背景[1-3]
人游离前列腺特异性抗原(FPSA)ELISA KIT采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品活性。
人游离前操作步骤：
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3.样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
结果判断
绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。
应用[4][5]
人游离前列腺特异性抗原(FPSA)ELISA KIT用于PSA的相关变数在PSA灰区患者中前列腺癌诊断的研究。
游离前列腺特异性抗原与总前列腺特异性抗原比值(free prostate specific antigen/total prostate specific antigen ratio F/TPSA)、前列腺特异性抗原密度(prostate specific antigen density PSAD)在总前列腺特异性抗原(total prostate specific antigen TPSA)处于4~10ng/ml时对前列腺癌(prostate cancer PCa)患者的诊断应用价值。采用酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay ELISA)方法分别进行总前列腺特异性抗原(total prostate specific antigen TPSA)、游离前列腺特异性抗原(free prostate specific antigen FPSA)的检测并计算出F/TPSA的比值,所有患者均做B超检查,测得前列腺前后径、左右经、上下径,再做经直肠超声下前列腺穿刺活检术检查或行手术治疗并送病检。采用独立检验及受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve简称ROC曲线)评估当血清TPSA处于4~10ng/ml时,F/TPSA、PSAD对前列腺癌患者诊断意义。结果:1.F/TPSA比值在BPH组明显高于PCa组(P<0.05),而PSAD低于前列腺癌组(P<0.05)。2.F/TPSA、PSAD的ROC曲线下方面积比较,由大到小顺序为PSAD>F/TPSA。F/TPSA取值为0.16时,其诊断PCa的敏感性为52.90%,特异性为94.40%;PSAD取值为0.17时,其诊断PCa的敏感性为64.70%,特异性为84.70%。结论:1、当TPSA处于4~10ng/ml时,F/TPSA、PSAD均可协助前列腺特异性抗原提高对PCa的临床诊断准确性。PSAD对PCa的诊断效果好于F/TPSA,可以作为临床上诊断PCa的一个重要指标。2、本研究提示F/TPSA的较好界值点为0.16,PSAD的较好界值点为0.17。
参考文献
[1]ProstatecancerIncidenceandMortalitytrendsin37europeancountries:Anoverview.BrayF,Lortet-TieulentJ,FerlayJ,FormanD,AuvinenA.Europeanjournalofcancer.2010
[2]Measurementofprostate-specificantigeninserumasascreeningtestforprostatecancel.CataloneWJ,SmithDS,RatliffTL.Netherlands Journal of Medicine.1991
[3]Usefulness and predictive value of PSA density,adjust by transition zone volume,in men with PSA levels between 2and 4 ng/ml.Janane A,Hajji F,lsmail T,Jawad C,Elondo JC,Dakka Y,et al.Actas Urologicas Espanolas.2012
[4]Epidemiologyofprostatecancerandreatmentremarks.StefanoArcangeli,ValentinaPinzi,GiorgioArcangeli.WorldJRadiol.2012
[5]孙金涛.PSA的相关变数在PSA灰区患者中前列腺癌诊断的研究[D].青海大学,2015.