背景[1-3]
细胞增殖检测是判定细胞活力的重要指标，有多种显示方法，除实验的细胞计数法之外，还可以进行细胞分裂指数的测定。细胞分裂是细胞增殖的方式，能比较确切地反映细胞增殖度。细胞增殖是指细胞在周期调控因子的作用下通过DNA复制、RNA转录和蛋白质合成等复杂反应而进行分裂的一系列过程。细胞增殖检测技术广泛应用于分子生物学、遗传学、肿瘤生物学、免疫学、药理和药代动力学等研究领域。
检测细胞增殖的技术主要包括：
(1)渗透实验。这种方法用来染细胞膜破损的细胞,活细胞不会被台盼蓝染成蓝色。然后通过细胞计数器手动计数细胞数目。此方法快速、便宜、仅仅需要一少部分细胞。细胞传代、冻存、或其它实验可以用这种方法。或者也可以通过流式细胞仪来计数细胞数目。检测前可以染PI排除死细胞。
(2) 直接增殖测定。这种方法利用DNA整合来测定细胞增殖。此方法利用整合到DNA中的放射性或非放射性的核酸类似物来检测。比如：Brdu免疫化学染色法需要将细胞或组织标本经过变性处理,这就影响了标本的结构,使标本不适合下游实验,也使得染色结果及程度过分地依赖于不同实验所应用的不同条件。
(3) 细胞代谢法。这种方法是将四唑盐加入细胞培养基内,这些四唑盐可以被活细胞转化为有颜色的甲瓒,用酶联免疫分析仪测定其光吸收值可间接反映活细胞数量。此方法已广泛用于各种细胞增殖的检测,生物活性因子的活性检测,大规模的抗肿瘤药物筛选,细胞毒性试验等。
应用[4][5]
用于细胞膜荧光染料用于定量检测体内外细胞增殖和肝脂肪酶在肿瘤细胞耐药中的作用研究
在同一群肿瘤细胞中定量测定了各亚群细胞分裂次数,同时保持细胞完整性,可继续进行细胞功能的测定,也可提取细胞蛋白和RNA进行测定。
有研究指出APOBEC3G,、CD133、LIPC和S100P在功能上调节大肠癌的肝转移,其阳性预示着大肠癌存在肝转移。另一项研究显示非小细胞肺癌中LIPC表达水平可能具有一个独立的预后价值。
因此,本实验利用这种新的DiO染色方法研究了LIPC在肿瘤细胞耐药中的机制。主要方法及结果1DiO的研究1.1DiO和DiD同属亲脂性羰花青染料。它们是由两个对称的环,每个环连接一个长的碳氢链,环中间由奇数个次甲基连接构成。双环结构及连接双环的次甲基数目的不同决定了荧光分子的特性。
碳氢链的长短决定了它们与膜脂质双层结构的亲疏性。DiO的吸收和释放波长分别是484nm和501nnm,DiD的吸收和释放波长分别是644nm和665nm。1.2MTT测定DiO染色后细胞的增值情况。
结果显示DiO染色后Lovo、SW480、SW620、CT26、HepG2细胞在1、2、3天不影响其增殖P>0.05。
参考文献
[1]Marker-independent Method for Isolating Slow-Dividing Cancer Stem Cells in Human Glioblastoma[J].Cristina Richichi,Paola Brescia,Valeria Alberizzi,,Lorenzo Fornasari,Giuliana Pelicci.Neoplasia.2013(7)
[2]Prognostic value of LIPC in non-small cell lung carcinoma[J].Lorenzo Galluzzi,Aicha Goubar,Ken Olaussen,Ilio Vitale,Laura Senovilla,Judith Michels,Angélique Robin,Nicolas Dorvault,Benjamin Besse,Pierre Validire,Pierre fouret,Carmen Behrens,Ignacio Wistuba,Jean-Charles Soria,Guido Kroemer.Cell Cycle.2013(4)
[3]APOBEC3G promotes liver metastasis in an orthotopic mouse model of colorectal cancer and predicts human hepatic metastasis[J].Ding,Qingqing,Chang,Chun-Ju,Xie,Xiaoming,Xia,Weiya,Yang,Jer-Yen,Wang,Shao-Chun,Wang,Yan,Xia,Jiahong,Chen,Libo,Cai,Changchung,Li,Huabin,Yen,Chia-Jui,Kuo,Hsu-Ping,Lee,Dung-Fang,Lang,Jingyu,Huo,Longfei,Cheng,Xiaoyun,Chen,Yun-Ju,Li,Chia-Wei,Jeng,Long-Bin,Hsu,Jennifer L,Li,Long-Yuan,Tan,Alai,Curley,Steven A,Ellis,Lee M,DuBois,Raymond N,Hung,Mien-Chie.Journal of Clinical Investigation.2011(11)
[4]Biological and Molecular Heterogeneity of Breast Cancers Correlates with Their Cancer Stem Cell Content[J].Salvatore Pece,Daniela Tosoni,Stefano Confalonieri,Giovanni Mazzarol,Manuela Vecchi,Simona Ronzoni,Loris Bernard,Giuseppe Viale,Pier Giuseppe Pelicci,Pier Paolo Di Fiore.Cell.2010(1)
[5]左俊华.细胞膜荧光染料用于定量检测体内外细胞增殖和肝脂肪酶在肿瘤细胞耐药中的作用[D].南方医科大学,2014.