概述[1]
醋酸阿托西班注射液是由FerringGmbH研制的一种新的抗早产药，为欧洲医学会推荐的一线用药，是一种催产素类似物，是子宫内及脱膜、胎膜上催产素受体的竞争性拮抗剂，可剂直接与催产素竞争催产素受体，抑制催产素和催产素受体结合，从而直接抑制催产素作用于子宫，抑制子宫收缩，也可以抑制磷脂酰肌醇的水解作用，阻断第二信使的生成以及Ca2+的活动，从而间接抑制子宫对催产素的反应，使子宫收缩得到抑制，推迟不足月分娩，达到保胎的目的，在临床上用于治疗早产。
醋酸阿托西班是由9个氨基酸组成的二硫键型的环状多肽，是1，2，4和8位修饰的缩宫素分子，肽的N端为3-巯基丙酸(巯基与[Cys]6的巯基形成二硫键)，C端为酰胺的形式，N端第二氨基酸是乙基化修饰的[D-Tyr(Et)]2，醋酸阿托西班在药品中以醋酸盐的形式存在，通用名为醋酸阿托西班，肽序如下：
Mpa-D-Tyr(Et)-IIe-Thr-Asn-Cys-Pro-Orn-Gly-NH2XCH3COOH。
应用[3]
醋酸阿托西班为环九肽，是一种催产素类似物，是子宫内及蜕膜、胎膜上催产素受体的竞争性拮抗剂，可剂量依赖的抑制宫缩，推迟不足月分娩，达到保胎的目的，在临床上用于治疗早产。
制备[2]
1.树脂制备
制备Fmoc-Orn(Boc)-2-氯-三苯甲基树脂：将2-氯-三苯甲基氯树脂(5g，取代值0.84mmol/g树脂，1eq)加入多肽合成器，用60mL DCM洗涤树脂。抽干溶剂，加入Fmoc-Orn(Boc)-OH(1.3eq)和DIEA(2.5eq)的30mL DCM溶液。氩气保护机械搅拌该混合物1小时。加入色谱甲醇10mL(2ml/g树脂)对树脂上的活性部分进行30分钟封闭。抽干溶剂，用3×50mL DMF、3×50mL DCM、3×50mL MeOH洗涤，真空干燥至恒重，获得6.29g Fmoc-Orn(Boc)-2-氯-三苯甲基树脂。利用紫外分光光度法测量哌啶脱保护液中Fmoc量，树脂的荷载量为0.62mmol/g。
2.片段制备
肽片段AA(1-8)-OH(已环化)的制备：
向肽反应室中加入5g Fmoc-Orn(Boc)-2-氯-三苯甲基树脂。加入60mL DCM搅拌溶胀树脂，抽干。用2×50mL 20％哌啶/DMF溶液分别5，15分钟处理树脂，去除Fmoc。用50mL DMF冼涤所述树脂4次，去除Fmoc副产物(二苯并富烯和其哌啶加合物)和残余哌啶，茚三酮试验测定。
同时活化序列中的后续氨基酸Fmoc-Pro-OH，以在其羧基末端反应。将Fmoc-保护的氨基酸(2eq)、HOBt(2eq)和DIEA(4eq)在室温下溶解于25mL DMF中。氩气保护下把该溶液冰浴冷却至0℃，然后加入HBTU(2eq)，搅拌5分钟溶解。将活化的氨基酸溶液加入到抽干的树脂中，用5mL DCM洗涤。机械搅拌所述反应物1小时。用定性茚三酮试验监测缩合完成情况。在判定所述缩合反应完成后，则抽干树脂，用3×50mL DMF洗涤树脂。
依次用Fmoc-保护的氨基酸Cys(Trt)、Asn(Trt)、Thr(tBu)、Ile、D-Tyr(Et)、Mpa(Trt)各2eq，对所述肽片段后续单体重复该操作过程。在最后一个偶合反应后，加入6当量的I2/DMF，反应2小时，抽干，反复使用DMF洗涤，抽干树脂床，用3×50mL DMF、3×50mL DCM、3×50mL MeOH洗涤，真空干燥至恒重，获得8.67g树脂结合肽。
用100mL l％TFA/DCM处理约1小时，然后用2×50mL 0.5％TFA/DCM各洗涤5分钟，从树脂裂解所述肽。将裂解部分收集到吡啶(与TFA体积比1:1)上。合并裂解洗涤液，真空下浓缩至约10mL体积，然后用10mL DMF重构，同时继续浓缩以去除残余DCM至终体积约10mL。加入100mL水沉淀产物。室温下搅拌该淤浆30分钟。真空过滤收集所述固体，用约100mL水洗涤。再加入20mM维生素C水溶液去除未反应I2。真空干燥所述产物，获得3.76g纯度97％AA(1-8)-OH(已环化)，产率94％。
分子式：C65H97N9O14S2，分子量：1291.67
3.片段缩合过程
通过液相缩合片段制备AA(1-9)-NH2(已环化)
圆底烧瓶中加入775mg AA(1-8)-OH(已环化)(0.6mmol)、330mgH-Gly-NH2·HCl(3mmol)和81mg HOBt(0.6mmol)。将所述固体溶解于20mL DMF，加入695μL DIEA(4.2mmol)，然后在氩气保护下冷却至0℃。向冷却的溶液中加入227mgHBTU(0.6mmol)。在0℃搅拌反应混合物1小时，然后升至室温，再搅拌1小时。加入60mL水从所述溶液中沉淀肽。真空过滤收集固体，用2×50mL水洗涤，干燥获得761mg粗品AA(1-9)-NH2(已环化)。在室温下用100mL MTBE研磨所述固体3小时，真空过滤收集，干燥获得801mg AA(1-9)-NH2(已环化)，收率99％。
反应过程TLC控制，TLC条件：氯仿/甲醇/TFE＝80:6:6；UV，碘检测；
AA(1-8)-OH(已环化)，Rf：0.41；
AA(1-9)-NH2(已环化)，Rf：0.30。
分子式：C67H101N11O14S2，分子量：1347.70。
4.醋酸阿托西班的裂解及纯化
4.1通过去除侧链保护AA(1-9)-NH2(已环化)制备醋酸阿托西班粗肽
圆底烧瓶中加入三氟乙酸/水/三异丙基硅烷/1,2-乙二硫醇(92.5:2.5:2.5:2.5)溶液50mL，并冷却至0℃。向该冷却溶液中加入800mg AA(1-9)-NH2(已环化)。在0℃搅拌所述淤浆直到所述固体溶解(约5分钟)，然后升至室温，搅拌3小时。将该溶液加入0℃乙醚70mL沉淀所述肽。以3000rpm离心旋转淤浆5分钟，从所述固体倾析乙醚。将所述固体再悬浮于50mL乙醚中，以3000rpm离心旋转5分钟，倾析乙醚。重复该过程一次，然后将固体溶解于含有1％乙酸的1:1水/乙腈30mL中，在室温下保存24小时。将该溶液冷冻，然后冷冻干燥获得578mg醋酸阿托西班粗肽，产率98％。
4.2HPLC纯化醋酸阿托西班粗肽
45mg醋酸阿托西班粗肽经制备型HPLC纯化产生全长醋酸阿托西班纯品20.3mg，产率45％。
HPLC纯化条件：色谱柱：Waters C18250×19,5u,130A；流速：8mL/min；检测：UV，220nm；流动相：A.80％乙腈/水；B.0.25％醋酸/水；方法：20％-45％A，10min；45-55％A，30min。
主要参考资料
[1] 王丹. . 醋酸阿托西班治疗先兆早产临床疗效分析. 中国妇幼保健, v.33(18), 4104-4108.
[2] 陈静仪, 张秀群, & 钟美雄. . 醋酸阿托西班治疗先兆早产的临床疗效分析. 中国现代药物应用(17).
[3] 王亚凡, 刘晓旭, 梁建梅, 董欣, 杜娟, & 秦丽欣, et al. . 醋酸阿托西班治疗晚期流产及早产的疗效观察. 国际妇产科学杂志(1), 49-50,共2页.