概述[1]
在进行动物细胞蛋白质提取过程中，有些蛋白质比较难溶解，因此比较难以提取，需要变性裂解液进行提取，其适于不溶性细胞骨 架、膜蛋白、高度疏水蛋白，或者集聚并形成沉淀的蛋白，或者体外翻译产生的蛋白。适用于SDS-PAGE、等电点聚焦和2-D 电泳。
保存条件[1]
常温下运输，收到后将溶液A，溶液B放在-20°C环境中保存，保质期两年。
操作步骤[1]
培养细胞裂解
贴壁细胞，去除培养液，用 PBS洗一遍。悬浮细胞，离心收集，PBS洗一遍。通常每107个细胞或100 mm培养板或150 cm2 培养瓶，可加1 mL溶液A和10 μL溶液B。裂解液和细胞应充分接触。 冰上放置5-10 min，为促进细胞裂解,可用枪头轻轻吹打；轻轻倾斜培养皿使裂解产物流向瓶皿的一边或一角，然后将之 转移到1.5 mL离心管。在冰上放置5 min，期间剧烈震荡3-4次，每次30 sec。 12000 rpm（12830g）， 4°C离心5 min，取上清，即可进行后续的电泳、Western或免疫沉淀操作。
组织块裂解
组织剪切成细小的碎片。每100毫克组织加入1 mL溶液A和10 μL溶液B。置玻璃匀浆器冰上均质30～50次，或超声破碎 细胞，每次30 sec，3～4次，每次间隔1 min，置于冰上冷却。均质或超声破碎细胞后应镜检，细胞破碎率不小于90%, 同时组织已经完全裂解，没有明显的小组织块。 将匀浆物转移到1.5 mL离心管，在冰上放置10 min，期间剧烈震荡3-4次。 12000 rpm，4℃离心5 min，取上清，即可进行后续的电泳、Western 或免疫沉淀操作。
已经提取的细胞骨架膜蛋白,膜蛋白或高度疏水蛋白，或者集聚并形成沉淀的蛋白的溶解
将1-5 mg 的相关蛋白质样品加入1mL的溶液A，10 μL溶液B 混合，静置30 min，涡旋震荡1 min，离心后取上清。
使用注意事项[1]
1. 溶液A若有沉淀析出，可置于30°C水浴中保温10 min，并震荡混匀，待沉淀完全溶解，冷却至室温后，即可使用。
2. 裂解液中蛋白样品含有影响因子，不能用Bradford法和BCA法，但可用改良型Lowry法（C504041）或非干扰型蛋白定 量试剂盒（C503071）测定蛋白浓度。
3. 在细胞裂解时，如果在进行步骤4前裂解液比较粘，可以先匀浆或超声以剪断基因组，再离心取上清。
主要参考文献
[1] 王义强 谭晓风 陈介南 周小慧 孙吉康；银杏雌树成熟叶cDNA文库的构建。《中南林业科技大学学报：自然科学版》2009年 第1期。