背景[1-3]
BCA蛋白质定量试剂盒是用于蛋白质定量快速鉴定试剂盒。BCA（Bicinchoninic Acid）蛋白浓度检测法是目前常用的蛋白质定量方法之一。BCA测定方法的原理与Lowry法相似，利用Cu2+在碱性条件下，可以被蛋白质还原成Cu+，Cu+与BCA试剂结合形成紫色的络合物的特性，通过测定样品在562 nm波长下的吸光值，并同蛋白标准曲线对比，即可计算出待测样品的蛋白浓度。
蛋白测定是在生命科学研究中最广泛应用的方法之一。在蛋白提纯，电泳，免疫分析，细胞生物，分子生物和其他研究应用时评估蛋白浓度是必需的。虽然目前有各种不同的蛋白测定方法，但仍然还没有一种测定方法被认为是广泛适合于所有的应用要求。每种方法都有它的优点和限制。
BCA法与Lowry法相比，操作更为简便，稳定性更好。该方法还具有反应产物稳定、灵敏度高、线性范围广、对不同种类蛋白质检测的变异系数小、对去垢剂耐受性好等特点，特别适合于微量测定。二价铜离子在碱性的条件下，可以被蛋白质还原成一价铜离子，一价铜离子和独特的BCA Solution A（含有BCA）相互作用产生敏感的颜色反应。两分子的BCA螯合一个铜离子，形成紫色的反应复合物。该水溶性的复合物在562nm处显示强烈的吸光性，吸光度和蛋白浓度在广泛范围内有良好的线性关系，因此根据吸光值可以推算出蛋白浓度。
应用[4][5]
用于蛋白质检测与相互作用的毛细管电泳新方法研究
高灵敏蛋白质检测方法及相互作用研究对疾病的诊治具有重要意义,同时也是蛋白质组学得以迅速发展的巨大动力。近年来,针对功能蛋白的高灵敏度分析检测新方法研究,一直是生命科学研究中蛋白质分析领域的研究热点。将具有高效分离能力的CE方法和BCA法结合起来,建立了一种间接检测蛋白质的新方法。以β-环糊精为包合添加剂,有效地实现了BCA-Cu+复合物和过量游离BCA分子的分离,通过微波辅助反应达到BCA-Cu+快速、完全显色的目的,实现了在低波长处对转铁蛋白、蓖麻毒素等功能蛋白的快速、高灵敏度检测的目的。
本方法亦成功应用于届蓖麻毒素国际实验室间比对测试(2009年)蓖麻毒素蛋白样品的检测中。所测定的样品中蓖麻毒素的含量结果与真值相比,偏差介于0.40-6.8%之间,说明了我们在CE中以BCA-Cu+复合物浓度的定量间接指代蛋白质定量之思路的正确性。
参考文献
[1]Single domain antibody templated nanoparticle resistors for sensing[J].Joseph M.Slocik,Sang Nyon Kim,Tyler Auvil,Ellen R.Goldman,Jinny Liu,Rajesh R.Naik.Biosensors and Bioelectronics.2010(8)
[2]Agarose Gel Electrophoresis-Applications in Clinical Chemistry[J].Jean-Francois Giot.Journal of Medical Biochemistry.2010(1)
[3]Electrophoretic and electrochromatographic separation of proteins in capillaries:An update covering 2007–2009[J].ZiadEl Rassi.ELECTROPHORESIS.2009(1)
[4]Affinity CE Determination of the Binding Constant of Bioactive Sulfated Polysaccharide 916 to Human Serum Albumin[J].Zhi Yang,Zhi-Hua Lv,Ting-Fu Jiang,Yuan-Hong Wang.Chromatographia.2009(3-4)
[5]孟庆威.蛋白质检测与相互作用的毛细管电泳新方法研究[D].中国人民解放军军事医学科学院,2010.