背景[1-3]
SW48细胞是从结肠腺癌中分离建立的细胞系，该细胞合成癌胚抗原，能在裸鼠中成瘤。
W480源自原位直肠腺癌，CSAp和直肠抗体阴性。p53基因第273位密码子的G→A突变引起Arg→His替代，309位密码子的C→T突变导致Pro→Ser替代。细胞p53蛋白表达水平提高。癌基因c-myc,K-ras,H-ras,N-ras,myb,sis和fos的表达呈阳性。癌基因N-myc的表达未做检测。不表达细胞溶解酶，一种与肿瘤入侵相关的金属蛋白酶。有报道称该细胞表达GM-CSF。ras原癌基因的12位密码子有一个突变，可以用作PCR法检测该突变的阳性对照。
SW48细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
1.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若SW48细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
2.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
3.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
应用[4][5]
用于AF1q在人结直肠癌中的表达及其对结直肠癌细胞增殖及侵袭转移的影响研究
研究AF1q在结直肠癌细胞系及肿瘤组织中的表达情况,探讨AF1q的表达与结直肠癌发生的相关性。
方法:1.通过RT-PCR、免疫组化方法比较AF1q在结直肠癌组织及癌旁组织中的表达情况及其与临床病理资料的关系。
2. 利用癌症基因组图谱在线数据库（The Cancer Genome Atlas,TCGA）进行生存分析,探讨AF1q与结直肠肿瘤的预后关系。
3. 通过RT-PCR及Western Blot方法比较AF1q在不同结直肠癌细胞系中的表达情况;
结果:1.AF1q基因mRNA表达水平以及蛋白质表达水平,在结直肠癌组织中均明显高于对照癌旁组织。回归分析显示,AF1q的表达水平与结直肠癌的淋巴结转移、TNM分期密切相关。
2. 利用TCGA数据库结果进行生存分析提示,无论是总生存率（OS,overall survival）还是无疾病生存率（DFS,disease free survival）,AF1q高表达组均显著差于AF1q低表达组。
3. AF1q在结直肠癌细胞系（SW480,SW48,KM12,SW620,and LoVo）中的表达高于对照正常肠上皮细胞系（NCM460）。在SW620、LoVo细胞系中高表达,在SW48、SW480细胞系中低表达。
结论:AF1q的表达水平与结直肠癌患者的淋巴结转移情况、TNM分期、以及预后情况密切相关。AF1q在结直肠癌细胞系中的表达水平高于正常肠上皮细胞系。
参考文献
[1]Epithelial–mesenchymal transition(EMT):A biological process in the development,stem cell differentiation,and tumorigenesis[J].Tong Chen,Yanan You,Hua Jiang,Zack Z.Wang.Journal of Cellular Physiology.2017(12)
[2]Acetazolamide potentiates the anti-tumor potential of HDACi,MS-275,in neuroblastoma[J].Reza Bayat Mokhtari,Narges Baluch,Micky Ka Hon Tsui,Sushil Kumar,Tina S.Homayouni,Karen Aitken,Bikul Das,Sylvain Baruchel,Herman Yeger.BMC Cancer.2017(1)
[3]Differential involvement of the microtubule cytoskeleton in insulin receptor substrate 1（IRS-1）and IRS-2 signaling to AKT determines the response to microtubule disruption in breast carcinoma cells[J].Jose Mercado-Matos,Jennifer L.Clark,Andrew J.Piper,Jenny Janusis,Leslie M.Shaw.Journal of Biological Chemistry.2017(19)
[4]PI3K signaling in cancer:beyond AKT[J].Evan C Lien,Christian C Dibble,Alex Toker.Current Opinion in Cell Biology.2017
[5]胡经纬.AF1q在人结直肠癌中的表达及其对结直肠癌细胞增殖及侵袭转移的影响[D].华中科技大学,2017.