背景及概述[1]
碱性绿1又叫灿烂绿，灿烂绿属于碱性三苯甲烷类染料，在水产养殖中常用作杀菌剂和抗寄生虫药，由于三苯甲烷类具有致突变、致畸性和致癌作用，欧美和我国已严禁在水产养殖中使用三苯甲烷类染料，由于水产养殖过程中使用了灿烂绿而使池塘水体和土壤受到污染，在后续的养殖过程中容易在鱼体内形成残留，因此鱼类养殖需对池塘水体和土壤进行有效的监控。
检测方法[1]
土壤中灿烂绿的检测方法，包括以下步骤：
S1.制备标准储备液
S1a.制备标准储备液：氘代孔雀石绿标准储备液：准确称取氘代孔雀石绿标准品10.0mg于50mL烧杯中，用少量乙腈溶解并定容到50mL棕色容量瓶，混匀，浓度为200μg/mL。该溶液可在-18℃条件下保存6个月。
灿烂绿标准储备液：准确称取灿烂绿标准品10.0mg于50mL烧杯中，用少量乙腈溶解并定容到50mL棕色容量瓶，混匀，浓度为200μg/mL。该溶液可在-18℃条件下保存6个月。
S2.制备标准溶液
S2a.从灿烂绿标准储备液中分别吸取0.5mL至100mL棕色容量瓶中，并用乙腈定容，混匀，浓度为1.0μg/mL，该溶液可在4℃条件下保存1个月；再吸取0.5mL至50mL棕色容量瓶中，并用乙腈定容，混匀，浓度为0.01μg/mL(该溶液临用前配制)，得到灿烂绿标准溶液。
从氘代孔雀石绿标准储备液中吸取0.5mL至100mL棕色容量瓶中，并用乙腈定容，混匀，得标准溶液,浓度为1.0μg/mL。该溶液可在冰箱中4℃保存1个月。得到氘代孔雀石绿标准溶液。
S3.制备标准溶液
S3a.制作标准曲线：分别用50％乙腈水稀释氘代孔雀石绿标准溶液和灿烂绿标准溶液，将氘代孔雀石绿标准溶液加入灿烂绿标准溶液中，分别配置0.5ng/mL、1.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL及10.0ng/mL的标准工作液，各含氘代孔雀石绿5.0ng/mL。该溶液临用现配。
S4.试样制备
取土壤样品2.0kg于通风处自然风干，去除较大的石块和其它杂质，然后过2.0mm孔径筛，用均质器或研磨器完全捣碎，混合均匀，作为实验室检测样品。
S5.灿烂绿提取
准确称取10g试样(精确至0.01g)于80mL离心管内，加入1.0μg/mL氘代孔雀石绿标准溶液50μL，加入4mL0.1mol/L乙酸铵缓冲溶液、4mL1.0mol/L对甲苯磺酸溶液和50mL乙腈，用均质机以10000r/min的速度均质30s，4000r/min离心5min，上清液倒入装有20mL水、40mL二氯甲烷的分液漏斗中，上下震荡5min，静置分层，吸掉上层水相，再加入20mL水重复上述操作，取下层溶液于鸡心瓶中，40℃减压浓缩至干，得样品液。
样品液加入10mL乙腈洗脱鸡心瓶，取2mL过活化的中性氧化铝柱(中性氧化铝柱上端填1cm高无水硫酸钠，使用前用5mL乙腈活化)，收集到150mL棕色鸡心瓶中，20mL乙腈洗脱中性氧化铝柱，洗脱液全部收集到同一鸡心瓶中，40℃减压旋转蒸发至干，后用2mL乙腈+水(1+1)溶液涡旋洗脱，取清液用0.2μm有机滤膜过滤，得提取液。
S6.上机测试：取5μL提取液注入液质联用仪检测，具体测试条件如下：
液相色谱条件：
a、色谱柱：WATERS UPLC BEH C18 1.7μm,100*2.1mm或性能相当者
b、流动相：乙腈+5mmol/L乙酸铵(含0.1％甲酸)梯度洗脱
c、流速：0.3mL/min
d、进样量：5μL
质谱条件：
a、离子源：电喷雾离子源
b、扫描方式：正离子扫描
c、检测方式：多反应监测
d、电喷雾电压：4000V
e、毛细管电压：100V
f、辅助器压力：35psi
g、反吹气：11L/min
h灿烂绿离子对：358.3/297.2(定量)358.3/341.2
氘代孔雀石绿离子对：334.2/318.2
S7.结果判定：如果同浓度的提取液的色谱峰保留时间与同浓度的标准工作液的色谱峰保留时间一致。且试样中目标化合物的两个子离子的相对丰度与标准溶液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过允许的相对偏差，则可判断样品中存在灿烂绿。
S8.定量测量
分别用50％乙腈水稀释氘代孔雀石绿标准溶液和灿烂绿标准溶液，将氘代孔雀石绿标准溶液加入灿烂绿标准溶液中，配置0.5ng/mL、1.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL的标准工作液，各含氘代孔雀石绿5.0ng/mL，以标准工作液进样，以标准工作液的浓度为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线，提取液等体积进样测定，内标法定量；提取液中的灿烂绿含量应在标准曲线浓度范围之内。
S9.加标回收
采用空白样品进行加标，用1.0mL移液枪添加0.01μg/mL氘代孔雀石绿标准溶液500μL于空白样品中，即相当于添加浓度为0.5μg/kg添加水平。
S10.空白试验
除不称取样品外，重复步骤S5-S6步骤，得空白检测液，检测空白检测液。
S11.结果计算
依据以下公式计算试样中灿烂绿的残留量：
式中：X为土壤中灿烂绿的含量，μg/kg；c为从标准曲线上读出的提取液中目标物灿烂绿的含量，ng/mL；V为提取液的体积，mL；m为土壤的称样量，g；n为稀释倍数。
应用[2]
CN201710400093.0提供了一种可褪色黑墨水及其制备方法，墨水组分按重量百分比计：红色染料0.8-0.85％，绿色染料2.5-3.0％，增稠剂3.0-3.5％，表面活性剂1.0-1.5％，防腐剂0.15-0.20％，蒸馏水余量，所述的红色染料为酸性品红或碱性品红；所述的绿色染料为酸性绿、碱性绿或灿烂绿。该墨水制备方法简单，原料来源广泛，成本较低。该墨水无毒，无刺激性气味，且遇还原性物质可褪色，书写过的纸张可以回收再利用。
参考文献
[1] [中国发明] CN201910909255.2 土壤中灿烂绿的检测方法
[2] CN201710400093.0一种可褪色黑墨水及其制备方