背景[1-3]
线粒体蛋白提取试剂盒(蛋白组实验、质谱适用)适用于从各种原代或传代动物细胞和各种实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等动物组织中提取总蛋白。提取过程简单方便，可在1小时内完成。
线粒体蛋白电泳图
试剂盒含有的独特配方能够有效溶解细胞膜组份，包括细胞质膜、核膜和各种细胞器膜。试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。
试剂盒的蛋白提取组份中不含有不可透析除去的去垢剂组份，不含SDS、Triton X-100、chaps等可能影响质谱实验的组份，最后得到的蛋白质样品经过透析或者脱盐处理后将不含有去垢剂、高浓度盐等影响，基本可以满足下游任意的蛋白质组学相关研究。
使用方法：
1．收集细胞，在4℃，2000g条件下离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干。
2．用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3．每5×106-1×107个细胞(大约50mg细胞/50μl细胞压积)中加入500μl冷的总蛋白提取液，吹打混匀后，在4℃条件下振荡20-30分钟，至细胞充分裂解，无明显细胞沉淀。
4．在4℃，12000g条件下离心15分钟。
5．将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到细胞总蛋白。
6．将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或用于下游实验。
7．将蛋白样品透析处理或者脱盐柱脱盐处理后用于下游实验。
应用[4][5]
用于茭白线粒体蛋白双向电泳体系建立研究
建立适合于茭白线粒体蛋白质组分析的双向电泳技术体系,为进一步开展茭白线粒体差异蛋白质组学研究提供参考。
方法：以茭白为试验材料,比较不同线粒体提取纯化方法、IPG胶条p H范围及蛋白上样量等条件对双向电泳图谱的影响。
结果：差速离心（300014000×g）联合Percoll不连续密度梯度离心（20%∶24%∶40%=2∶4∶2）对茭白线粒体的提取纯化效果优于仅采用差速离心。
采用改良酚抽法提取茭白线粒体蛋白,17 cm、p H 310的IPG胶条,1.0 mg上样量,12%SDS-PAGE进行双向电泳,0.12%考马斯亮蓝G-250胶体考染法染色,茭白线粒体蛋白主要分布在p H 48范围内,p H 34和p H 810范围内蛋白点较少;
进一步选用p H 47和p H 58的IPG胶条对茭白线粒体蛋白进行双向电泳,分离效果均明显提高,且p H 47范围内IPG胶条的双向电泳图谱清晰,蛋白点分辨率较高。
参考文献
[1]Proteomic analysis of changes in mitochondrial protein expression during fruit senescence.Qin Guozheng,Wang Qing,Liu Jia,Li Boqiang,Tian Shiping.Proteomics.2009
[2]A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the protein dye binding.Bradford M M.Analytical Biochemistry.1976
[3]Changes in the mitochondrial proteome during the anoxia to air transition in rice focus around cytochrome-containing respiratory complexes.Millar,A.Harvey,Trend,Alice E,Heazlewood,Joshua L.Journal of Biological Chemistry.2004
[4]Analysis of the Arabidopsis mitochondrial proteome.Harvey Millar A,Sweetlove Lee J,Philippe Giege,et al.Plant Physiology.2001
[5]杜传来,罗海波,彭昕,王韦华,郁志芳.茭白线粒体蛋白双向电泳体系建立[J].南方农业学报,2016,47(03):332-336.