背景[1-3]
NR8383细胞为大鼠肺泡巨噬细胞，来源于大鼠肺部，正常的细胞形态为圆形半,贴壁生长，支原体、细菌、酵母和真菌检测结果为阴性。培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
NR8383细胞
NR8383细胞来源于肺灌洗时的正常大鼠肺泡巨噬细胞，NR8383细胞在Gerbil肺细胞连续培养液存在下培养了8-9个月。
随后，NR8383细胞不再需要外源生长因子。通过有限稀释法，从单个细胞克隆并亚克隆NR8383细胞，并3次用软琼脂亚克隆。NR8383细胞表现出巨噬细胞的特性：吞噬酵母多糖和铜绿、非特异性脂酶活性、Fc受体、氧化降解；分泌IL-1、TNF-β和IL-6，可重复地响应外源生长因子。
NR8383细胞响应博莱霉素，分泌TNF-β前体。NR8383细胞在博莱霉素刺激下，TNF-βmRNA表达也上升。NR8383细胞对内毒素敏感，1-10ng/ml的LPS水平抑制增生达50%。即使达到0.001mg/ml的水平，LPS抑制还是无毒且在后续过程中可逆的。NR8383细胞提供了高响应的肺泡巨噬细胞的均一来源，可以用于体外研究巨响细胞相关活性，此细胞悬浮-贴壁混合生长。
应用[4][5]
用于TCA对TGR5介导的NR8383细胞TNF-α和IL-1β信号通路的影响研究
TCA对TGR5受体介导的NR8383细胞TNF-α和IL-1β的影响采用RT-q PCR技术、western blotting技术测定了不同浓度1000μM、500μM、100μM、50μM、10μM TCA对NR8383细胞TGR5基因、蛋白含量的影响,结果表明,不同浓度梯度的TCA对TGR5基因、蛋白水平含量变化均无显著影响（P>0.05）,且NR8383细胞整体表达TGR5含量水平较低。
TCA作用于转染p CMV-h TGR5表达载体的NR8383细胞,建立NR8383-TGR5稳定表达细胞系（本实验室已构建好并经过RT-q PCR、westernblot方法鉴定稳定表达h TGR5的NR8383细胞）。
采用ELISA法测定了TCA对NR8383-TGR5细胞c AMP含量的影响,结果表明,与NR8383细胞空白组相比,10μM TCA使NR8383-TGR5细胞c AMP含量显著升高（P<0.05）,表明NR8383细胞系中表达了TGR5受体。
采用共聚焦显微镜观察了NR8383细胞中的TGR5受体,结果显示,含h TGR5位于质膜,符合TGR5为膜受体的特征。TCA作用于NR8383细胞和NR8383-TGR5细胞后,两种细胞互为对照,有助于研究TGR5在TCA对NR8383细胞产生作用时的功能,为后续应用NR8383-TGR5细胞开展相关试验奠定基础。
TNF-α、IL-1β均为抗炎免疫相关的细胞因子,测定两者含量对于进一步探讨TCA作用于NR8383细胞后的抗炎免疫调节作用奠定试验基础。
采用RT-q PCR技术、ELISA技术测定了1000μM、100μM、10μM TCA对NR8383细胞和NR8383-TGR5细胞产生TNF-α含量和IL-1β含量的影响,结果表明,LPS（lipopolysaccharide）诱导TNF-α含量增加（P<0.05）,IL-1β基因水平含量增加（P<0.05）。
1000μM TCA可极显著降低NR8383细胞TNF-α基因、蛋白和NR8383-TGR5细胞的TNF-α基因水平（P<0.01）,不同浓度的TCA均可极显著减少LPS刺激的NR8383-TGR5细胞TNF-α蛋白水平（P<0.01）;未经LPS处理的NR8383-TGR5细胞产生TNF-α的含量较NR8383细胞高,TGR5含量增加亦能升高NR8383细胞中TNF-α的含量（P<0.05）。
经LPS刺激后,1000μM的TCA能显著增加NR8383细胞的IL-1β蛋白含量（P<0.05）,而100μM的TCA则可极显著的降低IL-1β蛋白含量（P<0.01）。与NR8383-TGR5细胞空白对照组相比,1000μM和10μM TCA均可显著升高NR8383-TGR5细胞IL-1βm RNA和蛋白含量（P<0.05）,但LPS刺激NR8383-TGR5细胞产生IL-1β蛋白含量变化不明显（P>0.05）,却可使NR8383-TGR5细胞产生IL-1β基因显著增加（P<0.01）,100μM和10μM TCA均可降低LPS刺激后IL-1βm RNA和蛋白含量（P<0.05）。
参考文献
[1]IL-1βUpregulates IL-8 Production in Human Müller Cells Through Activation of the p38 MAPK and ERK1/2 Signaling Pathways[J].Xiufen Liu,Fei Ye,Huabao Xiong,Danning Hu,G.Astrid Limb,Tian Xie,Liang Peng,Wei Yang,Yabin Sun,Mingming Zhou,E Song,David Y.Zhang.Inflammation.2014(5)
[2]I Prostanoid Receptor-Mediated Inflammatory Pathway Promotes Hepatic Gluconeogenesis Through Activation of PKA and Inhibition of AKT[J].Yan,Shuai,Zhang,Qianqian,Zhong,Xiaojing,Tang,Juan,Wang,Yuanyang,Yu,Junjie,Zhou,Yi,Zhang,Jian,Guo,Feifan,Liu,Yi,FitzGerald,Garret A,Yu,Ying.Diabetes.2014(9)
[3]Perspective:TGR5（Gpbar-1）in liver physiology and disease[J].Clinics and Research in Hepatology and Gastroenterology.2012(5)
[4]The role of Ras-ERK-IL-1βsignaling pathway in upregulation of elastin expression by human coronary artery smooth muscle cells cultured in 3D scaffolds[J].Shigang Lin,Kibret Mequanint.Biomaterials.2012(29)
[5]张子英.TCA对TGR5介导的NR8383细胞TNF-α和IL-1β信号通路的影响[D].内蒙古农业大学,2015.