背景[1-3]
免疫球蛋白结合蛋白-1抗体是可以特异性结合免疫球蛋白结合蛋白-1的一类多克隆抗体，主要用于检测免疫球蛋白结合蛋白-1的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多种免疫学实验。
检测原理：双抗体夹心法测定标本中免疫球蛋白结合蛋白-1水平。用纯化的免疫球蛋白结合蛋白-1抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入免疫球蛋白结合蛋白-1，再与HRP标记的免疫球蛋白结合蛋白-1抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的免疫球蛋白结合蛋白-1呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中免疫球蛋白结合蛋白-1浓度。
免疫球蛋白结合蛋白是可以和免疫球蛋白结合的各种蛋白质的总称。包括细菌产生的可与IgG结合的蛋白质A和G，能与IgA结合的波罗蜜凝集素以及免疫球蛋白结合蛋白1(CD79a-结合蛋白1，B细胞信号转导分子α4)等。
应用[4][5]
用于新型免疫球蛋白结合分子AL插入突变体的体外分子进化研究
免疫球蛋白结合蛋白(Immunoglobulin(Ig)-binding proteins,IBPs)是细菌产生的能够与抗体结合的一类蛋白,在发病中发挥着重要的作用。其中最重要的三种代表分子为金黄色葡萄球菌蛋白A(Staphylococcal protein A,SpA),链球菌蛋白G(Streptococcal protein G,SpG)和部分大消化链球菌表面蛋白L(Peptostreptococcus magnus protein L,PpL)。IBPs由多个高度同源的结合结构域头尾相连构成,每个结构域构成了与抗体结合的基本单位,保留了全部结合活性。
应用噬菌体展示体外亲和筛选的进化方法获得了由SpA A结构域和PpL B3结构域串联而成的非天然存在的新型抗体结合分子AL(Novel evolved Ig-binding molecules AL,NEIBMAL,以下简称为AL),AL能够与人和哺乳动物的各类抗体Fab段的VH3重链和κ轻链同时结合,形成新的抗体结合模式。AL中,SpA A结构域与VH3结合活性远远低于PpL B3与κ轻链结合的活性。对AL的SpA中A结构域螺旋Ⅱ上的第27位和第34位氨基酸同时进行分子进化研究获得与人IgG和人IgM抗体结合活性明显增强的AL(VV)分子。
方法：1.构建AL和AL(VV)插入突变体噬菌体展示文库：应用PCR定点突变技术依次在AL中A结构域的螺旋Ⅱ和螺旋Ⅲ之间,即第38和第39位氨基酸之间插入3、5、7、9个氨基酸(amino acids,aa)大小的随机多肽构建多个AL插入突变体展示文库(库A3、库A5、库A7和库A9)；在AL(VV)中的A结构域的相同位置插入3个氨基酸大小的随机多肽,构建AL(VV)插入突变体噬菌体展示文库(库V3)。
2.插入突变体噬菌体展示文库的体外进化亲和筛选：以人IgM为诱饵分子,通过重复的“吸附-洗脱-扩增”的过程,对库A3、库A5、库A7和库V3进行多轮筛选,PCR鉴定每代筛选过程中含插入片段的噬菌体与空载体的噬菌体比例的变化情况,当空载体完全消失后即达到进化完全；制备筛选后文库的单克隆噬菌体,应用噬菌体ELISA筛选IgM结合活性提高的单克隆噬菌体,并对高结合活性的噬菌体进行序列测定。
参考文献
[1]In vitro molecular evolution of AL NEIBMs improved immunoglobulin(Ig)binding and antibody detection[J].Ting He,Ying-Ying Ding,Jiao-Jiao Feng,Qiu-Li Chen,Huai-Min Zhu,Heng Peng,Bing Rui,Xiang-Yu Li,Ming-Mei Cao,Wei Pan.Journal of Biotechnology.2014
[2]Role of G Protein-Coupled Receptors in Control of Dendritic Cell Migration[J].Yuan Liu,Guixiu Shi,Mina Hur.BioMed Research International.2014
[3]Remarkable alkaline stability of an engineered protein A as immunoglobulin affinity ligand:C domain having only one amino acid substitution[J].Kazunobu Minakuchi,Dai Murata,Yuji Okubo,Yoshiyuki Nakano,Shinichi Yoshida.Protein Science.2013(9)
[4]Characterization of the optimized C2 domain of protein G:finding its additional chicken IgY-binding ability[J].Yongsheng Cao,Di Li,Chong Cao,Mingchun Gao,Runxiang Zhang,Bo Ma,Junwei Wang.Biotechnology Letters.2013(9)
[5]冯娇娇.新型免疫球蛋白结合分子AL插入突变体的体外分子进化研究[D].第二军医大学,2015.