概述[1]
氨基酸是生物体中重要的生命物质,是组成酶和蛋白质的基本单元。由于大多数氨基酸本身没有紫外吸收，所以先对它们进行柱前-12或柱后3衍生，再对其衍生物进行分析是一种常用的检测方法。对乙氧基苯磺酰氯可用于衍生一级和二级氨基酸，且与氨基酸反应条件比较温和，但是它的衍生物对光敏感，且选择性差。
制备方法[2]
二氯甲烷(5ml)、9(1g，3.7mmol)和三乙胺(0.52g，3.7mmol)于-10℃、20min内滴加叔丁胺(0.27g，3.7mmol)，室温加入冰水(10ml)，分层，水层用二氯甲烷(4ml ×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液蒸除溶剂,剩余物经柱色谱(流动相:二氯甲烷)分离，得白色固体3(0.85g,75%)，mp 151～153℃,收率75%，mp150～153℃)。
如上所得对乙氧基苯磺酰氯溶于THF(5ml)中，一78℃搅拌加入叔丁醇钾(90mg，0.8mmol)，搅拌10min后加入3(2.25g，0.8mmol)。撤掉冰浴，1h后升至室温搅拌2h。蒸干溶剂，剩余物经柱色谱[流动相：乙酸乙酯-甲醇(10:1)]分离，得无色油状物，固化后得白色固体1(453mg，87%)，mp 209~211℃。HNMR(CDCl)8: 8.14(d,1H)，7.70(d,1H)，7.44(d,1H)，7.28(m, 1H)，6.83(dd,1H)，6.61(d,1H)，6.09(s,1H)，4.02(q, 2H)，3.73(m, 4H)， 3.60(m, 5H)，3.46(m, 1H),2.60(t, 2H)，2.53(bs,4H)，2.04(m, 2H)，1.83(br, m,4H)，1.61(m, 2H)，1.47(s,9H)，1.43(t,3H)。
乙氧基苯磺酰氯衍生法[3]
对乙氧基苯磺酰氯衍生法操作比较简单，只需将对乙氧基苯磺酰氯加入溶有氨基酸的碳酸氢钾缓冲溶液中，室温下避光反应35—50 min即可完成衍生。对乙氧基苯磺酰氯与包括二级氨基酸在内的所有氨基酸均起反应，且衍生物比较稳定，一般可放置12—24 h。Yan 等采用对乙氧基苯磺酰氯为柱前衍生试剂，以氨基己二酸为内标物，用RP-HPLC梯度洗脱程序，采用紫外检测器对氨基酸进行分离测定。此方法简单、快速且样品处理简单，衍生后可直接进样，适用于临床检测和科研需要。近年来国内外报道用对乙氧基苯磺酰氯作为氨基酸的柱前衍生试剂的文献比较少，是因为它存在以下的缺点：
(1)反应速度比较慢；
(2)对乙氧基苯磺酰氯水解产物也可发射强荧光,干扰测定；
(3)衍生产物对紫外光照比较敏感,反应要在避光条件下进行；
(4)易生成多级衍生产物,给分离测定带来一定麻烦。
衍生法与色谱结合具有高灵敏度、低检测限和简便可靠等特点，在氨基酸的研究中应用广泛。衍生试剂种类多,各有其独到之处。用何方法需要根据其衍生速度、分析灵敏度、检测二级氨基酸能力、干扰因素等各项指标与实际要求选择。目前，市场上仍然缺乏对20种常见氨基酸都具有高效衍生能力的衍生试剂，所以寻找和开发更好的衍生试剂是我们化学研究者不可推卸的责任。
参考资料
[1] 瞿其曙,汤晓庆,胡效亚,等.柱前衍生法在氨基酸分析测定中的应用[J,化学进展，2006,18(6):104-108.
[2] TANG Tao，SHI Tian-yu,QIAN Kun，et al. Deter-mination of biogenic anines in beer with pre-columnderivatization by high performance liquid chromatogra-phy[J，Journal of Chromatography B，2009,877:507-512.
[3]Nishihashi T, Trandafir CC, Wang A, et al.Enbanced reacti-vity to vasopressin in rat basilar arteries during vasospasmafter subarachnoid hemorrhage[J]. Eur J Pharmacol,2005,513(1-2): 93-100.