甲基化试剂盒的应用

2021/7/28 10:41:36

背景[1-3]

甲基化试剂盒中含有定量检测全基因组甲基化所必需的所有试剂。在检测实验中,DNA被固定在一种有DNA吸附能力的孔上,甲基化的片段会被捕获剂以及检测抗体识别,用分光光度计读取微孔板在450nm处的比色度定量。甲基化的DNA的量与OD值成线性关系,可以通过本试剂盒提供的方程来计算两种不同的甲基化DNA样品的相对甲基化状态或者通过标准曲线完全定量。

甲基化试剂盒提供了化的缓冲液和试剂,运用比色度的方法,通过检测微孔板上5-mC的水平,以定量检测全基因组的DNA甲基化水平。

试剂盒与MethylFlash DNA羟甲基化定量试剂盒(比色法)完美配合,同时定量检测DNA的甲基化和羟甲基化水平。

甲基化试剂盒

甲基化是蛋白质和核酸的一种重要的修饰,调节基因的表达和关闭,与癌症、衰老、老年痴呆等许多疾病密切相关,是表观遗传学的重要研究内容之一。最常见的甲基化修饰有DNA甲基化和组蛋白甲基化。

DNA甲基化能关闭某些基因的活性,去甲基化则诱导了基因的重新活化和表达。DNA甲基化能引起染色质结构、DNA构象、DNA稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式的改变,从而控制基因表达。

在生物个体的生长发育与繁殖过程中,维持遗传物质的稳定性是至关重要的。细胞采用多种机制来保证DNA复制的忠实性,如DNA的双螺旋结构与半保留复制模式为遗传物质的稳定提供了物质基础;

DNA聚合酶Ⅲ除了具有DNA聚合酶活性外还具有5’到3’的核酸外切酶活性,可及时去除错配掺人的碱基;

DNA复制后存在多种修复机制进一步保证了遗传物质的稳定性。DNA甲基化在DNA复制起始、错配修复、细菌中寄主控制的修饰与限制以及转座子的失活等过程中对维持遗传信息的稳定性发挥着重要的作用。

应用[4][5]

用于DNA甲基化检测在宫颈癌筛查中的应用研究

DNA甲基化,即未甲基化胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤(Cytosine-phosphate-Guanosine,CpG)二核苷酸发生甲基化。甲基化是一种重要的表观遗传修饰机制,肿瘤组织中存在着基因组普遍的低甲基化和局部区域的过甲基化现象。肿瘤抑制基因发生杂合性丢失(loss of heterozygosity,LOH)、基因突变、异常甲基化等变化导致正常功能丧失时,细胞的增殖失控形成恶性肿瘤。

DNA甲基化是肿瘤抑制基因功能失活和转录抑制的关键机制之一,且在某些情况下可能是唯一的机制。

肿瘤抑制基因启动子的过甲基化,在包括宫颈癌在内的许多肿瘤的发生、发展的各个阶段,均有其特异性的改变模式;在进展的过程中,由于启动子的过甲基化,引起了不同肿瘤抑制基因的失活。表观遗传学改变的累加效应在宫颈由正常组织—癌前病变—宫颈癌的发展过程中有着重要的意义。

参考文献

[1]Identification of DLC?1 expression and methylation status in patientswith non?small?cell lung cancer[J].Hongxiang Feng,Zhenrong Zhang,Xiaowei Wang,Deruo Liu.Molecular and Clinical Oncology.2016(2)

[2]Cancer statistics in China,2015[J].Wanqing Chen,Rongshou Zheng,Peter D.Baade,Siwei Zhang,Hongmei Zeng,Freddie Bray,Ahmedin Jemal,Xue Qin Yu,Jie He.CA:A Cancer Journal for Clinicians.2016(2)

[3]Promoter methylation of BRCA1 is associated with estrogen,progesteroneand human epidermal growth factor receptor?negative tumors and the prognosis ofbreast cancer:A meta-analysis[J].Taiyan Guo,Yongyong Ren,Boyuan Wang,Yingze Huang,Shuting Jia,Wenru Tang,Ying Luo.Molecular and Clinical Oncology.2015(6)

[4]Aberrant DNA methylation of DLX 4 and SIM 1 is a predictive marker for disease progression of uterine cervical low‐grade squamous intraepithelial lesion[J].Junichi Sakane,Kiyomi Taniyama,Kazuaki Miyamoto,Akihisa Saito,Kazuya Kuraoka,Toshinao Nishimura,Kazuhiro Sentani,Naohide Oue,Wataru Yasui.Diagn.Cytopathol..2015(6)

[5]殷爱军.DNA甲基化检测在宫颈癌筛查中的应用[D].山东大学,2016.

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