背景[1-3]
ATH III抗凝血酶3抗体是可以特异性结合ATH III抗凝血酶3的一类多克隆IgG。ATH III抗凝血酶3基因编码的蛋白质是血浆蛋白酶抑制剂，是丝氨酸蛋白酶抑制剂（serpin）超家族的成员。ATH III抗凝血酶3蛋白抑制凝血酶以及凝血系统的其他活化的丝氨酸蛋白酶，并调节血液凝血级联反应。该蛋白包括两个功能域：成熟蛋白N端的肝素结合域和C端的反应位域。肝素的存在增强了抑制活性。
已经为该基因鉴定出120多种突变，其中许多已知会引起抗凝血酶III缺乏症。ATH III抗凝血酶3是血浆中最重要的丝氨酸蛋白酶抑制剂，可调节凝血级联反应。AT-III抑制凝血酶，matriptase-3/TMPRSS7以及因子IXa，Xa和XIa。在肝素的存在下其抑制活性大大增强。ATH III抗凝血酶3抗体可以用于人抗凝血酶3（AT-III)抗体酶联免疫分析应用双抗原夹心法测定标本中人抗凝血酶3（AT-III)抗体水平。用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被单抗的微孔中依次加入抗凝血酶3（AT-III)抗体，再与HRP标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的抗凝血酶3（AT-III)抗体呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人抗凝血酶3（AT-III)抗体浓度。
应用[4][5]
用于转人AT-Ⅲ的骨髓间充质干细胞抗异种移植凝血紊乱的研究
随着α-1,3-半乳糖转移酶(α-1,3-galactosyltransferase,α-1,3GT)基因敲除猪(GTKO)的问世,异种超急性排斥反应(hyperacute rejection,HAR)已得到基本控制,但随后发生的急性体液排斥反应(Acute humoral xenograft rejection,AHXR)仍是造成异种移植物失活和受体死亡的主要原因。AHXR是一个多因素多途径的免疫反应过程,其主要的病理特征是血栓性微血管病或消耗性凝血病如弥漫性血管内凝血(Disseminated Intravascular Coagulation,DIC)。目前研究表明供受体的凝血-抗凝血系统不相容所引发的受体凝血功能紊乱是造成异种移植凝血功能障碍发生的重要原因。抗凝血酶-3(Antithrombin-III,AT-III)在猪与灵长类动物之间由于存在种属差异,不能在人体内发挥有效抗凝作用,致使移植器官血管内广泛产生血栓,最终导致移植失败。
AT-III是血浆中最重要的抗凝物,其由肝脏及血管内皮细胞产生,在肝素的协同作用下与FXa和凝血酶结合发挥抗凝血作用。本研究拟以猪骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenehymal stem cells,MSCs)为载体,利用慢病毒感染的方法,使猪MSCs表达人AT-III,并利用体外异种移植凝血模型对其抗凝效果进行检测,希望为解决异种肝移植术后受体凝血功能紊乱提供新方案和新思路。利用慢病毒感染技术,将人抗凝血酶III(AT-III)的基因转入GTKO猪源性的骨髓间充质干细胞中,使其表达并分泌人源性抗凝血酶III,从而减少异种移植中因供受体间凝血调节因子不相容引起的凝血紊乱。
参考文献
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[3]Mesenchymal stem cell–conditioned medium reduces liver injury and enhances regeneration in reduced-size rat liver transplantation[J].Zhiyong Du,Cuifeng Wei,Kun Cheng,Baosan Han,Jiqi Yan,Mingjun Zhang,Chenghong Peng,Yingbin Liu.Journal of Surgical Research.2013(2)
[4]Do mesenchymal stem cells function across species barriers?Relevance for xenotransplantation[J].Jiang Li,Mohamed B.Ezzelarab,David K.C.Cooper.Xenotransplantation.2012(5)
[5]王璟.转人AT-Ⅲ的骨髓间充质干细胞抗异种移植凝血紊乱的研究[D].第四军医大学,2015.