背景[1-3]
昆虫谷胱甘肽S转移酶(GST)应用双抗体夹心法测定标本中昆虫谷胱甘肽S转移酶（GST）水平。用纯化的昆虫谷胱甘肽S转移酶（GST）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入谷胱甘肽S转移酶（GST），昆虫谷胱甘肽S转移酶（GST）ELISA试剂盒再与HRP标记的谷胱甘肽S转移酶（GST）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的谷胱甘肽S转移酶（GST）呈正相关。
昆虫谷胱甘肽S转移酶(GST)结构图
操作步骤：
1.标准品的加样：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.加酶：每孔加入酶标试剂100μl，空白孔除外。
4.温育：用封板膜封板后置37℃温育60分钟。
5.配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。
6.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
7.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
8.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
9.测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
应用[4][5]
用于灰飞虱（Laodelphax striatellus）谷胱甘肽-S-转移酶基因的分子克隆及表达量分析研究
谷胱甘肽-S-转移酶（Glutathione S-transferases,GSTs）是一种多功能的超家族酶系。GSTs被认为在昆虫体内行使杀虫剂解毒代谢的功能,与昆虫的抗药性形成紧密相关。因此,本文利用灰飞虱转录组数据,搜索并克隆了灰飞虱谷胱甘肽-S-转移酶基因序列,通过荧光定量PCR技术对三种灰飞虱抗性品系中的谷胱甘肽-S-转移酶基因进行了表达分析,筛选出可能参与杀虫剂解毒代谢的灰飞虱谷胱甘肽-S--转移酶。
谷耽甘肽-S-转移酶在三个灰飞虱抗性品系中的表达量分析为了筛选出灰飞虱体内参与杀虫剂解毒代谢的谷胱甘肽-S-转移酶,利用定量PCR技术检测了在三个灰飞虱抗性品系（吡虫淋抗性品系、毒死蜱抗性品系和溴氰菊酯抗性品系）中,新克隆的8个GSTs基因和文献中已报道的9条GSTs基因的表达情况。
参考文献
[1]Identification and characterisation of multiple glutathione S‐transferase genes from the diamondback moth,Plutella xylostella[J].Xi’en Chen,Ya‐lin Zhang.Pest.Manag.Sci..2015(4)
[2]Parasite aquaporins:Current developments in drug facilitation and resistance[J].Jie Song,Ellen Mak,Binghua Wu,Eric Beitz.BBA-General Subjects.2014(5)
[3]Multiple glutathione S‐transferase genes:identification and expression in oriental fruit fly,Bactrocera dorsalis[J].Fei Hu,Wei Dou,Jing‐Jing Wang,Fu‐Xian Jia,Jin‐Jun Wang.Pest.Manag.Sci..2014(2)
[4]Glutathione S-transferase（GST）genes in the red flour beetle,Tribolium castaneum,and comparative analysis with five additional insects[J].Houxia Shi,Lianghong Pei,Shasha Gu,Shicheng Zhu,Yanyun Wang,Yi Zhang,Bin Li.Genomics.2012(5)
[5]尤福洋.灰飞虱（Laodelphax striatellus）谷胱甘肽-S-转移酶基因的分子克隆及表达量分析[D].南京农业大学,2016.