell Park Memorial Institute的缩写,代指洛斯维·帕克纪念研究所。 RPMI是该研究所研发的一类细胞培养基,1640是培养基代号。RPMI-1640培养基最初是为淋巴细胞培养专门设计的,现在已广泛应用于各种正常细胞核癌细胞的培养,尤其是悬浮细胞的培养,是使用最为广泛的培养基之一。其含有多类细胞培养所需的氨基酸、维生素、无机盐等多种成分,但不含蛋白质、脂类或者任何生长因子需搭配血清和无血清添加物使用。

成分说明

配置方法

干粉培养基的过滤配制

1 将 1 升量的干粉在 950ml 细胞培养级纯净水中完全溶解

2 加入 2 克碳酸氢钠,继续搅拌至完全溶解

3 用 1N 盐酸或 1N 氢氧化钠调整到要求的 pH,并将溶液体积调至1000ml

4 在超净台内用 0.22um 滤膜负压过滤

5 将培养基在 2~8℃避光保存

高压灭菌型的配制

1 将 1 升的高压灭菌型干粉在 900ml 细胞培养级纯净水中完全溶解

2 将溶液 pH 调至 4.0 并将溶液体积调至 960ml

3 在 121℃,15psi 高压消毒 5 分钟

4 将培养基迅速取出,避免过久加热引起成份分解或液体蒸发减少

5 待培养基冷却至室温后,无菌操作加入 29.3ml 的无菌 7.5%碳酸

氢钠溶液,及 10ml 的无菌 200mM L-谷氨酰胺

6 如有必要,用无菌的 1N 盐酸或 1N 氢氧化钠调整 pH

7 将培养基在 2~8℃避光保存

自备材料  

细胞培养级或注射级纯水  

7.5%碳酸氢钠溶液(无菌)  

200mM 谷氨酰胺溶液(无菌)  

1 N 盐酸溶液(无菌)  

1 N 氢氧化钠溶液(无菌)

质检指标  

形状:淡黄色均匀粉末(干粉),澄清透明(液体)  

溶解:干粉按要求溶解后澄清透明  

pH 值:(加碳酸氢钠前)4.4-5.0(加碳酸氢钠后)(液体)7.4-8.0  

渗透压:(加碳酸氢钠前)230-270(加碳酸氢钠后)280-320 (液体)  

菌落:每克小于 100cfu (干粉),无菌(液体)  

细胞生长:正常(干粉及液体)

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