背景[1-3]
B淋巴细胞粘附分子CD22抗体是一类可以特异性结合B淋巴细胞粘附分子CD22的单克隆抗体，主要用于检测B淋巴细胞粘附分子CD22的免疫组化、ELISA等实验。B淋巴细胞粘附分子CD22可以与CD45RO、CD75结合,B细胞粘附到M、红细胞,介导B-B、B-T细胞相互作用。CD22维持基线水平的B细胞抑制以保持体液免疫检查。作为一个B细胞限制抗原，CD22针对治疗引起自身免疫性疾病和恶性血液疾病的失调B细胞。人CD22的晶体结构在2.1A分辨率，作为唾液酸结合免疫球蛋白型凝集素中一种独特识别模式，α2-6唾液酸配体的特异性是由预先形成的β发夹支配的。
B淋巴细胞粘附分子CD22是主要在成熟B淋巴细胞表达的I型跨膜蛋白,在B细胞信号传导中起重要作用。β发夹：β-hairpin;beta hairpin，蛋白质立体结构中的一种最简单的模体，由β转角旁侧的两段反向平行的β折叠链通过氢键排列而成。N-连接糖基化:N-linked glycosylation,是一种新生肽链的共翻译或翻译后修饰方式。
CD22是B细胞受体(BCR)的抑制共受体,在细胞调节抗原受体信号应答的过程中必不可少。CD22只选择性表达于正常和恶性的成熟B淋巴细胞系,可以在85%以上的B细胞非霍奇金淋巴瘤中检测到;表达于成熟和恶性B细胞膜上的CD22与天然配体和抗体结合后迅速内化;而且CD22在所有恶性细胞上的表达稳定,不随胞外环境不同而发生改变。这些优势使CD22成为治疗NHL及自身免疫疾病的良好靶点。针对CD22的靶向治疗研究主要集中在对抗CD22单克隆抗体及其衍生药物的开发上,其中Epratuzumab就是目前广泛用于临床试验的抗CD22单克隆抗体之一。
应用[4][5]
用于小鼠抗人CD22单克隆抗体HIB22的生物学功能研究及其单链抗体的构建
针对CD22的靶向治疗研究主要集中在对抗CD22单克隆抗体及其衍生药物的开发上,其中Epratuzumab就是目前广泛用于临床试验的抗CD22单克隆抗体之一。HIB22为中国医学科学院血液学研究所免疫室生产的鼠抗人CD22单克隆抗体,与Epratuzumab单抗识别位点不同。由于CD22可以通过配体依赖性与非依赖性机制调节B细胞作用,因此使用不同的单克隆抗体可以产生一系列临床疗效。
用流式细胞术、MTT检测、RT-PCR、共聚焦显微镜等方法对HIB22单抗做了如下体外生物学功能研究:HIB22单抗对NHL细胞系Raji、Daudi增殖及凋亡的影响;HIB单抗对PWM刺激后的正常人PBMC集落生长及CD25表达的影响;HIB22与CD22抗原结合后内化的观察。
利用小鼠杂交瘤细胞制备抗CD22单链抗体,流程如下:RT-PCR方法从HIB22杂交瘤中分别提取抗体轻、重链可变区基因;Overlap-PCR构建HIB22-scFv融合基因并定向克隆入原核表达载体pET22b(+),构建重组质粒pET22b-HIB22-scFv;将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)~9后IPTG诱导表达HIB22-scFv;可溶性表达产物经镍柱纯化后,通过流式细胞术检测与CD22~+的Raji细胞系细胞膜CD22分子的结合活性及特异性。
参考文献
[1]Targeting CD22 Reprograms B-Cells and Reverses Autoimmune Diabetes[J].Fiorina,Paolo,Vergani,Andrea,Dada,Shirine,Jurewicz,Mollie,Wong,Masie,Law,Kenneth,Wu,Erxi,Tian,Ze,Abdi,Reza,Guleria,Indira,Rodig,Scott,Dunussi-Joannopoulos,Kyri,Bluestone,Jeffrey,Sayegh,Mohamed H.Diabetes.2008(11)
[2]Down-modulation of B cell signal transduction by ligation of mucins to CD22[J].Munetoyo Toda,Kaoru Akita,Mizue Inoue,Shigeru Taketani,Hiroshi Nakada.Biochemical and Biophysical Research Communications.2008(1)
[3]CD22:an inhibitory enigma[J].Jennifer A.Walker,Kenneth G.C.Smith.Immunology.2008(3)
[4]Synthetic glycan ligand excludes CD22 from antigen receptor-containing lipid rafts[J].Jie Yu,Toshihiko Sawada,Takahiro Adachi,Xiaoming Gao,Hiromu Takematsu,Yasunori Kozutsumi,Hideharu Ishida,Makoto Kiso,Takeshi Tsubata.Biochemical and Biophysical Research Communications.2007(4)
[5]沈智聪.小鼠抗人CD22单克隆抗体HIB22的生物学功能研究及其单链抗体的构建[D].中国协和医科大学,2009.