背景[1-3]
ANTI-IL-23抗体是一类可以特异性结合IL-23的多克隆抗体,主要用于检测IL-23的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多种免疫学实验。
检测原理:双抗体夹心法测定标本中IL-23水平。用纯化的IL-23抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入IL-23,再与HRP标记的IL-23抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的IL-23呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中IL-23浓度。
白细胞介素23(IL-23)是造血细胞因子家族成员,它是一个由p19亚单位和IL-12p40亚单位通过二硫键连接形成的异源二聚体分子,主要来源于活化的单核巨噬细胞和B细胞,具有多种生物学作用,不仅参与机体的抗肿瘤免疫和抗感染免疫,而且在自身免疫性疾病中也发挥重要的作用。
IL-23能作用于CD4+Tm细胞(记忆性T细胞),诱导Th0细胞分化为Thl细胞并产生IFN-γ,也能作用于Th17细胞诱导IL-17的产生。IL-17是一种新发现的炎性细胞因子,人类IL-17(hIL-17)是一个同源二聚体分子,由155个氨基酸组成,主要由记忆性T细胞产生。IL-17能够激活T细胞,并能作用于多种组织和细胞,尤其在炎症早期作为一种强大的炎症反应调节因子和前炎症细胞因子。
白细胞介素-23由p19和IL-12的40kD亚基组成,由活化的DC分泌。p19与IL-6、G-CSF和IL-12的35kD亚基结构相似。能促进CD45RO+记忆T细胞增殖并产生γ干扰素。
应用[4][5]
用于白细胞介素23对胃癌发生发展及转移能力的影响及其分子机制的研究
研究白细胞介素23(Interlukin-23,IL-23)对胃癌发生发展及转移能力的影响,探讨其促进胃癌转移的潜在分子机制。
【方法】(1)免疫组织化学染色法检测慢性浅表性胃炎(慢性),慢性萎缩性胃炎伴肠化生和胃癌患者组织中IL-23的表达;ELISA法检测血清IL-23的水平,时间分辨免疫荧光分析法定量检测血清胃蛋白酶原。
(2)免疫组织化学染色法检测未转移胃癌组(1)(Pepsinogen 1,PG1)的水平;Pearson相关分析。未转移组,n=9)和转移胃癌组(转移组,n=16)患者IL-23的表达;ELISA法检测这两种胃癌患者血清IL-23,VEGF,MMP9的表达水平,健康体检人群。
(3)应用胃癌SGC-7901,BGC-823细胞株进行体外实验,均分为4组,即分成,50 ng/m L IL-23处理组,LY294002处理组和LY294002+IL-23组。ELISA法检测每株细胞不同处理后各组细胞培养的上清液中MMP9和VEGF的表达;划痕实验和Transwell实验检测胃癌细胞迁移能力的变化;Western blot和荧光定量PCR法检测转移
参考文献
[1]Role of Liprins in the Regulation of Tumor Cell Motility and Invasion[J].Sara Chiaretti,Ivan de Curtis.Current Cancer Drug Targets.2016(3)
[2]PlGF knockdown inhibited tumor survival and migration in gastric cancer cell via PI3K/Akt and p38MAPK pathways[J].Hassan Akrami,Fatemeh Mahmoodi,Somaye Havasi,Amene Sharifi.Cell Biochemistry and Function.2016(3)
[3]Potential Biomarkers in Diagnosis of Human Gastric Cancer[J].Zhihao Zhang,Mengmeng Dou,Xiaofang Yao,Hao Tang,Zhubo Li,Xiaoyan Zhao.Cancer Investigation.2016(3)
[4]Potent effects of dioscin against gastric cancer in vitro and in vivo[J].Xinwei Zhao,Lina Xu,Lingli Zheng,Lianhong Yin,Yan Qi,Xu Han,Youwei Xu,Jinyong Peng.Phytomedicine.2016
[5]孙鹏.白细胞介素23对胃癌发生发展及转移能力的影响及其分子机制的研究[D].江苏大学,2016.