背景[1-3]
牛I型胶原(COL I)ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被牛I型胶原(ColI)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的牛I型胶原(ColI)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
操作步骤
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
胶原蛋白是生物高分子，动物结缔组织中的主要成分，也是哺乳动物体内含量最多、分布最广的功能性蛋白，占蛋白质总量的25%～30%，某些生物体甚至高达80%以上。
胶原蛋白种类较多，常见类型为Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅴ型和Ⅺ型。
胶原蛋白因具有良好的生物相容性、可生物降解性以及生物活性，因此在食品、医药、组织工程、化妆品等领域获得广泛的应用。
应用[4][5]
用于免疫细胞迁移试验评价生物材料免疫原性的探索性研究
通过兔血淋巴细胞的迁移试验，检测刺激剂对淋巴细胞的剂量效应，初步建立一种兔淋巴细胞迁移试验评价生物材料免疫原性的实验方法。
再次通过检测小鼠脾脏淋巴细胞的迁移，并初步建立由细胞迁移试验评价材料免疫原性的实验方法；
基于本实验室前期探索的朗格汉斯细胞体外诱导方案，采用扫描电镜和透射电镜观察朗格汉斯细胞形态及CD196和CD86的表型鉴定，筛选出朗格汉斯细胞体外诱导培养的方案，预期为探索朗格汉斯细胞迁移试验提供效应细胞。
不同生物材料浸提液作用下的小鼠淋巴细胞迁移试验3.1制备生物材料浸提液：（1）可溶性材料，选取牛I型胶原，将之溶解于纯度＞99.5%的乙酸溶液，小量分装，保存于4℃。
（2）不溶性材料，选取脱细胞冻干牛真皮，将其称量后，按比例浸泡于RPMI-1640，孵育24小时，收集其浸提液，小量分装保存于-20℃。3.2取BALB/c小鼠（雌雄不限）脾脏，采用研磨法分离淋巴细胞，分别用生物材料浸提液作为淋巴细胞分泌趋化因子的刺激剂。
在细胞悬液中，加入不同浓度材料浸提液，置37℃含5%CO2的孵箱中生长培养72小时，收集细胞上清。3.3将细胞上清作为趋化因子的来源，诱导小鼠淋巴细胞迁移，用Transwell法测定细胞迁移率，比较各种材料浸提液的迁移效果。了解其材料的淋巴细胞迁移效应。
参考文献
[1]Regulatory T cell migration during an immune response[J].Yaozhong Ding,Jiangnan Xu,Jonathan S.Bromberg.Trends in Immunology.2012(4)
[2]Increased prevalence of peripheral blood granulysin-producing cytotoxic T lymphocytes in preeclampsia[J].Attila Molvarec,Arihiro Shiozaki,Mika Ito,Gergely Toldi,Balázs Stenczer,András Szarka,Akitoshi Nakashima,Barna Vásárhelyi,János Rigó,Shigeru Saito.Journal of Reproductive Immunology.2011(1)
[3]CCR6 as a possible therapeutic target in psoriasis[J].Michael N Hedrick,Anke S Lonsdorf,Sam T Hwang,Joshua M Farber.Expert Opinion on Therapeutic Targets.2010(9)
[4]Infection of non-encapsulated species of Trichinella ameliorates experimental autoimmune encephalomyelitis involving suppression of Th17 and Th1 response[J].Zhiliang Wu,Isao Nagano,Kazunobu Asano,Yuzo Takahashi.Parasitology Research.2010(5)
[5]周灵.免疫细胞迁移试验评价生物材料免疫原性的探索性研究[D].第三军医大学,2012.