高效感受态细胞制备试剂盒的应用

2020/7/14 9:30:43

背景[1-3]

高效感受态细胞制备试剂盒是一种用于快速制备高转化效率大肠杆菌感受态细菌的试剂盒。超级感受态细菌制备试剂盒是在传统超级感受态细菌制备方法的基础上进行适当改良而成,操作便捷,转化效率高。使用本试剂盒可以使感受态效率达到108-109cfu/μg质粒。对于小的质粒效率略高,而对于大的质粒则效率略低一些。用高效感受态细胞制备试剂盒制备的超级感受态细菌不仅可以转化质粒,而且非常适合于转化普通的连接产物,特别适合于转化平端连接等需要高转化效率的情况。使用高效感受态细胞制备试剂盒操作简单,细菌培养好后仅需60分钟左右即可完成超级感受态细菌的制备。

高效感受态细胞制备试剂盒适用于绝大部分常见的大肠杆菌,包括DH5α、JM109、TG1、HB101和XL-1等。对于一些用于蛋白表达或病毒质粒构建的特殊大肠杆菌也适用,制备出来的感受态菌转化质粒肯定没有问题,但如果转化连接产物有时效果不如DH5α等其它常见的细菌。高效感受态细胞制备试剂盒提供了专门用于制备超级感受态的特殊细菌培养液,可以提高制备出来的感受态菌的转化效率,同时也方便了用户,不必自行配制相应的培养液。高效感受态细胞制备试剂盒可以分多次使用,共可以制备足够进行100次转化的感受态细菌。

应用[4][5]

用于α-淀粉酶基因的克隆与体外诱变研究

研究结果为高酶活α-淀粉酶产生菌的筛选奠定了基础,有利于深入开展α-淀粉酶基因结构和功能关系的研究,并为基因的体外诱变找到了一条新的途经。1.快速鉴定并筛选α-淀粉酶及其产生菌的新方法:锥虫蓝染料和淀粉由于静电非特异性吸附结合后使淀粉呈稳定的蓝色,当淀粉被淀粉酶水解后因分子变小吸附力减弱,而让锥虫蓝游离出来,游离的锥虫蓝被周围未水解的淀粉吸附而使颜色加深,淀粉水解区则形成无色、透明的水解圈。本研究将含锥虫蓝的培养基命名为LBSP。比较研究结果表明鉴定培养基的适宜条件是:锥虫蓝的使用浓度是0.005%-0.01%(w/v),培养基的用量为15ml/皿左右,并可以采用0.1MPa高压蒸汽灭菌。

与传统的碘-淀粉法相比,本法不但操作简便,具有相同的灵敏度和使用范围,而且对淀粉酶及其产生菌没有任何不良影响。2.高效感受态细胞的制备:高效感受态细胞的制备是分子生物学的关键技术之一,是DNA转化的基础。已知影响感受态细胞制备的因素很多,本研究从感受态细胞制备的影响因素和转化过程对转化效率的影响因素两个方面进行了研究。结果表明:在感受态细胞制备过程中高浓度的二价金属离子(Mn2+、Mg2+)对感受态细胞制备有害;不同的培养基对感受态细胞制备也有不同的影响;影响的是培养基的起始pH、培养时间和所用的器材的清洁度。

参考文献

[1]Application of differential display RT-PCR to the analysis of gene expression in a plant-fungus interaction[J].Ernesto P.Benito,Theo Prins,Jan A.L.Kan.Plant Molecular Biology.1996(5)

[2]Heterospecific transformation in the genus Haemophilus[J].W.L.Albritton,J.K.Setlow,M.Thomas,F.Sottnek,A.G.Steigerwalt.MGG Molecular&General Genetics.1984(2)

[3]High frequency transformation of Bacillus subtilis protoplasts by plasmid DNA[J].Shing Chang,Stanley N.Cohen.MGG Molecular&General Genetics.1979(1)

[4]Interspecific transformation of rifampicin resistance in the genus Bacillus[J].N.Harford,M.Mergeay.MGG Molecular&General Genetics.1973(2)

[5]马向东.α-淀粉酶基因的克隆与体外诱变[D].华中农业大学,2001.

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