背景[1-3]
ANTI-NESTIN抗体是一类可以特异性结合ANTI-NESTIN的多克隆抗体，主要用于检测ANTI-NESTIN的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多种免疫学实验。
检测原理：双抗体夹心法测定标本中ANTI-NESTIN水平。用纯化的ANTI-NESTIN抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入ANTI-NESTIN，再与HRP标记的ANTI-NESTIN抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的ANTI-NESTIN呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中ANTI-NESTIN浓度。
NESTIN为第VI类中间丝蛋白，其分子量为220KD〜250KD，位于1号染色体23.1q。巢蛋白基因含有三个内含子和四个外显子，三个内含子中有两个是与神经Nestin合成的蛋白分为三个区域，N端（1-7aa），α螺旋区（8-313）和N端（314-）。丝共享的，充分表明Nestin与神经丝来自于一个祖先的可能性。1621aa），α螺旋区被分为四个部分（1A，1B，2A，2B）。
Nestin是一种属于第Ⅵ类中间丝的细胞骨架蛋白,表达于多种组织的干细胞或前体细胞中,被广泛用作干细胞的标志性蛋白。除维持细胞的正常形态,nestin还具有抗凋亡作用。抑制细胞中nestin的表达,可以增强过氧化氢(H202)刺激诱导的神经前体细胞和血管平滑肌细胞的凋亡,而将野生型的nestin(nest-1893)转入到细胞内可起到保护作用,显著减少H202诱导的细胞凋亡。
应用[4][5]
用于中间丝蛋白Nestin在糖尿病肾病发病中的作用及机制研究
通过建立糖尿病大鼠模型和体外培养条件性永生化足细胞,探讨nestin在糖尿病肾小球足细胞损伤中的作用及机制,为进一步阐明糖尿病肾病的发病机制及其防治提供理论依据。
方法：中间丝蛋白Nestin在糖尿病大鼠肾组织的表达Wistar大鼠随机分为2组：对照组(Control)和糖尿病组(Diabetes mellitus,DM)。DM组大鼠按65mg/kg体重腹腔注射STZ(溶于0.1M的无菌柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液,pH4.5),对照组大鼠注射等量的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液。48h后测定血糖和尿糖,血糖≥16.7mmol/L且尿糖阳性者(+++-++++)作为糖尿病(DM)大鼠。
分别于成模后4、8、12、16周,每组各取5只大鼠,留取24h尿液和血清后,处死大鼠切取肾脏。部分肾组织分别置于4%多聚甲醛和4%的戊二醛固定液中固定,用于光镜、免疫组织化学和电镜检测；
部分肾脏皮质用于分离肾小球,提取肾小球总RNA和蛋白。免疫组织化学和Western blot检测肾小球内nestin、p-nestin、vimentin、Cdk5/p35蛋白的表达；
免疫荧光双染色检测nestin与vimentin、Cdk5、WT1、α-SMA、synaptopodin、laminin等的共同表达情况；免疫共沉淀检测nestin与vimentin蛋白的结合情况；Real-time PCR检测肾小球中nestin、vimentin和Cdk5m RNA的表达。
参考文献
[1]Cell Biology and Pathology of Podocytes[J].Anna Greka,Peter Mundel.Annual Review of Physiology.2012
[2]Involvement of cyclin‐dependent kinase‐5 in the kainic acid‐mediated degeneration of glutamatergic synapses in the rat hippocampus[J].NooraPutkonen,Jyrki P.Kukkonen,GuiseppaMudo,JaanaPutula,NataleBelluardo,DanLindholm,LauraKorhonen.European Journal of Neuroscience.2011(8)
[3]Increased CDK5 Expression in HIV Encephalitis Contributes to Neurodegeneration via Tau Phosphorylation and Is Reversed with Roscovitine[J].Christina Patrick,Leslie Crews,Paula Desplats,Wilmar Dumaop,Edward Rockenstein,Cristian L.Achim,Ian P.Everall,Eliezer Masliah.The American Journal of Pathology.2011(4)
[4]Podocytopathy in Diabetes:A Metabolic and Endocrine Disorder[J].Ana Diez-Sampedro,Oliver Lenz,Alessia Fornoni.American Journal of Kidney Diseases.2011(4)
[5]刘巍.中间丝蛋白Nestin在糖尿病肾病发病中的作用及机制研究[D].河北医科大学,2012.