背景[1-3]
CAKI-2人肾透明癌细胞自一位69岁白人男性的初期肾腺癌组织，肾实质癌是来源于肾小管上皮细胞的腺癌，85%为透明细胞癌，还有一部分为颗粒细胞癌及混合细胞癌。癌中常有出血、坏死、囊变和钙化。生于肾实质内，长大后浸润、压迫、破坏肾盂肾盏，向肾包膜外发展，形成血管瘤栓或转移到淋巴结及其他脏器。肾癌分为4型：透明细胞型肾癌、颗粒细胞型肾癌、混合细胞型肾癌、未分化细胞型肾癌。其中，绝大多数为肾透明细胞癌，占肾癌的70%~80%，其癌细胞常排列成片状、条索状、腺泡状或管状，很像肾小管。
透明细胞癌也是属于细胞癌的一种，是由于正常的细胞出现“叛变”衍生而来，经过很多年才长成肿瘤。“叛变”细胞脱离正轨，自行设定增殖速度，累积到10亿个以上才会察觉。透明癌细胞的增殖速度用倍增时间计算，1个变2个，2个变4个，以此类推。
细胞处理方法：
1.细胞在培养瓶中培养至状态良好后灌满培养基运输，获得细胞后用酒精棉球擦拭瓶口消毒，然后在超净台中操作。
2.如细胞生长至70%-80%，将瓶中的培养基移入无菌瓶中留作培养使用，保留5-8mL培养基在37℃、5%的CO2的温箱中继续培养。细胞培养至90%-100%后，按要求消化传代。
3.弃去培养基，用无菌PBS或者其他缓冲液清洗细胞2次，加入适量胰蛋白酶消化（EDTA胰酶），待细胞完全脱壁后加培养基吹打混匀，分瓶培养。
应用[4][5]
用于PGAM1在肾透明细胞癌中的表达、临床意义及其功能研究
GAM1表达下调对肾透明细胞癌细胞生物学功能的影响及其作用机制。
方法1、收集192例肾透明细胞癌组织及80例肾癌远端正常肾组织中,经固定、脱水制成石蜡组织块,采用免疫组化检测PGAM1的表达,并分析PGAM1在肾透明细胞癌组织中的表达与临床病理参数及患者预后的关系。
2、采用qRT-PCR定量检测了3对肾透明细胞癌及配对远端正常’肾组织中PGAM1mRNA的表达,同时,通过Western blot定量检测了8对肾透明细胞癌及配对正常肾组织中PGAM1蛋白的表达情况,进一步明确PGAM1在’肾癌及癌旁肾组织中的表达。
3、采用qRT-PCR检测了PGAM1在肾透明细胞癌细胞株RLC-310及Caki-2中的表达。同时,行siRNA干扰片段瞬时转染,敲低PGAM1在’肾透明细胞癌细胞株RLC-310及Caki-2中的表达,并行qRT-PCR及Western blot进行验证。
4、采用流式细胞仪检测PGAM1表达下调对肾透明细胞癌细胞株RLC-310及Caki-2中凋亡的影响；同时,采用MTT实验检测PGAM1表达下调对肾透明细胞癌细胞株RLC-310及Caki-2增殖的影响。
5、通过qRT-PCR及Western blot检测肾透明细胞癌细胞株RLC-310及Caki-2中PGAM1表达下调后,P53、Caspase 3及Caspase 9的表达情况,初步探讨PGAM1发挥生物学功能的机制。
结果：PGAM1在肾透明细胞癌中的表达首先,我们通过免疫组化检测了192例肾透明细胞癌组织及80例肾癌远端正常肾组织中PGAM1的表达,结果表明PGAM1阳性表达主要定位于细胞质,在正常肾组织及肾透明细胞癌组织中均可见阳性表达。
其中,正常肾组织中,阴性表达20例（25.0%）,弱阳性表达34例（42.5%）,中度阳性表达20例（25.0%）,强阳性表达6例（7.5%）；肾透明细胞癌组织中,阴性表达59例（30.7%）,弱阳性表达45例（23.4%）,中度阳性表达71例（37.0%）,强阳性表达17例（8.9%）；统计学分析表明,两组差异明显,具有统计学意义（P=0.017）。
参考文献
[1]p53 causes butein?mediated apoptosis of chronic myeloid leukemia cells[J].Sang?Mi Woo,Youn Choi,Ah Kim,Sung?Gook Cho,Seong?Gyu Ko.Molecular Medicine Reports.2016(2)
[2]Decreased expression of RASSF1A tumor suppressor gene is associatedwith worse prognosis in clear cell renal cell carcinoma[J].Jakub Klacz,Piotr Wierzbicki,Agata Wronska,Agnieszka Rybarczyk,Marcin Stanislawowski,Tomasz Slebioda,Agata Olejniczak,Marcin Matuszewski,Zbigniew Kmiec.International Journal of Oncology.2016(1)
[3]Imiquimod activates p53-dependent apoptosis in a human basal cell carcinoma cell line[J].Shi-Wei Huang,Shu-Hao Chang,Szu-Wei Mu,Hsin-Yi Jiang,Sin-Ting Wang,Jun-Kai Kao,Jau-Ling Huang,Chun-Ying Wu,Yi-Ju Chen,Jeng-Jer Shieh.Journal of Dermatological Science.2015
[4]A Molecular Model for Predicting Overall Survival in Patients with Metastatic Clear Cell Renal Carcinoma:Results from CALGB 90206(Alliance)[J].Hyung L.Kim,Susan Halabi,Ping Li,Greg Mayhew,Jeff Simko,Andrew B.Nixon,Eric J.Small,Brian Rini,Michael J.Morris,Mary-Ellen Taplin,Daniel George.EBioMedicine.2015(11)
[5]李春景.PGAM1在肾透明细胞癌中的表达、临床意义及其功能研究[D].南方医科大学,2016.