背景[1-3]
植物基因组DNA提取扩增试剂盒适用于从植物组织和植物干粉中提取总DNA，包括基因组DNA，线粒体DNA以及叶绿体DNA。本品可以处理多至100 mg的样本，可纯化获得为50 kb的DNA，多数片段在20-30 kb之间。
试剂盒采用先进的硅胶膜技术和简单的离心程序，无需乙醇沉淀，简单快速地分离得到高纯度的DNA，有效去除PCR和其他酶促反应的抑制剂。本品可以在1小时内完成总DNA的提取，纯化得到的DNA可以直接用于酶切、PCR、Real-Time PCR、文库构建、Southern Blot、分子标记等下游实验。
植物基因组DNA提取胶图
操作步骤：
1、取植物新鲜组织约100 mg或干重组织约20 mg，加入液氮充分研磨。
2、将研磨后的粉末收集到离心管(自备)中，加入700μl 65℃预热的Buffer GP1(使用前在预热的Buffer GP1中加入β-巯基乙醇，使其终浓度为0.1%)，迅速颠倒混匀后，将离心管置于65℃水浴20分钟，水浴过程中颠倒离心管混匀样品数次。
3、加入700μl氯仿，充分混匀，12000rpm(～～13400×g)离心5分钟。
4、小心将上层水相转入一新的离心管(自备)中，加入700μl Buffer GP2，充分混匀。
5、将步骤4中所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱DM中。若一次不能加完溶液，可分多次转入。12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
6、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
7、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤7.
8、12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
9、将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中，向吸附柱的中间部位悬空加入50-100μlBuffer GE或灭菌水，室温放置2-5分钟，12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
应用[4][5]
用于中药川麦冬及白术特异性PCR鉴定方法的研究
1、用植物基因组DNA提取试剂盒提取麦冬及白术等24种植物的基因组DNA。提取到的植物基因组DNA长度为23 kb左右,OD260/OD280数值在1.7901.932,浓度为121541μg/mL。
2、根据川麦冬分子鉴定标记（命名为CM503）的序列,设计川麦冬特异性引物CM1/CM2,通过在297 bp处是否出现特异性扩增条带,建立了川麦冬特异性PCR鉴定方法。并对该鉴定方法的准确性、灵敏度及对混合样品的检测效果进行研究。该方法能在多种植物中准确鉴别出川麦冬,灵敏度高,重复性好,能检测混合样品。
3、利用RAPD技术对四种不同产地的白术进行分子鉴定标记的筛选,共筛选出了5个分子鉴定标记,包括1个河北小白术分子鉴定标记和4个浙白术分子鉴定标记。
参考文献
[1]A Caco-2 cell-based quantitative antioxidant activity assay for antioxidants[J].Hongxia Wan,Haiyan Sun,Xiangying Yu,Yan Li,Dong Liu.Food Chemistry.2014
[2]Macrophage activation by polysaccharides from Atractylodes macrocephala Koidz through the nuclear factor-κB pathway[J].Guang-Quan Ji,Ren-Qiong Chen,Jian-Xian Zheng.Pharmaceutical Biology.2014(4)
[3]Biological identifications through DNA barcodes[J].Hebert Paul D.N.,Cywinska Alina,Ball Shelley L.,deWaard Jeremy R..Proceedings of the Royal Society B:Biological Sciences.2003(1512)
[4]Determination of the Components in a Chinese Prescription,Yu-Ping-Feng San,by RAPD Analysis[J].Kur-Ta Cheng,Hsin-Sheng Tsay,Chieh-Fu Chen,Tsue-Wei Chou.Planta Med.1998(06)
[5]陈强.中药川麦冬及白术特异性PCR鉴定方法的研究[D].浙江工业大学,2015.